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2019年 第39卷 第2期    刊出日期：2019-04-25

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人物

刘老: 我们学习的榜样

漆畹生

2019, 39(2):  83-84.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.02.001

摘要 ( 163 )   PDF (239KB) ( 262 )  

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德高望重 无私奉献--深切缅怀刘瑞三教授

尹松林

2019, 39(2):  85-87.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.02.002

摘要 ( 247 )   PDF (349KB) ( 242 )  

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深切怀念中国实验动物科学界泰斗--河南省实验动物事业的功勋人物刘瑞三先生

王纯耀, 邢金山, 薛敬礼, 杜春燕, 杨晓, 阴志刚, 时颂东

2019, 39(2):  88-89.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.02.003

摘要 ( 238 )   PDF (223KB) ( 255 )  

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专家论坛

我国比较医学研究的开创、发展及在现代医学科学发展中的意义和作用

贺争鸣, 李冠民, 荣瑞章, 李根平

2019, 39(2):  90-93.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.02.004

摘要 ( 273 )   PDF (461KB) ( 275 )  

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基于有关文献和实验动物科学研究现状,阐述我国比较医学研究工作的开创、比较医学学科的建立与发展,使国内同行和广大读者了解我国比较医学的发展过程,以及比较医学的发展对现代医学和人类健康的重要意义,也对随着生命科学的迅猛发展并取得一系列突破性进展的同时出现的新问题而赋予比较医学研究的发展方向进行展望。

论著

内窥镜引导气管注入博来霉素建立小鼠肺纤维化模型

余华军, 吴尚, 黄慧, 林碧云, 伍俊, 欧华俊, 张海涛

2019, 39(2):  94-98.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.02.005

摘要 ( 383 )   PDF (1029KB) ( 403 )  

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目的 建立在内窥镜直视下气管插管法,并采用此方法建立博来霉素诱导小鼠肺纤维化模型。方法 将5只C57BL/6J小鼠,在内窥镜直视下进行小鼠气管插管,建立气管插管方法及步骤。将10只C57BL/6J小鼠随机均分为对照组和实验组,按照建立的方法进行气管给药,对照组气管插管给予50 µL的生理盐水,实验组气管插管给予50 µL 3.5 mg/kg的博来霉素,观察各组小鼠的死亡率。灌注后28 d,颈椎脱臼法处死小鼠,比较两组小鼠肺组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和羟脯胺酸(HYP)、丙二醛(MDA)含量。取小鼠肺组织进行病理切片,HE、Masson染色观察肺组织的病理情况。结果 15只C57BL/6J小鼠采用多功能内窥镜直视下气管插管均能成功,无小鼠因插管后死亡,5只给予印度墨汁的预实验小鼠气管下端开始直至肺部均有黑色物质均匀分布。与对照组比较,实验组小鼠肺组织中HYP、MDA含量增高(P<0.01); GSH-PX、SOD含量降低(P<0.01)。进行HE、Masson染色显示,与对照组比较,实验组小鼠肺组织胶原沉积严重,病理学表现符合肺纤维化改变。结论 采用多功能内窥镜直视下气管给药的方法,给药量准确、安全、简便。以此方法建立博来霉素诱导小鼠肺纤维化的模型成功率高,值得推广应用。



胰岛素抵抗合并高尿酸血症大鼠模型的建立及其比较

刘孟渊, 冯学轩, 黎莉斯, 张美艺

2019, 39(2):  99-104.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.02.006

摘要 ( 366 )   PDF (1880KB) ( 373 )  

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目的 为制备成功、稳定的胰岛素抵抗合并高尿酸血症(IR-HUA)模型,比较了IR-HUA 模型、高尿酸血症(HUA) 模型、胰岛素抵抗(IR)模型的制备方法。方法 选用40只雄性SD大鼠,按体质量随机分为正常对照组(A组)、HUA模型组(B组)、IR-HUA模型组(C组)和IR模型组(D组), A组、B组喂饲普通饲料及饮用水; C组、D组喂饲自制高脂饲料及质量分数10%果糖水; 造模8周, 第6周始, B组、C组大鼠每日灌胃酵母膏(16 g/kg) 21 d; 于实验第6、8周末取样检测相关指标。结果 实验第8周末, 与A组相比, B组血尿酸(SUA)、尿尿酸(UUA)、尿酸排泄总量及尿酸排泄分数(FEUA)均升高; C组空腹胰岛素(FINS)、稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)值均下降,UUA浓度、FEUA均升高, 排尿体积下降; D组Lee’s指数下降, 空腹血糖(FPG)升高, FINS下降, UUA浓度升高, 排尿体积、尿酸排泄总量均下降, 血、尿肌酐均升高。结论 给雄性SD大鼠每日灌胃酵母膏(16 g/kg) 21 d可制备HUA模型; 单纯给予高脂高糖饮食8周诱导大鼠IR模型欠理想, 大鼠未呈现出明显的IR特征, IR-HUA模型制备方法有待进一步完善。此外, 高脂高糖饮食可致大鼠排尿体积减少, 尿酸排泄下降; 并可致大鼠胰岛素分泌减少, 导致血糖升高。



树鼩肺成纤维细胞的分离、鉴定和传代培养

王文广, 匡德宣, 陆彩霞, 罕园园, 李娜, 仝品芬, 孙晓梅, 代解杰

2019, 39(2):  105-110.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.02.007

摘要 ( 332 )   PDF (1750KB) ( 462 )  

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目的 建立适用于树鼩肺成纤维细胞的分离、鉴定和传代培养方法。方法 分别采用组织块贴壁培养法和胰酶消化法,分离培养新生树鼩肺成纤维细胞,通过倒置显微镜观察细胞生长情况,用波形蛋白(Vimentin)对分离的成纤维细胞进行免疫荧光鉴定; 传代培养并开展冻存复苏实验,采用MTS法绘制细胞生长曲线,以人胚肺二倍体成纤维细胞(KMB-17)作对照。结果 通过组织块贴壁培养法和胰酶消化法均可获取树鼩肺成纤维细胞,细胞主要呈现梭形,波形蛋白免疫荧光鉴定普遍呈阳性,与KMB-17一致。树鼩肺成纤维细胞可连续传代4~5次,经冻存复苏后细胞仍能保持活力,以5×10⁴细胞/mL的密度传代,细胞可在3 d左右进入对数生长期。结论 组织块贴壁培养法和胰酶消化法均可有效获取树鼩的肺成纤维细胞,可为肺部相关疾病的体外研究提供实验材料。



基于多重PCR靶向二代测序的近交系小鼠遗传质量监测方法建立

钱强, 徐园, 王亚恒, 周宇荀, 肖君华, 韩琳, 鲍世民, 李凯

2019, 39(2):  111-117.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.02.008

摘要 ( 293 )   PDF (1130KB) ( 332 )  

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目的 建立基于多重PCR靶向二代测序的小鼠遗传质量监测方案。方法 从小鼠单核苷酸多态性(SNP)数据库筛选出相对均匀分布在20条染色体上的112个SNP位点,然后对SNP位点附近片段进行多重PCR扩增,建库后进行Illumina高通量测序,对原始测序数据进行生物信息学分析获得SNP信息。结果 测序结果显示, 多重PCR的扩增子均一性好, 各片段成功率高达90%以上, 特异性高, 高深度测序条件下, SNP位点的等位基因比例趋近于1或0, 符合纯合子条件; 分析4批近交系小鼠样本, 表明SNP位点成功鉴定的比例分别为99.82％, 92.00％, 99.10％和90.35％, 且所有小鼠品系个体的SNP位点均为纯合,并被成功确定为目标品系; 品系间两两比较,最大差异数为73个,最小差异数为3个,差异位点平均数为53个,差异中位数为60个,显示出本方案对常见近交系小鼠品系分辨率较高。结论 多重PCR靶向二代测序方案的SNP分型方案是一种准确、快速、高效的基因分型方案,可用于遗传质量检测和品系鉴定。



饮食中糖分控制对雌黑腹果蝇寿命和中肠干细胞的影响

唐润东, 宋思远, 吴薇

2019, 39(2):  118-123.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.02.009

摘要 ( 266 )   PDF (2400KB) ( 341 )  

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目的 研究饮食中糖分控制对雌黑腹果蝇寿命和中肠干细胞的影响, 以期给女性树立正确科学的饮食观念提供一定的指导。方法 用不同糖分食物喂养雌黑腹果蝇,称体质量,记录存活数目, 解剖中肠进行免疫荧光染色。结果 随着年龄的增长, 正常组(以正常培养基含糖量为100%糖分)和高糖组(正常组糖分基础上增加20%糖分)雌黑腹果蝇体质量均呈现先缓慢上升, 21 d后快速上升趋势,高糖组体质量增长高于正常组。高糖喂养后用糖分梯度递减培养基喂养,体质量随着糖分减少呈先下降后上升趋势,体质量增长最慢的是用50%糖分培养基喂养。随着处理时间的延长,雌黑腹果蝇在前14 d基本没有死亡,14 d以后,死亡数量剧增,21 d以后呈直线下降趋势。梯度糖分控制后,雌黑腹果蝇平均寿命有不同程度的增加,高糖喂养后喂食50%糖分培养基寿命增长最明显。喂养28 d的雌黑腹果蝇,高糖组肠道比正常组增粗,细胞形态变化大,排列无序,高糖喂养后用糖分梯度培养基喂养,50%和25%糖分处理组恢复效果较好,但不能恢复到正常饮食组状态。结论 糖分对雌黑腹果蝇的体质量、寿命和中肠干细胞形态和分布都有一定的影响。适当减少糖摄入量对果蝇体质量增长有减缓作用,对寿命有增加作用,中肠损伤相对较轻。



不同时间紫外线照射对SD大鼠的皮肤光毒性损伤作用

孙侠, 刘香梅, 庞增雄, 刘冬虹, 徐颖愉, 江漪, 李敏, 丘智峰, 黄宇锋

2019, 39(2):  124-130.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.02.010

摘要 ( 379 )   PDF (2211KB) ( 396 )  

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目的 比较不同辐射时间紫外线引起的SD大鼠皮肤光毒性损伤差异。方法 采用长波紫外线(UVA,320~400 nm)(4.5 mJ·cm^-2·s^-1)+中波紫外线(UVB,280~320 nm)(0.036 mJ·cm^-2·s^-1)辐射的方法,建立皮肤光毒性损伤大鼠模型, 每周照射2次, 连续4周, 模型1组、模型2组、模型3组累计辐射时间分别为342 min、440 min、520 min,正常对照组不予照射。实验结束后,对大鼠皮肤进行组织病理学观察,并采用免疫组化方法检测皮肤黑色素瘤特异性标记(HMB45)、波形蛋白(Vimentin)、内皮细胞标记(CD34)的表达情况。结果 与正常对照组比较,模型1组、模型2组、模型3组均出现部分表皮角化过度、表皮厚薄不均、皱纹加深、毛囊增大、皮脂腺增生等变化; 另外, 随着辐射时间的增加, 表皮病变更为严重, 表皮厚度、皮脂腺横截面积更大, 皮肤损伤评分也更高。与正常对照组比较, 各模型组大鼠的皮肤成纤维细胞Vimentin、真皮层毛细血管CD34表达均增多, 其中模型2组、模型3组增多更为明显; 模型2组、模型3组皮肤HMB45表达明显增多。结论 随着紫外线辐射时间的延长, 皮肤损伤程度也逐渐加重, 本研究或可为防晒功效评价提供合适的动物模型。



不同剂量X射线全身照射对小鼠部分免疫器官的影响

于纯淼, 付佳琪, 赵力松, 国立东, 郭旭, 于栋华

2019, 39(2):  131-135.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.02.011

摘要 ( 584 )   PDF (358KB) ( 397 )  

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目的 探讨不同剂量X射线辐照后对小鼠免疫器官的影响。方法 BALB/c小鼠192只,随机分为正常对照组和单次照射2.0 Gy、3.0 Gy、4.0 Gy、5.0 Gy、6.0 Gy组。分别于照射后24 h、48 h、96 h、192 h每组取8只小鼠颈椎脱臼处死后取胸腺和脾脏称重,计算胸腺指数和脾脏指数。并测定组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。结果 相同取样时间,各辐照剂量组小鼠胸腺、脾脏指数及SOD含量与对照组比较均显著降低,且与辐照剂量呈正相关。MDA含量与对照组比较均显著升高,且均有明显剂量效应。相同辐照剂量,不同取样时间,各组小鼠胸腺、脾脏指数均呈现先降低后升高趋势。胸腺中MDA含量随取样时间延长呈升高趋势,脾脏中MDA含量呈先升高后降低趋势。胸腺中SOD含量随取样时间延长呈先升高后降低趋势; 辐照2.0 Gy、3.0 Gy、4.0 Gy组小鼠脾脏中SOD含量随取样时间延长呈升高趋势,辐照5.0 Gy、6.0 Gy组小鼠脾脏中SOD含量随取样时间延长呈先升高后降低趋势。结论 在所观察照射剂量和测定时间内,X射线对小鼠免疫器官的影响与辐照剂量相关。不同组织重量恢复时间不同,且低剂量辐照开始恢复时间先于高剂量辐照。

中毒剂量下维生素D₃对大鼠肾脏的影响

史向华, 杨文彬, 薛润苗, 赵静宇, 续艳, 张彩峰, 柴秋彦

2019, 39(2):  136-139.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.02.012

摘要 ( 274 )   PDF (381KB) ( 323 )  

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目的 观察维生素D₃(VitD₃)中毒剂量下对大鼠的血液及肾脏生化指标的影响。方法 SPF级SD大鼠随机分为正常对照组、VitD₃低剂量组(1 875 IU/kg组)、VitD₃中剂量组(3 750 IU/kg组)、VitD₃高剂量组(7 500 IU/kg组)和VitD₃超高剂量组(15 000 IU/kg组), 每日灌胃(ig)1次, 连续3周, 实验结束,检测相关指标。结果 各组大鼠血清中尿素氮(BUN)和肌酐(Cre)随着剂量降低呈明显下降、血清Ca²⁺含量随着剂量增加呈明显上升,超氧化物歧化酶(SOD)含量随着剂量增加逐渐降低; 大鼠血清丙二醛(MDA)含量随着剂量增加逐渐升高; 各组肾组织Ca²⁺含量随着剂量增加逐渐升高、MDA含量在 1 875 IU,7 500 IU时,与对照组比较差异无统计学意义。结论 VitD₃在7 500 IU/kg,15 000 IU/kg的剂量时,对实验大鼠的肾功能生化指标BUN、Cre及血清Ca²⁺含量均有明显影响,表明Vit D₃在此剂量范围内,是引起实验大鼠肾脏毒性的剂量。

基于Sequenom MassARRAY SNP技术检测嗅觉受体基因与工作犬嗅探能力的关联性研究

高一龙, 贺星亮, 强京宁, 宋珍华, 温海, 陶晓冉, 孙勇, 秦海斌, 包喜军, 孟戈, 朱骞

2019, 39(2):  140-145.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.02.013

摘要 ( 209 )   PDF (429KB) ( 370 )  

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目的 开展嗅觉受体基因(OR)的单核苷酸多态性(SNP)与工作犬嗅探能力之间的关联性研究。方法 应用Sequenom MassARRAY SNP技术,对OR基因的单核苷酸多态性(SNP)位点进行检测,并分析不同SNP基因型与工作犬嗅探能力之间的关联性。结果 建立的Sequenom MassARRAY SNP检测OR基因分型技术方法,68个SNP位点在史宾格犬、拉布拉多犬和德国牧羊犬3个犬种中检出率在90%以上; 显示与工作犬的嗅探能力呈一般统计学意义上显著相关(P<0.05)的SNP位点有23个,但经过多重检验bonferroni (BONF)法和FDR_BH法校正后,表明COR52AC1_436、rs850523383、CfOR0149_364和CfOR0055_265这4个SNP位点与嗅探能力分别呈显著相关(P<0.05)和极显著相关(P<0.01)。结论 筛选出显著影响工作犬嗅探能力的主效OR 基因SNP位点4个,初步建立了一种适用于史宾格犬、拉布拉多犬和德国牧羊犬这3个工作犬种,鉴定其嗅探能力的分子遗传学检测方法。

C57BL/6J背景基因修饰小鼠精子冷冻保种及品系恢复方法

牛博文, 陈丽香, 朱孟敏, 彭秀华, 秦波音, 李峰

2019, 39(2):  146-150.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.02.014

摘要 ( 365 )   PDF (420KB) ( 389 )  

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目的 建立一种高效的C57BL/6J背景基因修饰小鼠的精子冷冻及体外受精（IVF）方法。方法 以C57BL/6J小鼠为研究对象,围绕冷冻保护液、冷冻精子浓度、复苏后精子处理方法及IVF培养液等方面进行研究,IVF后2-细胞发育率作为冷冻和复苏效率评价标准,对比各组之间发育情况。结果 以R18S3(含质量比为18%棉子糖和3%脱脂奶粉)、M-R18S3冷冻保护液[含终浓度为477 µmol/L硫代甘油(MTG)的R18S3冷冻液]进行精子冷冻,复苏后在HTF培养液中进行IVF,2-细胞发育率分别为8.4%和20.6%; 以R18S3和M-R18S3作为冷冻保护液,以含浓度为1 mmol/L还原性谷胱甘肽(GSH)的HTF培养液进行IVF,2-细胞发育率分别为25.0%和43.5%。高浓度精子冷冻及复苏法可获得64.2%的2-细胞发育率; 选取4种C57BL/6J 背景基因修饰小鼠进行精子冷冻及IVF,2-细胞发育率34%~90%,胚胎移植后出生率40%~57%。结论 M-R18S3作为冷冻保护液,采用高浓度精子冷冻法进行精子冷冻,冷冻精子复苏后进行受精滴洗涤筛选,以含1 mmol/L GSH的HTF培养液进行冷冻精子IVF,此技术体系可以作为C57BL/6J背景基因修饰鼠的保种及品系恢复手段。

经验交流

动物实验室实习生培训带教规范初探

王诺, 李金凤, 黄小红, 郑佳琳, 饶子亮, 王刚, 邝少松

2019, 39(2):  151-154.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.02.015

摘要 ( 163 )   PDF (454KB) ( 252 )  

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为提升比较医学实验室实习生的实践水平,提高实习教学效果, 作者总结了所在实验室实习生带教管理工作, 建立科学、合理的实习生培训管理规范, 加强巩固实习生的基本理论知识, 进行动物实验技能培训, 锻炼实习生发现问题、分析问题和解决问题的能力, 把实习生培养成具有一定科研综合能力的人才方面进行了带教规范的有益探索与实践, 促进实验动物专业人才的成长。

综述

基于动物福利的雌性生殖发育毒性体外培养技术研究进展

陆琴, 周跃华, 唐海飞, 王智文, 张婷

2019, 39(2):  155-162.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.02.016

摘要 ( 341 )   PDF (566KB) ( 368 )  

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生殖发育毒性研究的目的是通过动物试验检测外源物质对哺乳动物生殖功能和发育过程的影响,预测其可能产生的对生殖细胞、受孕、妊娠、分娩、哺乳等亲代生殖机能以及对子代胚胎/胎儿发育、出生后发育的不良影响。整体动物雌性生殖发育毒性研究方法一直广泛应用于药品、食品、化学品和化妆品的生殖发育毒性评价中,经过多年的验证并取得稳定的实验结果和结论。但它存在的主要问题是不敏感、周期长、所需受试样品量多,特别是由于体内实验生殖功能主要是以与生殖发育后果有关的参数作为基础,因此难以揭示毒性作用位点和毒性作用机制。雌性生殖发育毒理学替代方法指在生殖发育毒性评估中能尽可能替代动物实验、减少所需动物数量或使动物实验程序得以优化而减少动物痛苦的任何方法或程序,特别是在外源毒性物质的毒性初步评价上,可以作为整体动物实验的补充。本文将从雌性生殖系统细胞和组织培养、胚胎细胞和组织培养、乳腺细胞培养几大类总结雌性生殖发育毒性体外培养技术及研究进展,为雌性生殖发育毒性体外培养技术研究提供参考。

兔VX2肿瘤模型的研究进展

米金霞, 方肇勤

2019, 39(2):  163-168.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.02.017

摘要 ( 557 )   PDF (553KB) ( 420 )  

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兔VX2肿瘤模型是目前比较常用的建立在较大动物身上的移植瘤模型,因其体型大、容易复制,在外科手术、影像学及介入治疗等研究中广泛应用。VX2肿瘤模型的建立方法包括肿瘤细胞悬液接种和肿瘤组织块移植接种,根据移植部位的不同可以建立多种类型的肿瘤模型,研究人员可以根据自己的研究目的选用合适的类型。随着影像设备的普及和新兴局部治疗方法的应用,采用兔VX2肿瘤模型的研究越来越多。本文从VX2细胞的来源及生物学特性、兔VX2肿瘤模型的建立方法及类型、研究应用等方面进行综述。