目的 建立UAS-Irk3-EGFP转基因果蝇品系,为转基因果蝇品系的构建与鉴定提供标准化流程,并为内向整流钾通道(inwardly rectifying potassium channel,Irk)3基因的功能研究提供果蝇模型支撑,丰富国家果蝇资源。 方法 利用PCR技术,从果蝇cDNA文库中扩增出Irk3基因的编码序列(coding sequences,CDS)。利用同源重组技术将其与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因一起克隆到pUAST-attB载体中。通过显微注射技术,将获得的重组质粒注射入果蝇品系attP-25C6的胚胎中,利用红眼表型筛选能表达UAS-Irk3-EGFP的转基因红眼果蝇,然后通过与平衡子果蝇杂交进行背景纯化和平衡保种,最后通过PCR扩增和翅成虫盘免疫荧光染色方法鉴定其正确性。 结果 构建了pUAST-attB-Irk3-EGFP重组质粒,并成功获得UAS-Irk3-EGFP转基因果蝇品系。PCR扩增结果证实,Irk3-EGFP基因序列已成功整合到转基因果蝇品系的基因组中。翅成虫盘免疫染色实验发现,翅囊区特异性表达的MS1096-GAL4驱动Irk3基因在翅成虫盘翅囊表达,后隔间特异性表达的hh-GAL4可驱动Irk3基因在翅成虫盘后隔间表达。 结论 成功构建了UAS-Irk3-EGFP转基因果蝇品系,为应用半乳糖凝集素4(galectin-4,GAL4)/上游激活序列(upstream activating sequence,UAS)基因表达调控系统深入研究Irk3基因功能奠定了基础。