IL-4,GM-CSF体外诱导猪单核来源树突状细胞和功能鉴定

›› 2010, Vol. 30 ›› Issue (3): 174-179.

IL-4,GM-CSF体外诱导猪单核来源树突状细胞和功能鉴定

1.同济大学附属上海市东方医院中德心脏中心研究所，上海 200120；2.上海市第一人民医院胸外科，上海 200080

收稿日期:2010-02-01 出版日期:2010-03-31 发布日期:2010-03-31
基金资助:
上海市科委国际合作项目（055407030）

Generation of Porcine Monocyte Derived Dendritic Cells in vitro: Morphological, Phenotypic and Functional Properties

1.Institute of Sino-german Heart Institute, Shanghai East Hospital, Tonji University, Shanghai 200120, China;2.Department of General Thoracic Surgery Shanghai First People's Hospital Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200080，China

Received:2010-02-01 Online:2010-03-31 Published:2010-03-31

摘要/Abstract

摘要： 目的探讨体外大量培养扩增猪外周血单核细胞来源DC（monocyte-derived DC，MoDC），对细胞表型，免疫学功能及生物学活性进行鉴定.方法提取猪外周血单核细胞（PBMC），经GM-CSF和IL-4诱导，体外培养5～8d，得到悬浮的MoDC，培养第5天加入浓度为1μg/ml的LPS诱导成熟.通过倒置相差显微镜下观察MoDC细胞形态，流式细胞术检测表面CD80/86，SLA-Ⅱ，CD172a等分子表达，BrdU法测定混合淋巴细胞培养MoDC对同种异体T细胞的刺激能力，ELISA法检测MLR上清液中IFN-γL-4水平.结果 IL-4/GM-CSF刺激猪PBMC，可以获得MoDC，其表型为CD1⁺CD14⁺CD172a⁺CD80/86⁺SLA-Ⅱ⁺，经LPS刺激后CD80，CD86，SLA-Ⅱ表达升高.结论应用细胞因子诱导猪PBMC成功获得了MoDC，为今后进一步研究移植耐受诱导和应用于异种移植打下基础.

关键词: 猪, 树突状细胞, 单核来源树突状细胞

Abstract: Objective To amplify and identify dendritic cells (DC) generated in vitro from porcine peripheral blood monocyte (PBMC) and study their immunological characteristics. Methods Monocyte-derived DC (MoDC) were generated by stimulating PBMC with granulocyte-macrophage colony-stumulating factor (GM-CSF) and interleukin-4 (IL-4)，after 5 day culture，LPS (1 ug/ml) was added.Non-adherent cells were collected 5-8 days alter culture. Morphological features were characterized by phase contrast photomicrograph. The co-stimulation molecules, SLAII and other markers were assessed by FACS. Immunological functions were evaluated by means of mixed lymphocyte reaction (MLR) and ELISA. Results Porcine MoDC showed typical DC morphological features, phenotype were CDl⁺CD14⁺CD80⁺CD86⁺CD172a⁺SLA Ⅱ⁺; the expression of CD80, CD86 and SLAII elevated after LPS stimulation. Porcine MoDC showed potent allogenic T cell stimulatory capacity inducing a strong interferon-γ and IL-4 response. Conclusion Porcine MoDC were successfully generated in vitro by stimulating PBMC with GM-CSF and IL-4, that might be meaningful for the further research on tolerance induction and xenotransplantation.

Key words: Dendritic cells, Porcine monocle-derived dendritic cells

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