实验动物与比较医学 ›› 2017, Vol. 37 ›› Issue (5): 372-377.DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2017.05.006
孙竹筠1, 蔡骁垚1,2, 熊炜4, 陈懿斐3, 张泉2, 李泽君1, 魏晓锋3, 陈鸿军1
SUN Zhu-yun1, CAI Xiao-yao1,2, XIONG Wei4, CHEN Yi-fei3, ZHANG Quan2, LI Ze-jun1, WEI Xiao-feng3, CHEN Hong-jun1
摘要: 目的 建立快速、准确地同时检测和鉴别大鼠细小病毒(RPV)和大鼠微小病毒(RMV)的双重TaqMan实时荧光定量PCR方法。方法 根据 GenBank中已公布的RMV NTU1株全基因组序列(JX627317.1),在1 705~1 808 nt处设计引物和TaqMan探针,根据RPV NTU1毒株的全基因组序列(JX827169),在863-967nt处设计引物和TaqMan探针。以构建的质粒参考物为模板建立荧光定量PCR检测方法,并对该鉴别检测方法的灵敏度、稳定性和特异性进行评价; 用建立的荧光定量方法对50份临床样品进行检测,并用酶联免疫吸附试验(ELISA)的商品试剂盒进行验证。结果 建立的RMV和RPV的鉴别荧光定量PCR方法标准曲线的线性关系良好,R2值可达0.99,最低检测限均为10拷贝数/μL; 应用鉴别荧光定量PCR方法和ELISA检测试剂盒,对100份大鼠肝脏和50份血清样品病料进行检测,结果均为阴性。结论 建立的RMV和RPV的TaqMan实时荧光定量PCR方法具有特异、灵敏的特点,适用于RMV和RPV的临床监测。
中图分类号: