猪细小病毒核酸检测实验室能力验证结果分析

doi:10.12300/j.issn.1674-5817.2022.137

实验动物与比较医学 ›› 2022, Vol. 42 ›› Issue (6): 490-497.DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2022.137

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猪细小病毒核酸检测实验室能力验证结果分析

李晓波(), 王吉(), 王洪, 王淑菁, 王莎莎, 秦骁, 李威, 岳秉飞, 付瑞()()

中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所, 国家啮齿类实验动物资源库, 北京 102629

收稿日期:2022-08-31 修回日期:2022-12-02 出版日期:2022-12-25 发布日期:2023-01-04
通讯作者: 付瑞（1978—），男，硕士，副研究员，研究方向：实验动物病毒学。E-mail： furui78@nifdc.org.cn。ORCID： 0000-0003-0321-2773
作者简介:李晓波（1980—），男，硕士，副研究员，研究方向：实验动物病毒学。E-mail： lxb8493059@163.com；
王吉（1974—），女，硕士，研究员，研究方向：实验动物学。E-mail： wj_nd_jds@sina.com
基金资助:
国家重点研发计划“基础科研条件与重大科学仪器设备研发”重点专项“实验动物新发病原检测与抗体评价关键技术体系建立”(2021YFF0703100)

Analysis of Laboratory Proficiency Testing Results on the Detection of Porcine Parvovirus Nucleic Acid

Xiaobo LI(), Ji WANG(), Hong WANG, Shujing WANG, Shasha WANG, Xiao QIN, Wei LI, Bingfei YUE, Rui FU()()

National Rodent Laboratory Animal Resources Center, Institute for Laboratory Animal Resources, National Institutes for Food and Drug Control, Beijing 102629, China

Received:2022-08-31 Revised:2022-12-02 Published:2022-12-25 Online:2023-01-04
Contact: FU Rui (ORCID: 0000-0003-0321-2773), E-mail: furui78@nifdc.org.cn

摘要/Abstract

摘要：

目的通过实施猪细小病毒（porcine parvovirus，PPV）核酸检测实验室能力验证计划，了解相关检测实验室的检测水平，规范PPV核酸检测。方法 2022年1—8月，中国食品药品检定研究院组织开展针对猪血清样品中PPV核酸检测的实验室能力验证计划（编号NIFDC-PT-364）。按照中国合格评定国家认可委员会（China National Accreditation Service for Conformity Assessment，CNAS）相关准则，通过在PPV为阴性的猪血清中加入灭活的PPV，制备能力验证样品。样品经均一性、稳定性测试合格后，发放各参加实验室。每个实验室发放3个样品。要求各实验室对PPV核酸进行定性检测，并在规定时间提交结果及相关原始记录。最后对各实验室提交的结果进行汇总分析。结果共有9家实验室报名参加本次能力验证，均在规定时间内反馈结果。其中8家实验室结果符合预期，占比88.9%；1家实验室的3个样品均检测为PPV阳性，与预期结果不符，判为不满意。大多数实验室采用实时荧光PCR检测方法，核酸提取采用国产试剂的实验室占多数，而PCR扩增试剂以进口试剂为主，采用不同品牌的试剂未对检测结果产生影响。个别实验室存在实验结果图谱不清晰、原始记录信息不全等问题。结论各参加实验室大多具备PPV核酸检测能力，检测细节方面还有待提升。

关键词: 猪细小病毒, 能力验证, 核酸, 聚合酶链式反应

Abstract:

Objective To understand the testing level of the relevant laboratories and standardize the detection of porcine parvovirus (PPV) nucleic acid by implementing laboratory proficiency testing plan of the PPV nucleic acid testing. Methods From January to August 2022, NIFDC organized the laboratory proficiency testing plan for PPV nucleic acid detection (plan number: NIFDC-PT-364). According to relevant CNAS standards, inactivated PPV was added into the serum of PPV negative pigs to prepare proficiency testing samples. After passing the homogeneity and stability tests, the samples should be distributed to the participating laboratories. Each laboratory was distributed 3 samples and was required to conduct qualitative detection of PPV nucleic acid, and submit the results and relevant original records within the specified time. Finally, the results submitted by each laboratory were summarized and analyzed. Results A total of 9 laboratories registered to participate in this proficiency testing, and all of them fed back the results within the specified time. Among them, the results of 8 laboratories met the expectations, accounting for 88.9%. Three samples from one laboratory were all tested positive for PPV, which was not consistent with the expected results, and it was judged as unsatisfactory. Most laboratories adopted real-time fluorescent PCR detection method, and used domestic reagents for nucleic acid extraction, while the PCR amplification reagents were mainly imported reagents. The use of different brands of reagents didn't have impact on the detection results. There were some problems in some laboratories, such as unclear diagram of experimental results and incomplete information of original records. Conclusion Most of the participating laboratories are capable of PPV nucleic acid detection, but the detection details need to be improved.

Key words: Porcine parvovirus, Proficiency testing, Nucleic acid, PCR

中图分类号:

Q95-33

李晓波, 王吉, 王洪, 王淑菁, 王莎莎, 秦骁, 李威, 岳秉飞, 付瑞. 猪细小病毒核酸检测实验室能力验证结果分析[J]. 实验动物与比较医学, 2022, 42(6): 490-497.

Xiaobo LI, Ji WANG, Hong WANG, Shujing WANG, Shasha WANG, Xiao QIN, Wei LI, Bingfei YUE, Rui FU. Analysis of Laboratory Proficiency Testing Results on the Detection of Porcine Parvovirus Nucleic Acid[J]. Laboratory Animal and Comparative Medicine, 2022, 42(6): 490-497.

图/表 3

表1 样品均一性及稳定性测试结果（实时荧光PCR的Ct值）

Table 1 Testing results for the homogeneity and stability of samples (Ct value in real-time PCR)

样品序号 Sample No.	均一性 Homogeneity		保存稳定性 Preservation stability				运输稳定性 Transport stability
	均一性 Homogeneity		4 ℃		37 ℃		运输稳定性 Transport stability
	Ⅰ类阳性	Ⅱ类阳性	Ⅰ类阳性	Ⅱ类阳性	Ⅰ类阳性	Ⅱ类阳性	Ⅰ类阳性	Ⅱ类阳性
1	23.7	23.3	24.4	26.5	26.7	27.9	24.2	24.4
2	23.4	22.4	24.7	27.8	26.7	27.8	23.5	24.0
3	23.2	23.7	24.6	26.9	26.1	27.0	23.7	23.9
4	23.1	24.3	25.1	27.4	26.8	28.0	25.1	23.6
5	23.4	24.2	24.9	27.3	26.8	27.9	24.8	25.3
6	21.6	23.7	24.8	26.9	26.7	28.4	24.6	25.2
7	22.5	24.3	25.4	27.4	27.0	28.6	25.3	25.7
8	22.1	23.3	26.4	27.6	27.8	29.2	-	-
9	22.6	23.9	26.3	27.5	27.6	28.6	-	-
10	20.9	24.4	25.8	27.5	27.4	28.6	-	-
11	23.4	23.6	26.0	27.7	26.7	28.3	-	-
12	23.0	24.2	25.9	27.7	27.1	28.2	-	-
13	23.3	22.9	25.9	27.3	27.1	28.5	-	-
14	23.0	23.8	26.0	27.7	27.0	28.6	-	-
15	23.8	23.8	25.4	27.2	27.5	29.3	-	-
16	22.4	23.9	-	-	-	-	-	-
$x ¯$ ±s	22.8±0.79	23.7±0.54	25.4±0.65	27.4±0.36	27.0±0.44	28.3±0.57	24.5±0.69	24.6±0.81
变异系数/% Coefficient of variation	3.5	2.3	2.6	1.3	1.6	2.0	2.8	3.3

表1 样品均一性及稳定性测试结果（实时荧光PCR的Ct值）

Table 1 Testing results for the homogeneity and stability of samples (Ct value in real-time PCR)

样品序号 Sample No.	均一性 Homogeneity		保存稳定性 Preservation stability				运输稳定性 Transport stability
	均一性 Homogeneity		4 ℃		37 ℃		运输稳定性 Transport stability
	Ⅰ类阳性	Ⅱ类阳性	Ⅰ类阳性	Ⅱ类阳性	Ⅰ类阳性	Ⅱ类阳性	Ⅰ类阳性	Ⅱ类阳性
1	23.7	23.3	24.4	26.5	26.7	27.9	24.2	24.4
2	23.4	22.4	24.7	27.8	26.7	27.8	23.5	24.0
3	23.2	23.7	24.6	26.9	26.1	27.0	23.7	23.9
4	23.1	24.3	25.1	27.4	26.8	28.0	25.1	23.6
5	23.4	24.2	24.9	27.3	26.8	27.9	24.8	25.3
6	21.6	23.7	24.8	26.9	26.7	28.4	24.6	25.2
7	22.5	24.3	25.4	27.4	27.0	28.6	25.3	25.7
8	22.1	23.3	26.4	27.6	27.8	29.2	-	-
9	22.6	23.9	26.3	27.5	27.6	28.6	-	-
10	20.9	24.4	25.8	27.5	27.4	28.6	-	-
11	23.4	23.6	26.0	27.7	26.7	28.3	-	-
12	23.0	24.2	25.9	27.7	27.1	28.2	-	-
13	23.3	22.9	25.9	27.3	27.1	28.5	-	-
14	23.0	23.8	26.0	27.7	27.0	28.6	-	-
15	23.8	23.8	25.4	27.2	27.5	29.3	-	-
16	22.4	23.9	-	-	-	-	-	-
$x ¯$ ±s	22.8±0.79	23.7±0.54	25.4±0.65	27.4±0.36	27.0±0.44	28.3±0.57	24.5±0.69	24.6±0.81
变异系数/% Coefficient of variation	3.5	2.3	2.6	1.3	1.6	2.0	2.8	3.3

表2 参加能力验证实验室采用的检测方法

Table 2 Testing methods adopted by labs participating in proficiency testing

实验室代码Code of laboratory	检测方法 Test method	参考标准 Reference standards	核酸提取试剂 Nucleic acid extraction reagent		PCR试剂 PCR reagent
实验室代码Code of laboratory	检测方法 Test method	参考标准 Reference standards	来源 Source	批号 Batch number	来源 Source	批号 Batch number
070	实时荧光PCR	SN/T 1919—2016	天根生化	无	-	-
849	实时荧光PCR	-	-	有	-	有
358	实时荧光PCR	企业SOP	-	-	-	-
052	实时荧光PCR	SN/T 1919—2016	麦诺迪（上海）	有	麦诺迪（上海）	有
174	PCR	SN/T 1919—2016	德国QIAGEN	有	日本TAKARA	有
553	实时荧光PCR	SN/T 1919—2016	新百基生物	有	艾科瑞生物	有
532	PCR	企业SOP	日本TAKARA	有	日本TAKARA	有
965	实时荧光PCR及PCR两种方法	SN/T 1919—2016	天根生化	有	日本TAKARA	有
860	实时荧光PCR	SN/T 1919—2016	日本TAKARA	有	日本TAKARA	有

表3 9个实验室的猪细小病毒核酸检测能力验证结果

Table 3 Proficiency testing results of 9 laboratories on detection of porcine parvovirus (PPV) nucleic acid

实验室代码 Code of laboratory	样品编号 Sample number	测定结果 Testing results	标准结果 Standard results	结论 Evaluation results
070	CB03640040-043	+	+	Y
	CB03640040-026	+	+
	CB03640040-087	－	－
849	CB03640071-011	+	+	Y
	CB03640071-024	+	+
	CB03640071-085	－	－
358	CB03640058-013	+	+	Y
	CB03640058-073	+	+
	CB03640058-074	－	－
052	CB03640054-016	+	+	Y
	CB03640054-001	+	+
	CB03640054-013	－	－
174	CB03640075-023	+	+	N
	CB03640075-054	+	+
	CB03640075-049	+	－
553	CB03640021-060	+	+	Y
	CB03640021-036	+	+
	CB03640021-003	－	－
532	CB03640043-074	+	+	Y
	CB03640043-064	+	+
	CB03640043-056	－	－
965	CB03640092-013	+	+	Y
	CB03640092-080	+	+
	CB03640092-046	－	－
860	CB03640088-034	+	+	Y
	CB03640088-037	+	+
	CB03640088-052	－	－

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猪细小病毒核酸检测实验室能力验证结果分析

Analysis of Laboratory Proficiency Testing Results on the Detection of Porcine Parvovirus Nucleic Acid

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