当期目录

2013年 第33卷 第3期    刊出日期：2013-06-25

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论著

东方田鼠指名亚种的线粒体基因组序列分析及系统进化研究

高骏, 倪丽菊, 孙凤萍, 王金祥, 胡建华, 高诚, 李凯, 肖君华, 周宇荀

2013, 33(3):  167-173.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2013.03.001

摘要 ( 145 )   PDF (426KB) ( 168 )  

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目的 获得东方田鼠指名亚种的线粒体基因组序列,为东方田鼠的遗传结构和系统进化研究提供分子数据。方法 照近缘的台湾田鼠的线粒体基因组序列(Microtus kikuchii,NC_003041.1)设计9对引物,利用传统和长距离PCR结合引物步移的策略,首次完成了东方田鼠指名亚种的线粒体基因组测序(Genbank:JF261174),并对该物种的线粒体基因组序列进行了分析,并利用线粒体基因组上的细胞色素b(Cyt b)基因序列构建系统进化树,探讨中国东方田鼠的系统进化关系。结果 东方田鼠指名亚种的线粒体基因组全长16 312 bp,含有13个蛋白质编码基因、2个rRNA基因、22个tRNA基因和一个非编码控制区。同时,在其控制区,分别发现了终止序列区(EATS1、EATS2)、中央保守区1(CSB1)的相关保守序列和一个保守的Poly(C)₁₀区段。在比较了东方田鼠指名亚种和长江亚种以及近缘物种的线粒体轻链复制起点(O_L)序列的二级结果,发现茎环结构在茎和邻近序列处表现出高度保守性,而在环上的序列却存在着一定差异。通过Cyt b基因构建的系统进化树表明中国的东方田鼠与分布于俄罗斯的Microtus middendoffi田鼠,表现出最亲缘的系统进化关系。结论 中国东方田鼠指名亚种线粒体基因组各编码基因的长度、位置符合典型的脊椎动物特征,本研究的结果将为中国东方田鼠的系统进化、亚种分类研究提供重要的数据参考。



比格犬雌激素受体β的原核表达、纯化及鉴定

许琴, 赵彦斌, 任秀梅, 孙兆增, 叶华虎, 刘一, 李微, 白杰英, 曾林, 胡仲明

2013, 33(3):  174-179.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2013.03.002

摘要 ( 161 )   PDF (374KB) ( 198 )  

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

目的 研究比格犬雌激素受体β(Estrogen receptor β, ERβ)及其剪接异构体在生殖调控中的功能, 构建比格犬ERβ的pMAL-p5x/ERβ 480 DE3 E.coli重组菌株, 并进行纯化和鉴定。方法 Trizol 法提取发情期比格犬下丘脑总RNA,RT-PCR获得cDNA ,以NCBI网站公布的比格犬ERβ基因CDS序列设计特异性引物,扩增ERβ保守区基因编码序列(16-496 bp),连接原核表达载体pMAL-p5x,筛选、鉴定阳性克隆并测序。将重组质粒转化至大肠杆菌DH5〈,再转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,表达产物经经麦芽糖亲和树脂(Amylom Resin)亲和层析分离纯化,并对纯化的融合蛋白进行鉴定。结果 构建了pMAL-p5x/ERβ480重组质粒,在DE3大肠杆菌中诱导表达出MBP-ERβ融合蛋白, SDS-PAGE显示分子量约为60 000, 与预期结果一致; 优化了MBP-ERβ表达体系的表达条件: 分别在0.2%葡萄糖, 100 µg/ml Ampcillin, 0.1mmol/L IPTG 37℃培养5 h或在0.2%葡萄糖,50 µg/ml Ampcillin, 0.2mmol/L IPTG 37℃培养3 h,融合蛋白表达效果比较好。结论 构建了pMAL-p5x/ERβ480原核表达重组质粒,获得了比格犬MBP-ERβ融合蛋白,为犬种属特异性ERβ多克隆抗体的制备及功能分析奠定了基础。



流感病毒气溶胶感染小鼠模型的初步研究

杨玉琴, 朱召芹, 徐春华, 何静, 彭秀华, 周晓辉, 胡芸文, 周文江

2013, 33(3):  180-184.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2013.03.003

摘要 ( 236 )   PDF (465KB) ( 181 )  

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

目的 对模拟流感自然感染方式建立的小鼠流感模型进行初步探索。方法 分别选用H1N1 FM1和H1N1 PR8两种病毒采用气雾攻击的方法感染ICR小鼠,每日称小鼠体质量,肉眼观察小鼠状态,于感染后5 d、12 d、21 d处死小鼠,取肺脏称其湿重,分别做肺脏的病毒测定及病理观察。结果 感染两种毒株的ICR小鼠在感染早中期临床症状明显,体质量严重下降,肺指数明显升高,病理变化明显,出现了典型肺水肿,肺间质炎及肺充血等病变,并在感染早期小鼠肺脏中检测到流感病毒。感染晚期小鼠症状逐渐减轻,未检测到病毒。结论 通过气雾攻击的方法来建立流感病毒气溶胶感染小鼠模型是可行的。



病毒滴度和插入子长度对慢病毒载体介导的转基因小鼠整合率的影响

郭歆冰, 龚秀丽, 陈雁雯, 方彧聃, 张敬之

2013, 33(3):  185-189.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2013.03.004

摘要 ( 154 )   PDF (273KB) ( 216 )  

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

目的 研究病毒滴度和插入子长度对于慢病毒载体介导的转基因小鼠整合率的影响。方法 制备了18种不同长度插入子的慢病毒载体,通过受精卵卵周隙注射的方法获得转基因小鼠,然后通过PCR技术检测其转基因小鼠的整合率,并对所生成的数据进行统计学分析。结果 插入子长度在较短(<2 kb)的情况下,病毒滴度达到2×10⁸就可获得较高的整合率,在插入子长度稍长(4~5 kb)的情况下,需要1×10⁹滴度才能获得较高的整合率,而在插入子长度大于6 kb的情况下,未能用该方法获得转基因小鼠。结论 滴度的增加能有效提高慢病毒载体制备转基因小鼠的整合率,而当滴度适中(~2×10⁸)时,整合率随插入子长度的增加而下降。

家兔心搏骤停复苏模型的病理生理改变

张东, 李南, 李洪祥, 王育珊

2013, 33(3):  190-194.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2013.03.005

摘要 ( 176 )   PDF (286KB) ( 177 )  

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

目的 探讨窒息法致家兔心搏骤停模型模拟临床心肺复苏前后的病理生理改变的特点及用于复苏后研究的优势。方法 选择清洁级成年家兔15只, 采用窒息法建立心搏骤停动物模型,气管夹闭窒息时间为7 min,观察气管夹闭心搏骤停前后血压和心电图变化, 记录心搏骤停时间、自主循环恢复时间、自主呼吸恢复时间以及心搏骤停时心电图表现,计算自主循环恢复率以及6 h、12 h、24 h、48 h存活率。检测心搏骤停复苏前后动脉血气分析。结果 ①气管夹闭前平均动脉压(MAP)为116.18±8.89 mmHg, 心肺复苏自主循环恢复即刻为121.03±16.75 mmHg, 15 min后下降并维持在90.92±13.68 mmHg。心搏骤停时心电图表现为室颤2例、电机械分离11例、心跳停搏呈现为直线2例,从自主循环恢复后到30 min,ST段出现由明显抬高到恢复至基线的演变过程。②自主循环恢复率为100%(15/15),自主循环恢复时间为147.60±22.09 s,自主呼吸恢复时间为403.33±130.18 s。自主循环恢复后家兔6 h、12 h、24 h、48 h存活率分别为93.33%(14/15)、73.33%(11/15)、53.33%(8/15)、26.67%(4/15)。③自主循环恢复即刻与窒息前相比,动脉血气指标中 pH 值明显下降(P<0.05),氧分压(PO₂)、二氧化碳分压(PCO₂)和乳酸(Lac)明显升高(P<0.05)。结论 窒息法致家兔心搏骤停模型能基本模拟临床心肺复苏后病理生理改变的特点,可相对满足复苏后实验指标检测和血流动力学监测等研究需求、实验操作易于掌握、以及不开胸等技术优势。



犬双上肺静脉起搏建立心房颤动模型的研究

陈世权, 盛夏, 黄松群, 宫鑫成, 蒋晨阳

2013, 33(3):  195-199.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2013.03.006

摘要 ( 150 )   PDF (306KB) ( 182 )  

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

目的 探讨经快速双上肺静脉起搏方法制作犬心房颤动动物模型的可行性。方法 10只健康比格犬经开胸途径植入十极导管电极,快速(1 200次/min)起搏双上肺静脉6 h。观察房颤诱发情况,对起搏前后双上肺静脉及左心耳电生理检查结果进行比较。结果 8只犬完成实验,房颤诱导成功率80%。高频率刺激诱发的房颤模型能使双上肺静脉区及左心耳部位ERP先降低后升高(145±15.1 vs 130±16.3 vs 136±11.4, P=0.004、P=0.494),存在统计学显著差异。诱发房颤5 h后,总的房颤诱发窗口(∑WOV) 较基线略有升高,但无明显统计学差异(26.7±65.3 vs 20±52.9,P>0.05)。而在乙酰胆碱诱发房颤(第0 h、1 h、3 h、6 h)时,可见房颤的诱发时间呈现先上升后下降的过程,而这种趋势与ERP的变化趋势存在相关性。结论 经快速双上肺起搏方法制作心房颤动动物模型,可用于房颤发病机理、电生理重构、心肌重构、分子生物学改变等临床研究,也可用于心动过速性心肌病及部分心力衰竭的研究。



超声心动图技术多参数评价兔左室舒张功能的探讨

王汸, 杨俊华

2013, 33(3):  200-203.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2013.03.007

摘要 ( 122 )   PDF (252KB) ( 220 )  

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目的 应用超声心动图技术多参数评价正常新西兰白兔左心室舒张功能,建立正常参考值,比较各种方法的相关性。方法 测量左心室舒张功能方法包括脉冲多普勒技术、组织多普勒技术以及彩色多普勒M型法。正常新西兰白兔25只, 应用脉冲多普勒测定二尖瓣口舒张早期血流速度(E)、舒张晚期血流速度(A), 计算E/A比值, 应用组织多普勒技术(DTI)测定舒张早期二尖瓣环室间隔及侧壁运动速度平均值(e’), 舒张晚期运动速度平均值(a’), 计算e’/a’比值, E/e’比值。应用脉冲多普勒测量等容舒张时间(IVRT)。应用彩色多普勒联合M超测量二尖瓣口舒张期血流传播速度(Vp)。计算各参数正常值。结果 25只兔中有3只因为心率快导致E、A峰,e’、a’峰融合,故无法获得E/A、e’/a’比值。心率参考范围为180~324次/分,多参数获得正常参考值范围如下: E峰、A峰、E/A比值分别为0.44~1.05 m/s、0.23~0.47 m/s、1.47~2.67。e’峰、a’峰、e’/a’比值、E/e’比值分别为6.96~19.92 cm/s、3.82~12.77 cm/s、0.88~2.58、2.70~8.80。IVRT和Vp分别为22.90~58.06 ms,38.90~81.52。E/A与e’/a’相关性显著。E/A、e’/a’与IVRT、Vp无统计学意义的相关性。结论 脉冲多普勒技术及组织多普勒技术能够在以兔为模型的心血管疾病研究中敏感有效地评价兔左心室功能。



长爪沙鼠小鼠肝炎病毒抗体ELISA检测方法的建立与初步应用

卫礼, 王吉, 付瑞, 李晓波, 王淑菁, 岳秉飞, 贺争鸣

2013, 33(3):  204-209.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2013.03.008

摘要 ( 191 )   PDF (266KB) ( 221 )  

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目的 建立长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)抗体ELISA检测方法。方法 培养DBT细胞,接种MHV-V1、MHV- V3、MHV-JHM病毒,制备DBT正常抗原和MHV-V1、MHV- V3、MHV-JHM 三价特异抗原,滴定酶结合物和抗原最佳工作浓度,并进行精密性、敏感性、稳定性、特异性实验。结果 正常抗原、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为0.4 µg/ml、5 µg/ml和1∶5000; 正常抗原、特异抗原批内变异系数分别为7.9%和6.8%, 批间平均变异系数分别为12.7%和11.2%; 检测灵敏度为1∶1280; 与小鼠仙台病毒(SV)、小鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于25%。结论 建立的ELISA方法重复性、稳定性好,特异性、敏感性强。可用于沙鼠MHV抗体的检测。

Beagle犬活体取胎及其成纤维细胞的培养

张敦伟, 王晓民, 连雪科, 刘运忠, 高翔, 倪庆纯

2013, 33(3):  210-214.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2013.03.009

摘要 ( 128 )   PDF (606KB) ( 171 )  

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目的 探索活体手术获取Beagle犬孕龄30 d胎儿及其成纤维细胞培养的方法。方法 对雌性Beagle犬进行发情鉴定并适时配种受孕,然后用B超观察胎儿发育情况确定其妊娠时间。当母犬妊娠30 d时,采用外科手术取出一侧子宫角的胎儿,去除胎儿的头、四肢及内脏,用胰酶消化法分离胎儿成纤维细胞,并在体外进行培养和传代。同时保留母犬另一侧子宫角的胎儿,术后加强护理使剩余胎儿继续发育。结果 本实验成功分离培养出Beagle犬胎儿成纤维细胞;在保留母体的情况下让另一侧子宫角胎儿继续发育并出生成活。结论 本实验保留了母体,使其仍具有繁殖力,可作为胚胎移植的受体;另一侧子宫角胎儿的正常发育并出生成活,可为今后体细胞克隆Beagle犬提供具有全同胞关系的正常对照犬。



WHBE兔与日本大耳白兔肠道淋巴细胞免疫活性的比较研究

胡慧颖, 王志远, 柯贤福, 余陈欢, 屠珏, 张利棕, 应华忠

2013, 33(3):  215-217.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2013.03.010

摘要 ( 142 )   PDF (163KB) ( 193 )  

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目的 比较白毛黑眼(WHBE)与日本大耳白(JW)兔肠道淋巴细胞免疫活性的差异。方法 分别选取离乳和2月龄雄性WHBE兔、JW兔各8只,采用percoll分离液和Ficoll分离液,分别测定其小肠上皮层淋巴细胞; MTT 法检测刀豆蛋白A(ConA)、脂多糖(LPS)对兔小肠上皮层淋巴细胞增殖的影响。结果 成年WHBE兔小肠淋巴细胞受ConA、LPS刺激的增殖程度比成年JW兔的明显升高,具有显著性差异。结论 WHBE兔的肠道淋巴细胞较JW兔更易受丝裂原的刺激作用而诱导激活,这可能是其肠易激的原因之一。

剖宫产与体外授精技术在小鼠生物净化中的应用

朱莲, 孔彭成, 王美珊, 陈学进, 蒋满喜, 崔立

2013, 33(3):  218-221.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2013.03.011

摘要 ( 127 )   PDF (225KB) ( 183 )  

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目的 采用剖宫取胎和体外受精对微生物级别达不到SPF级的小鼠进行生物净化。方法 对于具有正常繁殖能力的小鼠品系,通过对阴道栓的检查和触诊确定剖宫产取胎时间,采用子宫摘除手术对小鼠进行剖宫产,取出仔鼠用SPF级受体母鼠代乳,观察代乳情况及代乳仔鼠成活率; 对于繁殖力较差或者丧失繁殖能力的品系,采取辅助生殖的方式,采集小鼠精子和卵子,在HTF液中受精,培养3.5 d后的胚胎移植到SPF级受体母鼠子宫内,待产仔。结果 两种方式净化的小鼠断奶后进行微生物检测,均达到SPF级。结论 对微生物级别达不到SPF级但不含垂直传播病原体的小鼠,采用两种方式可有效提高小鼠的微生物等级。

两种麻醉方法对巴马小型猪麻醉效果比较

蔡丽萍, 赵善民, 余琛琳, 汤球

2013, 33(3):  222-224.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2013.03.012

摘要 ( 176 )   PDF (174KB) ( 188 )  

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目的 对小型猪戊巴比妥钠静脉麻醉与异氟烷吸入麻醉的麻醉效果进行对比分析。方法 将10头巴马小型猪随机分为两组,分别用戊巴比妥钠静脉麻醉与异氟烷吸入麻醉,记录麻醉检测指标。结果 两组小型猪的麻醉时间以及不良反应率均无显著性差异(P>0.05),而麻醉起效时间、术后苏醒时间以及术中躁动例数差异显著(P<0.05)。两组实验组在平均动脉压(MAP)、心率(HR)等指标方面,对比差异显著(P<0.05),而在脉搏血氧饱和度(SPO₂)、PH酸碱程度值等指标差异不显著(P>0.05)。结论 戊巴比妥钠组需在实验过程中添加麻醉剂量,而异氟烷吸入麻醉组麻醉起效快,效果良好,苏醒迅速,适合各种要求的实验操作。

实验动物电子标签与质量追溯系统

贺争鸣, 巩薇, 李根平

2013, 33(3):  225-228.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2013.03.013

摘要 ( 121 )   PDF (246KB) ( 202 )  

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结合我国实验动物质量监管体系完善、控制“非标”动物进入使用环节的问题,探讨建立实验动物质量追溯体系,并对系统构成和技术要点进行论述。

可定制数据项的数据采集系统的设计与实现

王晓明, 刘万策, 陈梅丽, 李会萍, 黄韧

2013, 33(3):  229-233.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2013.03.014

摘要 ( 115 )   PDF (436KB) ( 174 )  

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分析我国实验动物数据资源共享与数据采集存在的问题,结合实验动物资源数据库的建设,提出可定制数据项的数据采集系统的解决方案,并设计开发完成,通过在实际项目中应用,实现了不同种类实验动物生物学特性数据项的灵活设置和保存。本文以实验动物长爪沙鼠的血液生理数据为例,介绍数据采集系统的设计与实现,为相关资源单位建设资源数据库提供参考。



比格犬全身动脉铸型的制作方法

李凯, 廖华平, 詹炳汇, 郑和平, 叶梅, 周宇晶, 王文静, 李长征

2013, 33(3):  234-236.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2013.03.015

摘要 ( 106 )   PDF (275KB) ( 188 )  

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为提供比格犬全身动脉的立体构筑,应用管道铸型技术,过氯乙烯为填充剂,制作比格犬全身动脉铸型标本。结果表明：比格犬全身动脉铸型外观完整美观, 血管的整体性和连贯性好,立体感强,能充分显示比格犬全身动脉的分支分布和走行途径,所做标本对相关生物医学研究具有重要应用价值。



综述

哺乳动物乳腺上皮细胞的研究和应用

闫亚彬, 黄英

2013, 33(3):  237-242.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2013.03.016

摘要 ( 149 )   PDF (403KB) ( 176 )  

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转基因动物-乳腺生物反应器的研制是近十多年发展起来的一项生物制药方法,具有巨大的应用前景。外源目的基因载体的构建是制备转基因动物-乳腺生物反应器成功的关键技术环节,因此建立简单、快捷检测外源基因载体构建的合理性和表达情况的方法至关重要。由于乳腺上皮细胞能较真实反映哺乳动物乳腺生长发育及泌乳的各项生理功能,开展体外培养哺乳动物乳腺上皮细胞,可作为转基因动物制备过程中载体有效性检验的一种体外模型途径。本文将对哺乳动物乳腺组织的结构和乳腺上皮细胞体外培养的增殖能力、诱导、维持分化的特点,以及乳腺上皮细胞的培养和它在生物、医学领域中的应用研究进行简要概述。

东方田鼠抗日本血吸虫病相关免疫学研究进展

邵国艳, 谢建云, 高诚

2013, 33(3):  243-246.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2013.03.017

摘要 ( 143 )   PDF (254KB) ( 181 )  

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东方田鼠是一种可以感染血吸虫但是感染后不致病的哺乳动物,体内可能存在对日本血吸虫先天的、可遗传的抗性机制。近年来随着东方田鼠实验动物化,人们对东方田鼠的这种抗性机制进行了深入研究。本文对近几年东方田鼠抗日本血吸虫病相关免疫学研究进展做一综述,从非特异性免疫和特异性免疫角度对东方田鼠这一特殊抗性进行总结及展望。

生平介绍

本刊国际编委 Harry Rozmiarek博士生平

本刊编辑部

2013, 33(3):  247-248.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2013.03.018

摘要 ( 95 )   PDF (283KB) ( 146 )  

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