牛副流感病毒3型RT-PCR方法的建立及初步应用

doi:10.3969/j.issn.1674-5817.2018.02.004

实验动物与比较医学 ›› 2018, Vol. 38 ›› Issue (2): 98-104.DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2018.02.004

牛副流感病毒3型RT-PCR方法的建立及初步应用

王吉, 付瑞, 李晓波, 王淑菁, 王莎莎, 李威, 秦骁, 巩薇, 岳秉飞, 贺争鸣

中国食品药品检定研究院国家实验动物微生物遗传检测中心,北京 100050

收稿日期:2017-07-13 出版日期:2018-04-25 发布日期:2018-04-25
作者简介:王吉(1974-),女,副研究员,从事微生物学和免疫学研究。E-mail:wj_nd_jds@sina.com
基金资助:
中国食品药品检定研究院学科带头人培养基金项目(2015X5)

Establishment and Preliminary Application of RT-PCR Method for Detection of Bovine Parainfluenza Virus Type3 in Bovine Origin Samples

WANG Ji, FU Rui, LI Xiao-bo, WANG Shu-jing, WANG Sha-sha, LI Wei, QIN Xiao, GONG Wei, YUE Bing-fei, HE Zheng-ming

National Institutes for Food and Drug Control,National Center for Microbiological and Genetic Monitoring of Laboratory Animal,Beijing 100050,China

Received:2017-07-13 Online:2018-04-25 Published:2018-04-25

摘要/Abstract

摘要： 目的建立用于牛源性样本中牛副流感病毒3型(BPIV3)RT-PCR检测方法。方法选择已发表的BPIV3神经氨酸酶(HN)基因高度保守区域作为靶基因, 设计合成引物, 建立BPIV3 RT-PCR方法。并对方法的特异性、敏感性、重复性、稳定性等进行方法学评价。同时用建立的RT-PCR方法检测137份牛源性样本。结果建立的BPIV3 RT-PCR方法与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛鼻气管炎病毒(BHV-1)、仙台病毒(SV)均无交叉反应; 可检测病毒最小滴度为6 lgTCID₅₀/mL; BPIV3 cDNA在-30 ℃冰箱放置12个月仍可检测出目的条带;应用建立的方法检测137份牛源样本,核酸阳性率为14.6%。结论建立的BPIV3 荧光定量PCR检测方法具有快速、特异、敏感及稳定的特点,可用于牛源性样本中BPIV3核酸的检测。

关键词: 牛副流感病毒3型(BPIV3), PCR, 牛源性样本

Abstract: Objective To establish a RT-PCR method for detection of bovine parainfluenza virus type3 (BPIV3) in bovine origin samples.Methods The primers were designed and synthesized according to the published BPIV3 specific sequences of neuraminidase (HN) gene.RT-PCR method was established,and the specificity,sensitivity,repeatability and stability of this method were tested.Then the method was used to detect 137 bovine origin samples.Results The developed RT-PCR method was no cross reaction with bovine viral diarrhea virus (BVDV),bovine herpesvirus type1(BHV-1),Sendai virus(SV).The lowest detection virus titer is 10^-6/mL.BPIV3 cDNA maintained at -30 ℃ for 12 months,still can enlarge the fragment of about 610 bp visible purpose belt .The nucleic acid positive rate of 137 bovine origin samples were 14.6% about BPIV3 detected by RT-PCR.Conclusion The developed RT-PCR method is good in specificity,sensitivity,stability,and can be used for detecting the BPIV3 in bovine origin samples.

Key words: Bovine parainfluenza virus type3 (BPIV3), PCR, Bovine origin sample

中图分类号:

R372Q95-33

王吉, 付瑞, 李晓波, 王淑菁, 王莎莎, 李威, 秦骁, 巩薇, 岳秉飞, 贺争鸣. 牛副流感病毒3型RT-PCR方法的建立及初步应用[J]. 实验动物与比较医学, 2018, 38(2): 98-104.

WANG Ji, FU Rui, LI Xiao-bo, WANG Shu-jing, WANG Sha-sha, LI Wei, QIN Xiao, GONG Wei, YUE Bing-fei, HE Zheng-ming. Establishment and Preliminary Application of RT-PCR Method for Detection of Bovine Parainfluenza Virus Type3 in Bovine Origin Samples[J]. Laboratory Animal and Comparative Medicine, 2018, 38(2): 98-104.

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牛副流感病毒3型RT-PCR方法的建立及初步应用

Establishment and Preliminary Application of RT-PCR Method for Detection of Bovine Parainfluenza Virus Type3 in Bovine Origin Samples

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