兔斯氏艾美耳球虫环介导等温扩增技术检测方法的建立

doi:10.3969/j.issn.1674-5817.2018.03.003

实验动物与比较医学 ›› 2018, Vol. 38 ›› Issue (3): 176-181.DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2018.03.003

兔斯氏艾美耳球虫环介导等温扩增技术检测方法的建立

温福利

福州总医院比较医学科,福州 350025

收稿日期:2018-03-09 出版日期:2018-06-25 发布日期:2021-03-01
作者简介:温福利(1987-),男,技师,主要从事实验动物寄生虫学研究。E-mail:wen_fuli@163.com
基金资助:
福建省科技计划引导性项目(2015Y0075);南京军区福州总医院临床应用研究专项(2015L01)

Development of Loop-mediated Amplification for Detection of Eimeria stiedai

WEN Fu-li

Department of Comparative Medicine,Fuzhou General Hospital of Nanjing Command,PLA,Fuzhou 350025,China

Received:2018-03-09 Online:2018-06-25 Published:2021-03-01

摘要/Abstract

摘要： 建立检测兔斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)环介导等温扩增技术(LAMP)的方法。方法根据E.stiedai的ITS1-5.8sRNA-ITS2基因序列设计特异引物, 通过优化反应条件,建立E.stiedai 的LAMP检测方法。结果 25 µL的反应体系中Bst聚合酶的最优添加量是1.5 µL, DNA的最优添加量是75 ng, 环引物、内引物和外引物的最优浓度依次是0.8 µmol/L、1.6 µmol/L和0.15 µmol/L,在63 ℃反应1 h后能特异性地扩增目的基因,并且具有较高的灵敏度。结论建立了E.stiedai的LAMP检测方法,为E.stiedai感染的快速检测提供了新思路。

关键词: 兔斯氏艾美耳球虫, PCR, 环介导等温扩增技术(LAMP), 敏感性, 特异性

Abstract: Objective Loop-mediated amplification (LAMP) approaches was developed for detecting Eimeria stiedai (E.stiedai).Methods Specific primers were designed and synthesized according to a part of the sequence of ITS1-5.8sRNA-ITS2 region of E.stiedai.The LAMP methods of detecting E.stiedai was established by optimizing the reaction conditions.Results In 25 µL reaction system,the optimal dosage of Bst polymerase is 1.5 µL,and the optimal dosage of DNA is 75 ng.The optimal concentration of ring primers,internal primers and external primers is 0.8 µmol/L,1.6 µmol/L and 0.15 µmol/L respectively.The target E.stiedai strip can be specifically amplified when reacted for 1h at 63 ℃.The sensitivity of LAMP was high for determing E.stiedai,and this method could specifically detect the DNA of E.stiedai. Conclusions The LAMP method for detecting E.stiedai has been established,which provides a new method for rapid detection of E.stiedai infection.

Key words: E. stiedai, PCR, Loop-mediated amplification (LAMP), Sensitivity, Specificity

中图分类号:

R-332Q95-33

温福利. 兔斯氏艾美耳球虫环介导等温扩增技术检测方法的建立[J]. 实验动物与比较医学, 2018, 38(3): 176-181.

WEN Fu-li. Development of Loop-mediated Amplification for Detection of Eimeria stiedai[J]. Laboratory Animal and Comparative Medicine, 2018, 38(3): 176-181.

参考文献

[1] 陈士恩,马永华,贾万忠,等.兔斯氏艾美耳球虫毒性研究[J].畜牧与兽医,2010,42(11):80-83.
[2] 孟庆玲,才学鹏,田广孚,等.斯氏艾美耳球虫的致病性及病理学研究[J].中国预防兽医学报,2007,29(10):788-790.
[3] Alrukibat RK,Irizarry AR,Lacey JK,et al.Impression smear of liver tissue from a rabbit[J].Vet Clin Pathol,2010,30(2):57-61.
[4] 乔军,才学鹏,田广孚,等.兰州地区兔球虫种类调查[J].中国兽医杂志,2008,44(8):43-44.
[5] 荆安,李铭,杨长玉,等.重庆市江津地区家兔球虫种类的形态学观察[J].中国动物传染病学报,2002,10(1):35-37.
[6] 陈仁锋,胡玲英,林旋,等.福建省某肉兔场兔球虫病流行病学调查和药物对兔球虫卵囊孢子化影响[C].哈尔滨:中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会论文集,2015.
[7] Notomi T,Okayama H,Masubuchi H,et al.Loop-mediated isothermal amplification of DNA[J].Nucleic Acids Res,2000,28(12):E63.
[8] 李红梅,江晓,刘助红,等.白斑综合症病毒实时荧光LAMP检测方法的建立及应用[J].水生生物学报,2015,39(1):142-148.
[9] Kil EJ,Kim S,Lee YJ,et al.Advanced loop-mediated isothermal amplification method for sensitive and specific detection of Tomato chlorosis virus using a uracil DNA glycosylase to control carry-over contamination[J].J Virol Methods,2015,213:68-74.
[10] Yuan D,Guo D,Liu J,et al.Development of a reverse-transcription loop-mediated isothermal amplification method for detection of rabbit hemorrhagic disease virus[J].J Virol Methods,2013,187(2):274-277.
[11] Fallahi S,Mazar ZA,Ghasemian M,et al.Challenging the loop-mediated isothermal amplification (LAMP) technique for the molecular detection of Toxoplasma gondii[J].Int'l C Lab Clinic,2015,16(10):911-916.
[12] Arimatsu Y,Kaewkes S,Laha T,et al.Specific diagnosis of Opisthorchis viverrini using loop mediated isothermal amplification (LAMP) targeting parasite microsatellites[J].Acta Tropica,2015,141(Pt B):368-371.
[13] Abbasi I,Kirstein OD,Hailu A,et al.Optimization of loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assays for the detection of Leishmania DNA in human blood samples[J].Acta Tropica,2016,162:20.
[14] Gao CH,Ding D,Wang JY,et al.Development of a LAMP assay for detection of Leishmania infantum infection in dogs using conjunctival swab samples[J].Parasites Vectors,2015,8(1):370.
[15] Lucchi NW,Gaye M,Diallo MA,et al.Evaluation of the Illumigene Malaria LAMP:A Robust Molecular Diagnostic Tool for Malaria Parasites[J].Sci Rep,2016,6:36808.
[16] Singla LD,Juyal PD,Sandhu BS,et al.Pathology and therapy in naturally Eimeria stiedae-infected rabbits[J].J Protozoology Res,2000,10:185-191.
[17] 杨正斌,胡庆禄,明文森,等.斯氏艾美耳球虫病的研究进展[J].上海畜牧兽医通讯,2009,54(6):31-33.

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Development of Loop-mediated Amplification for Detection of Eimeria stiedai

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[1]	王娇祥, 王艳, 胡珂, 徐凯祥, 魏太云, 角德灵, 赵恒, 赵红业, 魏红江. 猪血型PCR鉴定方法的建立[J]. 实验动物与比较医学, 2023, 43(6): 585-594.
[2]	赵丽亚, 倪丽菊, 张彩勤, 汤建平, 姚养正, 聂艳艳, 顾晓雪, 赵莹. 基于多重PCR-LDR技术建立近交系大鼠单核苷酸多态性遗传检测方案[J]. 实验动物与比较医学, 2023, 43(5): 548-558.
[3]	于灵芝, 谢建芸, 冯丽萍, 魏晓锋. 金黄色葡萄球菌荧光定量PCR检测方法的建立及其在大鼠、小鼠粪便检测中的应用[J]. 实验动物与比较医学, 2023, 43(5): 566-573.
[4]	刘芳妮, 吕军苹, 柯跃华, 王长军, 郭金鹏. 北京地区实验小鼠诺如病毒流行情况[J]. 实验动物与比较医学, 2023, 43(2): 205-212.
[5]	温福利. 兔斯氏艾美耳球虫感染模型及巢式PCR诊断方法的建立[J]. 实验动物与比较医学, 2020, 40(6): 477-482.
[6]	陈伟盛, 高亚奇, 梁宁, 陈海宇, 陈兴致, 詹纯列, 张修彦. 不同途径感染后5型腺病毒在C57BL/6J小鼠体内的分布[J]. 实验动物与比较医学, 2020, 40(4): 334-.
[7]	闫文卓, 陆涛峰, 周洁, 赵丽丽, 陈洪岩. 水貂阿留申病毒VP2基因TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用[J]. 实验动物与比较医学, 2020, 40(4): 289-.
[8]	姚玎, 周晶, 严国锋, 王会阳, 汪雅荻, 马政文. 盐敏感性高血压小鼠模型的建立[J]. 实验动物与比较医学, 2020, 40(4): 314-.
[9]	彭丽娜, 潘雅君, 张曼, 谷佳男, 徐汪节. 小鼠嗜肺巴斯德杆菌PCR检测方法的优化及在不同样本处理中初步应用#br#[J]. 实验动物与比较医学, 2020, 40(3): 236-.
[10]	王吉, 王莎莎, 付瑞, 王淑菁, 李威, 秦骁, 黄宗文, 李晓波, 巩薇, 岳秉飞, 贺争鸣. 小鼠肝炎病毒实时荧光定量PCR方法的建立及在部分啮齿类动物的应用[J]. 实验动物与比较医学, 2020, 40(2): 95-103.
[11]	李琰, 孔建军, 陈子奇, 祝聪聪. 短发夹RNA TRPV4基因对脊柱侧弯大鼠模型椎间盘退变的抑制作用[J]. 实验动物与比较医学, 2019, 39(5): 356-363.
[12]	马军, 罗居东, 景文江, 张淑莲, 王娟毅, 范志刚. VEGF基因沉默对人肺癌A549细胞放射增敏作用的体内研究[J]. 实验动物与比较医学, 2019, 39(4): 280-286.
[13]	钱强, 徐园, 王亚恒, 周宇荀, 肖君华, 韩琳, 鲍世民, 李凯. 基于多重PCR靶向二代测序的近交系小鼠遗传质量监测方法建立[J]. 实验动物与比较医学, 2019, 39(2): 111-117.
[14]	周洁, 陶凌云, 赵丽娟, 胡建华, 高诚. 鼠痘病毒环介导等温扩增可视化检测方法的建立[J]. 实验动物与比较医学, 2018, 38(5): 343-349.
[15]	纪莲, 马铁, 狄正鸿, 刘冬妍. 小鼠特应性皮炎建模方法的改进[J]. 实验动物与比较医学, 2018, 38(4): 267-271.