布氏杆菌PCR检测方法的建立

›› 2003, Vol. 23 ›› Issue (3): 154-156.

布氏杆菌PCR检测方法的建立

上海市实验动物质量监督检验站,上海 200032

收稿日期:2002-05-25 修回日期:2003-04-20 出版日期:2003-01-25 发布日期:2013-03-19
基金资助:
上海市科技发展基金资助项目(004919071)

Detection of Brucella (R、S) Using Polymerase Chain Reaction

Shanghai Quality Monitoring Center For Laboratory Animals,Shanghai 200032,China

Received:2002-05-25 Revised:2003-04-20 Online:2003-01-25 Published:2013-03-19

摘要/Abstract

摘要： 根据编码31-kDa布氏杆菌蛋白的基因（BSCP31），设计两对引物。对布氏杆菌R型（粗糙型）抗原及S型（光滑型）抗原、大肠杆菌、溶血性链球菌、嗜肺巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、螺旋杆菌、绿脓杆菌分别采用两种提取、纯化DNA的方法，并以纯化的各细菌DNA为模板，分别进行内、外引物PCR反应及套式PCR反应，反应时以灭菌超纯水作为空白对照。结果显示：进行内、外引物PCR反应和套式PCR反应时，布氏杆菌R型及S型均出现预期的扩增带594bp、460bp及460bp，且套式扩增后条带亮度明显增强，而作为验证PCR特异性或对照的大肠杆菌、溶血性链球菌、嗜肺巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、螺旋杆菌、绿脓杆菌、灭菌超纯水均无扩增带。验证敏感性时用外引物对布氏杆菌R型、S型DNA进行扩增后，最低可检测到1Pg的布氏杆菌DNA。

关键词: 布氏杆菌R型(粗糙型)抗原, 布氏杆菌S型(光滑型)抗原, PCR

Abstract: DNA extracted from Brucella （Rough、Smooth） and five non-Brucella micro-organisms were amplified by PCR using 2 pairs of primers specific for the genes encoding a 31-kDa Brucclla protein. Two DNA fragment of the expected size （591 bp and 460 bp） were amplified from Brucella （R、S） and one DNA fragment of the expected size （460 bp ） was amplified from Brucella using NT-PCR ,but no band was observed in five non-Brucella micro-organisms. The sensitivhy of the reaction was determined with different concentrations of genomic Brucella （R、S） DNA. As few as 1 pg DNA could be detected by this method.

Key words: Brucella （Rough、Smooth） antigen, PCR

王胜昌，邵伟娟，谢建云，高诚. 布氏杆菌PCR检测方法的建立[J]. , 2003, 23(3): 154-156.

WANG Sheng-chang,SHAO Wei-juan .XIE Jian yun ,GAO Cheng. Detection of Brucella (R、S) Using Polymerase Chain Reaction[J]. , 2003, 23(3): 154-156.

[1]	王娇祥, 王艳, 胡珂, 徐凯祥, 魏太云, 角德灵, 赵恒, 赵红业, 魏红江. 猪血型PCR鉴定方法的建立[J]. 实验动物与比较医学, 2023, 43(6): 585-594.
[2]	赵丽亚, 倪丽菊, 张彩勤, 汤建平, 姚养正, 聂艳艳, 顾晓雪, 赵莹. 基于多重PCR-LDR技术建立近交系大鼠单核苷酸多态性遗传检测方案[J]. 实验动物与比较医学, 2023, 43(5): 548-558.
[3]	于灵芝, 谢建芸, 冯丽萍, 魏晓锋. 金黄色葡萄球菌荧光定量PCR检测方法的建立及其在大鼠、小鼠粪便检测中的应用[J]. 实验动物与比较医学, 2023, 43(5): 566-573.
[4]	刘芳妮, 吕军苹, 柯跃华, 王长军, 郭金鹏. 北京地区实验小鼠诺如病毒流行情况[J]. 实验动物与比较医学, 2023, 43(2): 205-212.
[5]	温福利. 兔斯氏艾美耳球虫感染模型及巢式PCR诊断方法的建立[J]. 实验动物与比较医学, 2020, 40(6): 477-482.
[6]	陈伟盛, 高亚奇, 梁宁, 陈海宇, 陈兴致, 詹纯列, 张修彦. 不同途径感染后5型腺病毒在C57BL/6J小鼠体内的分布[J]. 实验动物与比较医学, 2020, 40(4): 334-.
[7]	闫文卓, 陆涛峰, 周洁, 赵丽丽, 陈洪岩. 水貂阿留申病毒VP2基因TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用[J]. 实验动物与比较医学, 2020, 40(4): 289-.
[8]	彭丽娜, 潘雅君, 张曼, 谷佳男, 徐汪节. 小鼠嗜肺巴斯德杆菌PCR检测方法的优化及在不同样本处理中初步应用#br#[J]. 实验动物与比较医学, 2020, 40(3): 236-.
[9]	王吉, 王莎莎, 付瑞, 王淑菁, 李威, 秦骁, 黄宗文, 李晓波, 巩薇, 岳秉飞, 贺争鸣. 小鼠肝炎病毒实时荧光定量PCR方法的建立及在部分啮齿类动物的应用[J]. 实验动物与比较医学, 2020, 40(2): 95-103.
[10]	钱强, 徐园, 王亚恒, 周宇荀, 肖君华, 韩琳, 鲍世民, 李凯. 基于多重PCR靶向二代测序的近交系小鼠遗传质量监测方法建立[J]. 实验动物与比较医学, 2019, 39(2): 111-117.
[11]	温福利. 兔斯氏艾美耳球虫环介导等温扩增技术检测方法的建立[J]. 实验动物与比较医学, 2018, 38(3): 176-181.
[12]	孙靖谕, 谢灵志, 冯洁, 于宁, 钱淼, 曹舒扬, 张泉. 啮齿类螺杆菌SYBR Green Ⅱ荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 实验动物与比较医学, 2018, 38(2): 91-97.
[13]	王吉, 付瑞, 李晓波, 王淑菁, 王莎莎, 李威, 秦骁, 巩薇, 岳秉飞, 贺争鸣. 牛副流感病毒3型RT-PCR方法的建立及初步应用[J]. 实验动物与比较医学, 2018, 38(2): 98-104.
[14]	艾东旭, 孙菲, 李钰, 法云智, 孙兆增, 李莲瑞. 嗜肠型小鼠肝炎病毒RT-PCR诊断方法的建立及其应用[J]. 实验动物与比较医学, 2018, 38(1): 36-39.
[15]	温福利, 郑和平, 党源, 薛来恩, 张诗兰. 兔斯氏艾美耳球虫荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 实验动物与比较医学, 2017, 37(6): 448-454.