树鼩大脑皮层少突胶质前体细胞的分离鉴定

doi:10.3969/j.issn.1674-5817.2019.04.002

实验动物与比较医学 ›› 2019, Vol. 39 ›› Issue (4): 260-266.DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.04.002

树鼩大脑皮层少突胶质前体细胞的分离鉴定

李明学¹, 黎晓慧¹, 黄鑫², 王璇¹, 张志成², 袁园¹, 陆彩霞¹, 孙晓梅¹

1.中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心, 昆明 650118;
2.昆明医科大学, 昆明650500

收稿日期:2018-10-23 出版日期:2019-08-25 发布日期:2021-01-31
作者简介:李明学(1995-),男,在读硕士研究生,研究方向:动物学。E-mail:18687520819@163.com
基金资助:
国家自然科学基金(No.31601907);云南省科技人才和平台计划项目(2017HC019、2018HB071);重点实验室运行补助专项(2017DG008)

Isolation and Identification of Oligodendrocyte Precursor Cells from Tree Shrews Cerebral Cortex

LI Ming-xue¹, LI Xiao-hui¹, HUANG Xin², WANG Xuan¹, ZHANG Zhi-cheng², YUAN Yuan¹, LU Cai-xia¹, SUN Xiao-mei¹

1. Tree Shrew Germplasm Resource Center, Institute of Medical Biology, Chinese Academy of Medicine Sciences CAMS & Peking Union Medical College PUMC, Kunming 650118, China;
2. Kunming Medical University, Kunming 650500, China

Received:2018-10-23 Online:2019-08-25 Published:2021-01-31

摘要/Abstract

摘要： 目的建立树鼩大脑皮层少突胶质前体细胞(OPCs)的体外分离、原代培养方法,以及鉴定技术。方法新生48 h内给树鼩施行安死术后采集大脑,去除脑膜和脑干,留下大脑皮层,然后使用胰酶和DNase I联合消化大脑皮层,分离细胞原代培养。通过采用化学分离法和差速贴壁法从原代培养中获得较为纯化的OPCs。对纯化和定向分化的细胞分别进行硫酸软骨素蛋白多糖4(NG2)、髓鞘碱性蛋白(MBP)细胞免疫荧光染色鉴定。结果纯化后的OPCs,胞体圆形或椭圆形,折光性强,有两极或三极突起,经NG2细胞免疫荧光染色,细胞纯度达97%左右。加入分化培养液后,OPCs可分化发育成熟,经MBP细胞免疫荧光染色为阳性。结论成功建立了树鼩大脑皮层OPCs的体外分离纯化培养方法。

关键词: 少突胶质前体细胞(OPCs), 大脑皮层, 原代细胞培养, 分离纯化, 树鼩

Abstract: Objective To establish an effective method of isolation, identification and primary culture for oligodendrocyte precursor cells (OPCs) which derived from the cerebral cortex of tree shrews in vitro. Methods Newborn tree shrews within 48 hours were given euthanasia, the cerebral cortex were collected, removed the meninges and brainstem. Then, the cerebral cortex was digested with trypsin and DNase I, and primary cultured. Oligodendrocyte precursor cells were purified by chemical separation and differential adherence. The oligodendrocyte precursor cells were identified by immunofluorescence staining of chondroitin sulfate proteoglycan 4 (NG2) and myelin basic protein (MBP). Results The purified oligodendrocyte precursor cells showed round or oval cell body, with strong refractive and bipolar or tripolar protuberances. The purity of the cells was 97% by immunofluorescence staining of NG2. After adding differentiation medium, oligodendrocyte precursor cells could differentiate and mature, and the immunofluorescence staining of MBP is positive. Conclusion A method for isolation and purification of cerebral cortex oligodendrocyte precursor cells from tree shrews was successfully established.

Key words: Oligodendrocyte precursor cells (OPCs), Cerebral cortex, Primary cell culture

中图分类号:

Q95-33

李明学, 黎晓慧, 黄鑫, 王璇, 张志成, 袁园, 陆彩霞, 孙晓梅. 树鼩大脑皮层少突胶质前体细胞的分离鉴定[J]. 实验动物与比较医学, 2019, 39(4): 260-266.

LI Ming-xue, LI Xiao-hui, HUANG Xin, WANG Xuan, ZHANG Zhi-cheng, YUAN Yuan, LU Cai-xia, SUN Xiao-mei. Isolation and Identification of Oligodendrocyte Precursor Cells from Tree Shrews Cerebral Cortex[J]. Laboratory Animal and Comparative Medicine, 2019, 39(4): 260-266.

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树鼩大脑皮层少突胶质前体细胞的分离鉴定

Isolation and Identification of Oligodendrocyte Precursor Cells from Tree Shrews Cerebral Cortex

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