当期目录

2018年 第38卷 第3期    刊出日期：2018-06-25

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专家论坛

肿瘤患者来源的异种移植(PDX)模型

师长宏

2018, 38(3):  165-168.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2018.03.001

摘要 ( 581 )   PDF (348KB) ( 380 )  

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将患者新鲜肿瘤组织移植于免疫缺陷小鼠建立的患者来源异种移植(patient-derived xenograft, PDX)模型较好地保持了原发肿瘤的遗传特性和异质性,在肿瘤的个体化治疗研究中具有独特的优势。常用PDX模型的移植方法主要有皮下移植、肾包膜移植和原位移植。移植瘤的溯源方法包括组织形态学比较、肿瘤特异性标志物分析、短片段重复序列分型和测序分析。在PDX模型研究中,需要重点关注影响模型成功率的因素、人源化问题、淋巴瘤的发生和药物评价中治疗策略的选择。虽然从目前临床数据来看,基于PDX模型的个体化治疗还没有显示出实质性疗效,仍处于临床验证阶段,但PDX模型的建立和应用为肿瘤学研究,特别是肿瘤的个体化治疗提供了良好的实验平台。我们在强调PDX模型个体化的同时,要善于应用共性思维,开展基于PDX模型基因组学的肿瘤靶向药物筛选。

论著

小鼠免疫性冠状动脉炎内皮细胞线粒体的动态变化

濮祥强, 王祥, 钱光辉, 马锦, 丁粤粤, 吕海涛

2018, 38(3):  169-175.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2018.03.002

摘要 ( 201 )   PDF (1599KB) ( 379 )  

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目的 初步观察小鼠免疫性冠状动脉炎血管内皮细胞线粒体形态的动态变化,以模拟川崎病(KD)冠状动脉炎相应的内皮细胞及线粒体改变。方法 C57BL/6小鼠随机分为实验组(n=30)和对照组(n=30)。分别连续5 d予腹腔注射白色念珠菌水溶物或磷酸盐缓冲液(PBS)。末次注射后24 h、3 d、7 d、14 d及28 d,每组取6只小鼠处死,取血检测部分血常规及血浆中白细胞介素6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。心脏及冠状动脉标本经苏木精-伊红(HE)染色后行组织病理学检查。透射电子显微镜观察冠状动脉内皮细胞线粒体结构。结果 实验组小鼠血白细胞(WBC)、血小板(PLT)值,血浆IL-6、TNF-α水平,在注射后3 d、7 d时升高(P均<0.05)。冠状动脉组织病理学在初期(3 d)表现为内皮细胞肿胀,中期(14 d)后出现弹力纤维断裂、血管瘤形成。冠状动脉内皮细胞线粒体透射电子显微镜下在初中期(24 h、3 d、7 d、14 d)表现为肿胀、空泡样变,数量减少,嵴模糊,电子密度降低。结论 构建的小鼠模型能够模拟出与人KD相似的免疫性冠状动脉炎特征,提示内皮细胞线粒体参与免疫性冠状动脉炎过程。



兔斯氏艾美耳球虫环介导等温扩增技术检测方法的建立

温福利

2018, 38(3):  176-181.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2018.03.003

摘要 ( 167 )   PDF (974KB) ( 317 )  

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建立检测兔斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)环介导等温扩增技术(LAMP)的方法。方法 根据E.stiedai的ITS1-5.8sRNA-ITS2基因序列设计特异引物, 通过优化反应条件,建立E.stiedai 的LAMP检测方法。结果 25 µL的反应体系中Bst聚合酶的最优添加量是1.5 µL, DNA的最优添加量是75 ng, 环引物、内引物和外引物的最优浓度依次是0.8 µmol/L、1.6 µmol/L和0.15 µmol/L,在63 ℃反应1 h后能特异性地扩增目的基因,并且具有较高的灵敏度。结论 建立了E.stiedai的LAMP检测方法,为E.stiedai感染的快速检测提供了新思路。



成年兔桡骨骨缺损模型的骨缺损长度探讨

宋子鉴, 郑欣, 王进, 张星晨, 郭开今

2018, 38(3):  182-187.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2018.03.004

摘要 ( 428 )   PDF (2277KB) ( 337 )  

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目的 建立成年兔桡骨不同尺寸骨缺损模型,确定成年兔桡骨临界性骨缺损长度。方法 选取8月龄雄性新西兰兔18只,随机分为3组,根据骨缺损长度记为A、B和C组,缺损长度依次为 10 mm、12 mm和15 mm, 每组6只,行双侧手术,共计12侧。分别于术后当日,术后4周、8周和12 周行 CT检查,应用CT-Hedberg评分评价骨缺损愈合情况。于术后 12 周处死实验兔,取出尺桡骨标本,通过大体观察及HE染色组织学观察分析缺损区骨愈合情况。结果 术后所有兔均存活,术后12周大体观察见A组中12例(100%)桡骨断端均有连续性骨痂生成,新生骨表面光滑,塑形良好。B组中11例(91.7%)桡骨断端有连续性骨痂生成。C组缺损断端髓腔封闭,缺损区由纤维组织填充。CT图像显示术后4周C组出现5例尺骨骨折现象,骨折侧未计入统计,12周CT图像可见A组和B组完全桥接的桡骨已形成再通的髓腔,C组断端及缺损尺侧仅有少量新骨生成,髓腔封闭。术后各时间点CT-Hedberg评分: C组(1.14±0.38, 1.29±0.49, 1.57±0.53)明显低于A组(2.42±0.51, 3.17±0.58, 3.75±0.45)和B组(2.25±0.45, 2.67±0.78, 3.50±0.67),(P<0.05), 但A组与B组间差异无统计学意义(P>0.05)。组织学结果示A组和B组缺损已修复完全,髓腔再通,C组缺损区由纤维组织填充。结论 在进行成年兔骨缺损研究时,可选择8月龄雄性新西兰兔桡骨构建15 mm长骨缺损,但同时应注意由于体质量较大带来的易骨折等并发症。



大鼠放射性心脏损伤机制的比较医学意义

马金柯, 高世乐, 胡宗涛, 王崇, 高杉, 董六一, 刘阳, 唐正中

2018, 38(3):  188-193.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2018.03.005

摘要 ( 252 )   PDF (1099KB) ( 398 )  

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目的 探讨大鼠放射性心脏损伤(RIHD)模型的建立及观察不同时间点超声心动图、心电图及血清标志物的变化规律。方法 清洁级SD雄性大鼠90只, 随机分为正常对照组和照射组, 其中照射组分为5 Gy、10 Gy、20 Gy、30 Gy 4个不同剂量组, 每组18只,瓦里安直线加速器分别给予不同剂量照射心脏, 照射后2周、4周、12周末分批处死大鼠。处死前称量大鼠体质量, 超声测左心室射血分数(LVEF)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP),记录心电图,酶联免疫法检测大鼠血清肌酸激酶同工酶(CKMB)、心肌肌钙蛋白I变化(CTnI),称取心脏质量。结果 同正常对照组比较, 照射组大鼠随照射剂量增加, LVEF、LVSP逐渐下降,LVEDP逐渐上升(P<0.05或P<0.01); 心电图随照射剂量增加, 心率加快, ST段抬高明显(P<0.05或P<0.01); 血清CKMB、CTnI值不同程度升高(P<0.05或P<0.01); 30 Gy组同20Gy组比较, 检测指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论 单次20 Gy照射大鼠全心, 至第4周末, 发生大鼠RIHD, 模型制备成功。



恩度联合顺铂治疗恶性腹腔积液的疗效及安全性评估

严俊, 卢国丰, 王纯, 闵新

2018, 38(3):  194-201.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2018.03.006

摘要 ( 326 )   PDF (1281KB) ( 307 )  

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目的 评估恩度联合顺铂治疗恶性腹腔积液的疗效及增效机制。方法 建立小鼠H22肿瘤腹水模型,随机分为生理盐水组、单独恩度组(10 mg/kg/d)、单独顺铂组(2.5 mg/kg/5 d)和恩度顺铂联合组1(每日给予恩度)、联合组2(隔日给予恩度),每组18只。治疗结束后每组取6只动物腹水样品进行蛋白浓度、红细胞数量、肿瘤细胞数量、肿瘤细胞凋亡比例测定,其余小鼠观察各组荷瘤寿命,以对照组基本死亡为实验结束的节点。结果 (1)与生理盐水组相比,恩度、顺铂单独或联合处理组给药期间体质量、腹围增长速度和腹水量均显著降低(P<0.01),其中联合组小鼠体质量、腹围增长速度和腹水量显著低于单纯恩度或顺铂组小鼠(P<0.01)。(2)联合组2小鼠腹水中红细胞含量显著低于生理盐水组、单纯恩度组和单纯顺铂组(P<0.01)。生理盐水组小鼠腹水中肿瘤细胞数量显著高于恩度、顺铂单独或联合处理组(P<0.01)。生理盐水组小鼠腹水中肿瘤细胞凋亡率显著低于单纯顺铂组、联合组1和联合组2(P<0.01),但与单纯恩度组相比差异无统计学意义。(3)Logrank分析显示恩度联合顺铂对于小鼠的生存时间有显著延长作用(P<0.01)。结论 恩度和顺铂联用具有协同作用,可有效抑制小鼠腹水产生,减少腹水中红细胞渗透率,延长小鼠生存期; 其中每日给予恩度效果优于隔日给予。



利用CRISPR/Csa9技术构建溶酶体运输调节因子基因缺陷C57BL/6小鼠

艾东旭, 钟德刚, 孙菲, 李钰, 李崇, 秦佟童, 高梦樵, 董施施, 孙兆增, 李莲瑞

2018, 38(3):  202-206.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2018.03.007

摘要 ( 278 )   PDF (991KB) ( 322 )  

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目的 获得自然杀伤(NK)细胞缺陷的小鼠动物模型,并研究溶酶体运输调节因子(Lyst)基因的功能。方法 采用CRISPR/Cas9技术敲除C57BL/6小鼠的Lyst基因: 针对小鼠Lyst基因编码区第50个外显子,设计CRISPR/Cas9靶点引物(sgRNA),并重组构建pUC57-Lyst-sgRNA载体。将重组质粒体与Cas9质粒分别利用T7 RNA聚合酶体外转录为mRNA,并按比例显微注射入小鼠受精卵,将受精卵移植到受体动物。获得子代小鼠后,利用PCR扩增和测序方法筛选Lyst基因发生改变的动物个体。结果 显微注射移植后获得7只F0代基因敲除小鼠,且毛色均发生了明显的变化。结论 利用CRISPR/Cas9技术可以构建Lyst基因缺陷小鼠,外观表型与已有的文献报道一致。



心理应激大鼠部分福利相关指标测评

梁磊, 董敏, 尤金炜, 胡文娟, 陈莉, 恽时锋

2018, 38(3):  207-211.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2018.03.008

摘要 ( 324 )   PDF (455KB) ( 308 )  

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目的 对心理应激大鼠的部分福利相关指标进行检测并评价其福利水平。方法 选取8周龄雄性SPF级SD大鼠,使用电击旁观的方式对其进行心理应激,构建心理应激模型,观测大鼠的体质量增加、血压变化、脾脏系数和胸腺系数,实时荧光定量PCR和免疫组织化学分别检测大鼠肝细胞内核因子-κB(NF-κB) p65的mRNA和蛋白表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清白介素-2(IL-2)、肾上腺素(EPI)、去甲肾上腺素(NE)、促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮(CORT)水平。结果 与对照组相比, 实验组大鼠日常行为变化明显且体质量增加显著降低、血压升高(P<0.05),脏器系数差异无统计学意义(P>0.05),NF-κB p65的基因和蛋白表达显著升高(P<0.05),血清EPI、NE、ACTH和CORT水平提升而IL-2降低(P<0.05)。结论 电击旁观使实验组大鼠受到心理应激,心理福利受损,进而导致整体福利水平下降。在动物实验研究中,实验人员应对此加以重视,尽量避免对动物实验的不良影响。

睡眠剥夺对小鼠生长发育影响初探

张雅荃, 杨文静, 林丽芳, 阮文婕

2018, 38(3):  212-216.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2018.03.009

摘要 ( 322 )   PDF (627KB) ( 349 )  

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目的 检测睡眠不足对大鼠体质量、部分血液指标、激素水平及免疫水平的影响,研究睡眠对青少年生长发育的作用。方法 利用一种平台式睡眠剥夺仪构建小鼠慢性睡眠剥夺模型,持续观察20 d。观测睡眠剥夺对小鼠体质量及部分血液学指标,血清中皮质酮、生长激素、白介素-2及脾脏皮质酮受体水平,MicroCT检测小鼠骨量指标。结果 与作息正常对照组小鼠比较,睡眠剥夺组小鼠体质量及血液学指标,血清中皮质酮、生长激素、白介素-2(IL-2)及脾脏皮质酮受体(GR)水平都都出现明显变化。MicroCT检测表明,睡眠剥夺组小鼠骨量指标显著劣于对照组。结论 睡眠不足影响小鼠正常生长发育,对小鼠整体的免疫功能和神经系统功能等造成潜在的损害。提示睡眠在青少年生长发育中具有重要作用。



多层试验组合策略对1,2-己二醇眼刺激性/腐蚀性的评价

陈秀娟, 黄宇锋, 刘香梅, 庞增雄, 江漪, 李培宁, 李光先, 陈梓灵, 孙侠, 王强

2018, 38(3):  217-221.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2018.03.010

摘要 ( 205 )   PDF (422KB) ( 292 )  

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目的 尝试采用多层试验组合策略筛查不同浓度的1,2-己二醇眼刺激/腐蚀性。方法 采用自下而上的组合策略,即以“鸡胚绒毛尿囊膜试验(HET-CAM)”和“牛眼角膜混浊/渗透性试验(BCOP)”两项不同敏感程度的体外方法逐层筛查有刺激性的1,2-己二醇浓度范围,最后以兔眼刺激试验(Draize试验)确认其眼刺激性的安全范围。结果 HET-CAM试验: 体积分数0.625%及以下浓度的1,2-己二醇无刺激性,体积分数1.25%有轻刺激性,体积分数2.50%有中度刺激性,体积分数5.00%~10.0%有强刺激性/腐蚀性。BCOP试验: 体积分数2.50%~5.00% 浓度的1,2-己二醇有轻刺激性或刺激性,体积分数10.00%有严重腐蚀性。经Draize试验确认体积分数5.00%浓度的1,2-己二醇无刺激性,体积分数10.00%有轻刺激性。结论 在本试验条件下,1,2-己二醇无眼刺激性的最高浓度为体积分数5.00%。



单核细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ条件敲除小鼠的繁殖和基因型鉴定

郑欣洵, 张智静, 黄宝艺, 廖子君, 刘建军, 罗涛

2018, 38(3):  222-226.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2018.03.011

摘要 ( 222 )   PDF (900KB) ( 301 )  

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目的 构建和鉴定单核细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)条件性基因敲除小鼠。方法 将引进的纯合子PPARγ^-loxp小鼠和单核细胞特异性表达cre重组酶的Cx3cr1^cre小鼠进行杂交,得到F1代,用RT-PCR方法鉴定其基因型。将F1代进行自交产生F2代,鉴定基因型,筛选实验所需的PPARγ条件性基因敲除小鼠(实验组, PPARγ-ko)及对照组小鼠(对照组, PPARγ-wt),利用免疫荧光及Western blotting方法鉴定敲除效果。结果 筛选出基因型为PPARγ ^loxp/loxp Cx3cr1^cre/- 和PPARγ ^loxp/loxp Cx3cr1^cre/cre的小鼠即为本实验所要构建的单核细胞PPARγ条件基因敲除小鼠,基因型为PPARγ ^loxp/loxp Cx3cr1^-/- 小鼠为实验对照组小鼠。结论 成功获得单核细胞PPARγ条件性基因敲除小鼠,为单核细胞上PPARγ功能的研究提供小鼠模型。



刺山柑果实精制提取物抗类风湿关节炎的实验研究

周海凤, 乐心逸, 王娴娴, 丁广宇, 李默影, 沈龙海, 吴彤

2018, 38(3):  227-230.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2018.02.012

摘要 ( 304 )   PDF (374KB) ( 352 )  

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目的 评价刺山柑果实精制提取物对弗氏完全佐剂和II型胶原引起的大鼠类风湿性关节炎的治疗效果。方法 采用弗氏完全佐剂和II型胶原为造模剂分别建立大鼠类风湿性关节炎模型,测定刺山柑精制提取物对关节炎大鼠足趾肿胀抑制率和相关炎症因子表达的影响。结果 刺山柑精制提取物对大鼠佐剂性关节炎继发性病变具有一定的治疗作用,治疗效果均持续至实验结束,其中刺山柑高剂量的抑制率基本稳定在20%以上,对大鼠关节周围组织滑膜内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)、干扰素-γ(IFN-γ)有一定下调作用。刺山柑提取物对II型胶原诱导的大鼠类风湿关节炎足趾肿胀也具有显著抑制作用, 100 mg/kg剂量组在给药后3 d, 开始出现一定程度的抑制足关节的肿胀,给药后14 d抑制率达到40.3% (P<0.05)。结论 刺山柑精制提取物具有抑制弗氏完全佐剂和II型胶原引起的大鼠类风湿性关节炎的作用,能有效缓解其关节附件的肿胀,其作用机制可能是通过下调TNF-α、IL-1、IFN-α等相关炎症因子的表达。

独立通风笼盒内换气次数与压差差异性分析

张建平, 傅江南

2018, 38(3):  231-235.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2018.03.013

摘要 ( 513 )   PDF (1093KB) ( 338 )  

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目的 评估独立通风笼盒(IVC)使用过程中,在设定参数下,同一笼架内各个笼盒换气次数及内外压差之间的差异。方法 屏障环境内,以单面IVC为检测对象,设备参数设置:换气次数50次/h、40次/h,压差+20 Pa、+10 Pa,检测笼盒送风口的风速及笼盒内外压差。结果 设定换气次数与实测笼盒内换气次数存在差异,实测值在设定值的±30次/h范围内波动,并且同一笼架上笼盒与笼盒之间的换气次数实测值差异较大,在30次/h~60次/h; 不同位置笼盒间内外压差的差异较小,实测值均在设定值的±10 Pa范围内波动。结论 为保证笼盒内微环境的一致性,减少环境差异对实验结果的影响,需进一步研究如何将同一架IVC笼盒之间的换气次数和内外压差波动控制在较低范围。



经验交流

正常成年雄性食蟹猴部分免疫功能指标观测

韦毅, 符明泰, 阳明, 黄卫宣, 蓝娇, 覃喜军, 玉宁

2018, 38(3):  236-238.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2018.03.014

摘要 ( 348 )   PDF (337KB) ( 334 )  

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目的 提供实验用正常雄性食蟹猴血液免疫功能的部分指标参考值。方法 选取人工饲养成年雄性食蟹猴36只,体质量3.5±0.5 kg,检测其外周血T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)、免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)、补体(C3、C4)以及γ-干扰素(IFN-γ)、白介素-2(IL-2)、白介素-5(IL-5)、白介素-6(IL-6)、 白介素-10(IL-10)、 白介素-18(IL-18)等细胞因子。结果 获得了正常成年雄性食蟹猴细胞免疫、体液免疫部分相关正常参考值,结果表明正常成年雄性食蟹猴的血液学、T细胞亚群、免疫球蛋白、细胞因子和补体等指标均比较稳定。结论 提供了正常成年雄性食蟹猴血液免疫学相关的背景数据,为其在免疫领域的研究应用提供参考。

哺乳仔鼠数量控制对KM小鼠生长发育和繁殖性能影响初探

杨健莉, 王猛, 李兆阳, 郑志红

2018, 38(3):  239-241.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2018.03.015

摘要 ( 187 )   PDF (291KB) ( 247 )  

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目的 探讨控制封闭群KM雌鼠带仔数量对小鼠繁殖性能和生长发育的影响。方法 选取6~8周龄 KM小鼠70对,随机分2组,每组35对,按雌雄1∶1长期同居方式交配,通过对其雌鼠带仔数量进行控制的方式,观测其对雌鼠子代的生长发育以及自身繁殖性能的影响。结果 实验组小鼠的出生体质量与对照组相比较,第1胎无差异,第2胎和第3胎比较存在差异(P<0.05); 1~3胎实验组产仔数与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05), 实验组仔鼠的离乳体质量、离乳存活率、胎间隔与对照组比较均存在差异(P<0.05)。结论 控制雌鼠带仔数量对封闭群KM小鼠繁殖性能和生长发育有一定的影响。

五黑鸡血液生理和生化指标的测定

袁进, 吴清洪, 罗烘权, 刘闻, 陈傍柱, 顾为望

2018, 38(3):  242-244.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2018.03.016

摘要 ( 291 )   PDF (257KB) ( 314 )  

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目的 测定五黑鸡正常血液生理和生化指标的基础数据。方法 采集五黑鸡的血液样品,应用全自动五分类血球仪和血液生化分析仪分别检测其血液生理和生化指标,并进行统计分析。结果 (1)公鸡的红细胞总数、血红蛋白、红细胞比积、平均红细胞体积、平均红细胞血红蛋白、平均红细胞血红蛋白浓度显著高于母鸡(P<0.01或P<0.05); (2)公鸡的红细胞分布宽度变异系数、红细胞分布宽度标准差显著低于母鸡(P<0.01或P<0.05); (3)公鸡的钙显著高于母鸡(P<0.01); (4)公鸡的甘油三酯白蛋白、总胆固醇、总胆红素、总蛋白、球蛋白显著低于母鸡(P<0.01或P<0.05); (5)其它生理和生化指标公母之间差异不显著。结论 获得了广东地区五黑鸡12项血液生理和15项生化指标的正常参考值,为其应用研究提供基础数据。