当期目录

2019年 第39卷 第4期    刊出日期：2019-08-25

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专家论坛

实验用猪感染模型研究概况

王玉娥, 张贺, 陈洪岩

2019, 39(4):  253-259.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.04.001

摘要 ( 236 )   PDF (481KB) ( 302 )  

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传统的生物医学模型动物在实验设施中易于管理,可快速高效地应用于人类疾病相关基因的基础研究,但在某些情况下,它们无法代表人类生理的复杂性。猪在解剖学和生理学上与人类相似度很高,在人类疾病的相关研究中的应用广泛。本综述回顾了猪作为人类传染性疾病及自身传染病模型的应用概况,并概述了疫病感染模型的表征及特性。

论著

树鼩大脑皮层少突胶质前体细胞的分离鉴定

李明学, 黎晓慧, 黄鑫, 王璇, 张志成, 袁园, 陆彩霞, 孙晓梅

2019, 39(4):  260-266.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.04.002

摘要 ( 300 )   PDF (2371KB) ( 340 )  

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目的 建立树鼩大脑皮层少突胶质前体细胞(OPCs)的体外分离、原代培养方法,以及鉴定技术。方法 新生48 h内给树鼩施行安死术后采集大脑,去除脑膜和脑干,留下大脑皮层,然后使用胰酶和DNase I联合消化大脑皮层,分离细胞原代培养。通过采用化学分离法和差速贴壁法从原代培养中获得较为纯化的OPCs。对纯化和定向分化的细胞分别进行硫酸软骨素蛋白多糖4(NG2)、髓鞘碱性蛋白(MBP)细胞免疫荧光染色鉴定。结果 纯化后的OPCs,胞体圆形或椭圆形,折光性强,有两极或三极突起,经NG2细胞免疫荧光染色,细胞纯度达97%左右。加入分化培养液后,OPCs可分化发育成熟,经MBP细胞免疫荧光染色为阳性。结论 成功建立了树鼩大脑皮层OPCs的体外分离纯化培养方法。



Tg2576小鼠的行为和病理特征观察

关雅伦, 刘书华, 黄忠强, 李韵峰, 李雪娇, 李舸, 张钰

2019, 39(4):  267-273.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.04.003

摘要 ( 540 )   PDF (1065KB) ( 292 )  

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目的 针对阿尔茨海默症(AD)研究中常用的具有C57BL/6和SJL杂交背景的Tg2576转基因小鼠,初步探讨长期繁殖可能对该小鼠AD表型产生的影响。方法 选取本实验室引进并长期繁育使用的Tg2576小鼠种群,利用Morris水迷宫、免疫组织化学、酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫荧光技术,研究大鼠AD行为和病理表型。结果 与对照小鼠相比,长期传代繁育的Tg2576小鼠随着年龄的增长,在水迷宫测试中仍然出现学习记忆能力的显著下降;免疫组织化学结果显示,小鼠脑皮层出现典型的β淀粉样蛋白(Aβ)沉积,且Aβ在脑组织中的含量较野生型小鼠显著升高;免疫荧光分析表明,在皮层Aβ斑块周围出现大量星形胶质细胞聚集的现象。结论 长期繁育的Tg2576小鼠仍具有AD小鼠典型的疾病临床和病理特征。



Fhl1基因敲除对不同年龄小鼠腓肠肌肌纤维分化和自噬水平的影响

苗佳宁, 刘波, 丁晶晶, 王莉莉

2019, 39(4):  274-279.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.04.004

摘要 ( 224 )   PDF (793KB) ( 272 )  

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目的 探索Fhl1(Four and a half LIM domains protein 1)基因敲除(Fhl1-ko)对不同年龄小鼠腓肠肌肌纤维分化和自噬水平的影响。方法 以2.5月龄和8月龄的野生型和Fhl1-ko型雄性小鼠为研究对象, 应用Western blotting技术检测自噬标记物P62(general transcription factor IIH subunit 1), LC3B(microtubule-associated protein 1 light chain 3 beta)和Beclin1在小鼠腓肠肌中的表达情况。应用定量 PCR技术检测不同类型的肌纤维在小鼠腓肠肌中的表达情况。结果 与野生型2.5月龄的腓肠肌相比, Fhl1-ko小鼠腓肠肌中LC3BⅡ和Beclin 1明显增加, P62却并没有明显降低。而与野生型8月龄的腓肠肌相比, Fhl1-ko小鼠腓肠肌中LC3BⅡ明显增加, Beclin1表达水平改变没有统计学意义, P62的表达水平明显增加。在2.5月龄鼠中, Fhl1-ko可以明显降低腓肠肌中MYH ⅡA, MYH ⅡX型肌纤维相对表达量, 明显增加MYH ⅡB型肌纤维相对表达量。在8月龄鼠中, Fhl1-ko基因敲除可以明显增加腓肠肌中MYHⅠ和MYH ⅡA型肌纤维相对表达量。结论 Fhl1-ko对不同年龄小鼠腓肠肌肌纤维分化和自噬水平的影响不同,提示调节自噬水平可能是FHL1基因突变和蛋白缺失所致的骨骼肌肌病的潜在治疗手段,并且针对不同年龄段的患者应采用差异化的精准治疗手段。



VEGF基因沉默对人肺癌A549细胞放射增敏作用的体内研究

马军, 罗居东, 景文江, 张淑莲, 王娟毅, 范志刚

2019, 39(4):  280-286.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.04.005

摘要 ( 219 )   PDF (1551KB) ( 407 )  

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目的 探讨RNA干扰血管内皮生长因子(VEGF)基因表达载体siVEGF对人肺腺癌A549细胞荷瘤鼠的放射敏感性的影响。方法 用体外培养人肺腺癌A549细胞株建立荷瘤裸小鼠模型,荷瘤鼠瘤内注射siVEGF/RNAi-MateTM脂质体混合物,再经放射治疗24 d后,处死裸小鼠,剥离瘤体称重,利用实时定量PCR (q-PCR)、免疫组织化学和Western blotting检测VEGF的基因和蛋白表达水平,评价siVEGF对放射敏感性的影响。结果 q-PCR、Western blotting和免疫组织化学检测结果表明siVEGF可显著降低VEGF的蛋白水平(P<0.05)。与对照组相比siVEGF联合放疗组的肿瘤生长和坏死程度存在显著性差异(P<0.05)。结论 siVEGF合并放射治疗能显著抑制A549细胞移植瘤的生长,增加其对放射治疗的敏感性。



免疫瘦素促进大鼠脂肪沉积和PPARγ/SREBP-1基因表达

吴丽红, 李洪涛, 管红兵, 顾为望, 黄莉文

2019, 39(4):  287-293.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.04.006

摘要 ( 288 )   PDF (743KB) ( 304 )  

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目的 研究免疫重组瘦素(Leptin)对大鼠皮下、腹部和肝脏脂肪代谢及相关基因表达水平的影响。方法 (1)利用重组Leptin或钥孔血蓝蛋白(KLH)免疫30只SD大鼠3次,52 d后测量体质量,实施安死术,称量腹部脂肪和肝脏重量; (2)检测大鼠血清中抗Leptin抗体水平和血脂4项指标(总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和甘油三酯)的水平; (3)采集皮下、腹部脂肪制作石蜡切片并进行HE染色,采集肝脏制作冰冻切片并做油红O染色,观察和分析以上组织的病理变化; (4)利用荧光定量PCR方法检测腹部脂肪Leptin、下丘脑磷酸化过氧化酶活化增生受体(PPARγ)和肝脏类固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)基因的mRNA表达水平。结果 免疫重组Leptin后,大鼠抗体水平、体质量、总胆固醇密度脂蛋白和甘油三酯均显著升高,病理学观察见脂肪在皮下、腹部和肝脏沉积增多,脂肪代谢相关的Leptin、PPARγ和SREBP-1基因mRNA表达水平升高。结论 对SD大鼠免疫重组Leptin,可促进脂肪在皮下、腹部和肝脏的蓄积,并能上调脂肪代谢相关的Leptin、PPARγ和SREBP-1基因表达水平。



不同浓度弗氏佐剂对B6AF1小鼠免疫性卵巢早衰模型建立的影响

陈玥, 王佩娟, 陈思, 卢燕

2019, 39(4):  294-297.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.04.007

摘要 ( 319 )   PDF (1128KB) ( 352 )  

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目的 观察不同浓度弗氏佐剂对透明带3多肽(pZP3)诱导的B6AF1小鼠免疫性卵巢早衰(POF)模型的影响。方法 取6~8周龄雌性B6AF1小鼠80只,随机分为空白组、不完全弗氏佐剂组、完全弗氏佐剂组[含结核分枝杆菌(TB)1 mg/mL)和不完全弗氏佐剂+TB(3.3 mg/mL)组, 应用HE染色法比较不同注射量的弗氏佐剂对POF 模型小鼠免疫效果的影响。结果 免疫后模型组小鼠卵巢体积萎缩,闭锁卵泡增多,卵泡周围见间质淋巴细胞浸润。不完全弗氏佐剂+ TB(3.3 mg/mL)组免疫效果最好,完全弗氏佐剂组次之。结论 不同浓度弗氏佐剂联合pZP3均可诱导B6AF1小鼠成功构建POF疾病模型,引起免疫性卵巢炎; 含高浓度TB造模效果较好。



不同的人癌裸鼠移植瘤模型中磷脂酶A2的表达

屠珏, 周卫民, 蔡月琴, 凌云, 陈民利

2019, 39(4):  298-304.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.04.008

摘要 ( 291 )   PDF (562KB) ( 303 )  

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目的 观察磷脂酶A2(PLA2)在不同的人癌裸小鼠移植瘤模型中的蛋白表达及特征。方法 分别采用肺癌、鼻咽癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌、食管癌和卵巢癌肿瘤细胞株构建裸小鼠皮下移植瘤模型,待肿瘤生长至瘤体积达1 cm³后,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测肿瘤组织、正常组织及血清中4种主要类型PLA2(cPLA2、sPLA2、iPLA2和lp-PLA2)的蛋白表达,并以正常裸小鼠血清作对照。结果 在呼吸系统、消化系统和生殖系统的8种人肿瘤细胞裸小鼠移植瘤模型中,肿瘤组织cPLA2、sPLA2、lp-PLA2的蛋白表达均显著或极显著高于正常组织(P<0.05,P<0.01),肿瘤组织iPLA2的蛋白表达均高于正常组织,除人结直肠癌细胞HT-29移植瘤模型外,均呈现极显著性差异(P<0.01)。8种移植瘤模型中,荷瘤小鼠血清中4种类型PLA2的蛋白含量均极显著高于正常小鼠(P<0.01)。结论 4种类型PLA2在呼吸系统、消化系统和生殖系统不同的裸小鼠移植瘤模型的肿瘤组织和血清中均呈现高表达,无肿瘤类型特异性,表明磷脂酶A2可能参与肿瘤的发生、发展。



近交系中国仓鼠遗传质量标准的建立

续国强, 高继萍, 刘茂林, 陈朝阳, 宋国华

2019, 39(4):  305-309.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.04.009

摘要 ( 227 )   PDF (442KB) ( 600 )  

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目的 建立近交系中国仓鼠遗传质量标准。方法 在查阅大量国内外相关文献后,按照实验动物哺乳类实验动物遗传质量控制标准(GB14923-2010),根据群体遗传学的相关理论建立近交系中国仓鼠遗传质量标准。构建中国仓鼠基因组富集文库的方法获得微卫星位点并开发相应的微卫星引物,应用微卫星遗传标记进行遗传质量检测。结果 初步建立了中国仓鼠近交系遗传检测方法和质量标准。结论 近交系中国仓鼠遗传质量标准的建立,可规范近交系中国仓鼠的饲养与繁殖,推动我国实验动物遗传质量标准体系的进一步完善。

替来他明/唑拉西泮联合右美托咪定对BALB/c小鼠麻醉效果观察

邹芦, 戴天娥, 卢晓, 艾晓杰

2019, 39(4):  310-313.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.04.010

摘要 ( 916 )   PDF (372KB) ( 393 )  

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目的 探讨替来他明/唑拉西泮(舒泰50)和右美托咪定(哆咪静)联合使用对BALB/c小鼠的麻醉效果。方法 18只BALB/c小鼠, 雌雄各半, 分成A、B两组。A组给予舒泰50和哆咪静混合麻醉; B组给予同样剂量的舒泰50和哆咪静混合麻醉, 待麻醉稳定维持1 h后, 给予阿替美唑(咹啶醒)。比较其麻醉诱导时间、维持时间和苏醒时间的不同。结果 舒泰50和哆咪静联合使用对小鼠诱导迅速、麻醉效果良好。且当引入咹啶醒时, 能大大缩短小鼠苏醒时间(P<0.05), 降低麻醉风险。结论 舒泰50和哆咪静联合使用对于BALB/c小鼠是一种稳定、可靠的新麻醉方式。

经验交流

食蟹猴急性心肌梗死模型的建立及护理

王成舟

2019, 39(4):  314-318.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.04.011

摘要 ( 210 )   PDF (1463KB) ( 251 )  

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目的 通过2014~2018年在浙江大学医学院附属第二医院大动物基地(大动物基地)建立的174例食蟹猴急性心肌梗死(AMI)模型的分析,归纳了食蟹猴标准化的AMI建模过程及造模后食蟹猴的护理方法。方法 选择健康成年雄性食蟹猴在左冠状动脉前降支(LAD)第一对角支和第二对角支之间进行结扎,术中维持生命体征及发生室颤(VF)时积极抢救,术后控制感染、保持体温、维持饮食等措施保证食蟹猴的生存。结果 术中及术后1 d、2 d和3 d死亡率分别是2.3 %、8.0 %、2.3 %和 1.7 %。结论 在LAD第一对角支和第二对角支之间进行结扎可以建立理想的食蟹猴AMI模型, 通过术中和术后合理护理, 降低了AMI模型构建后食蟹猴的死亡率。



优化硫酸钡造影剂对小鼠血管造影效果观察

钱凤涛, 王成稷, 王恺, 李珺, 赵轶芸, 袁益婷, 缪祥

2019, 39(4):  319-322.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.04.012

摘要 ( 571 )   PDF (1198KB) ( 351 )  

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目的 优化硫酸钡造影剂的配方,并尝试对小鼠血管造影。方法 使用不同配比的免洗手消毒凝胶-生理盐水-硫酸钡造影剂混悬液对小鼠动脉血管造影,对成像结果进行对比。结果 在反复测试后得出硫酸钡混悬液最佳配方为: 硫酸钡4 g,免洗手消毒凝胶1 mL,生理盐水5 mL,温度25 ℃,灌注量为0.5~0.8 mL/25 g。结论 经优化后的硫酸钡造影剂可用于小鼠血管造影并能得到很好效果。



小动物控温手术台的改造及其在实验教学中初步应用

陈健, 张金玉, 胡进平, 权福实, 袁宝

2019, 39(4):  323-325.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.04.013

摘要 ( 160 )   PDF (857KB) ( 240 )  

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介绍对小动物控温手术台的改造及其在实验教学中初步应用。对原有实验装置进行重新设计和改造,解决了原有手术台在使用中的问题,降低了手术中动物的死亡率,提高了动物福利和手术成功率,使动物实验能够简便、安全、高效地进行,保障了实验教学工作顺利开展。



关于建设我国实验动物福利保障体系的思考

刘晓宇, 赵海龙, 卢选成, 李晓燕

2019, 39(4):  326-330.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.04.014

摘要 ( 204 )   PDF (546KB) ( 285 )  

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基于我国实验动物福利现状,本文阐述自《实验动物管理条例》发布以来我国实验动物福利工作被提出、重视,而后逐步进入制度化建设的过程。从梳理现况、发现不足、借鉴国际经验、立足我国国情等方面分析了“建设什么样的实验动物福利保障体系”的问题。提出我国实验动物福利保障体系应建立在许可证制度和质量合格证制度基础上,确保实验动物的基本福利; 以实验动物机构认可制度为支点,推动全国实验动物福利工作达到更高水平; 管理网应覆盖所有实验动物和所有环节,消灭盲区。我国应在宣传贯彻实验动物福利理念、推动实验动物福利立法和发挥科技的引领和支撑作用等方面继续推进我国实验动物福利保障体系建设,争取在下个三十年实验动物管理工作能取得更辉煌的成绩。



综述

Foxp2小鼠模型中发育性言语障碍的分子遗传学研究

李慧

2019, 39(4):  331-336.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.04.015

摘要 ( 221 )   PDF (385KB) ( 308 )  

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叉头框P2基因(FOXP2)是第一例发现的与一种特异性言语和语言障碍,即发育性言语失用症相关的基因。这一发现开启了研究相关神经通路的崭新方向。FOXP2在各种脊椎动物中显示了序列和神经系统表达的显著高度保守性,例如它在人胎脑中与对等阶段的小鼠胎脑中表达模式高度相似。Foxp2小鼠模型包括基因敲除鼠,类似KE家族病理突变的鼠以及Foxp2被人源化的鼠。本文将从分子网络、感觉处理、运动技能学习等三方面综述对Foxp2小鼠模型的研究,以阐明语言障碍的遗传基础。