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2020年 第40卷 第2期    刊出日期：2020-04-25

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论著

过表达骨形态发生蛋白4对兔骨髓间充质干细胞增殖与成软骨的影响

张飞, 党源, 薛来恩, 温福利, 郑和平, 胡德庆

2020, 40(2):  87-94.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.02.001

摘要 ( 329 )   PDF (1970KB) ( 285 )  

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目的 通过腺病毒(Ad)载体感染过表达骨形态发生蛋白4(BMP-4),研究BMP-4对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外增殖和成软骨的影响。方法 全骨髓贴壁法分离获取BMSCs,传代培养提升细胞纯度,通过细胞形态学及流式细胞术测定表面分子标志物以鉴定细胞; 设立病毒感染复数(MOI)梯度组,通过倒置相差显微镜和流式细胞仪确定最佳MOI; 酶联免疫吸附试验(ELISA)及蛋白印迹法分析过表达BMP-4对细胞分泌Ⅱ型胶原(COLL Ⅱ)、性别决定基因盒9(Sox9)和BMP-4的影响; 细胞计数试剂盒8(CCK-8)法鉴定过表达BMP-4对BMSCs体外增殖的影响。结果 原代细胞呈圆形、椭圆和梭形不等, 第2代细胞呈典型成纤维样长梭形,漩涡状分布,低表达造血干细胞表面分子标志物CD34(1.94%)和CD45(2.13%),高表达CD44(98.2%)、CD29(99.7%)和CD90(98.8%)。MOI为100时,病毒感染效率较高,且对细胞损伤最小,为最适MOI。与对照组相比,过表达BMP-4能显著促进BMSCs的增殖,并能分泌成软骨特异指标COLL Ⅱ、BMP-4及Sox9(P<0.05)。结论 过表达BMP-4能显著促进BMSCs的增殖及向软骨分化。



小鼠肝炎病毒实时荧光定量PCR方法的建立及在部分啮齿类动物的应用

王吉, 王莎莎, 付瑞, 王淑菁, 李威, 秦骁, 黄宗文, 李晓波, 巩薇, 岳秉飞, 贺争鸣

2020, 40(2):  95-103.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.02.002

摘要 ( 427 )   PDF (2124KB) ( 334 )  

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

目的 建立小鼠肝炎病毒(MHV)实时荧光定量PCR检测方法,并初步应用于实验裸鼹鼠等啮齿类动物的检测。方法 选择MHV E基因保守区域设计合成特异性引物和探针,建立荧光定量PCR方法,并对方法特异度、敏感度、线性 、重复性和稳定性进行方法学验证。同时用建立的方法对79只清洁级小鼠、35只SPF小鼠、63只裸鼹鼠、10只长爪沙鼠、20只金黄仓鼠和4只黄鼠进行MHV检测。结果 成功建立了MHV实时荧光定量PCR方法;方法的线性范围为(1×10¹~1×10⁹)拷贝/μL,与仙台(SV)病毒、呼肠孤病毒3型(Reo3)、小鼠肺炎病毒(PVM)、牛冠状病毒(BCV)均无交叉反应,方法的检测敏感度为10 拷贝/μL。重复性和稳定性试验显示实验间变异系数均小于5%。检测结果显示63只裸鼹鼠、35只SPF小鼠、10只长爪沙鼠、20只金黄仓鼠和4只黄鼠均为阴性。79只清洁级小鼠MHV阳性率为22.78%。建立的方法与RT-PCR比较,可信度达97.47%。 结论 建立的MHV荧光定量PCR方法特异、敏感,能够对多种啮齿类动物体内携带的MHV进行检测。



不同剂量顺铂腹腔注射建立大鼠化疗损伤性卵巢早衰模型

董若曦, 朱小丹, 樊伯珍, 许文娟

2020, 40(2):  104-109.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.02.003

摘要 ( 300 )   PDF (1348KB) ( 303 )  

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

目的 探索不同剂量顺铂(CP)腹腔注射建立化疗损伤性卵巢早衰(POF)大鼠模型的方法。方法 取48只雌性未生育Wistar大鼠分为6组,每组8只。在不同时间点腹腔注射不同剂量CP。对照组(A组)无处理; CP腹腔小剂量(1.5 mg/kg)注射1组(B组)、小剂量(2.0 mg/kg)注射2组(C组)和小剂量(2.5 mg/kg)注射3组(D组),均每日1次,连续5 d; CP腹腔注射大剂量1组(E组),4 mg/kg,间隔一周再次注射4 mg/kg; CP腹腔注射大剂量2组(F组),4 mg/kg,间隔一周注射6 mg/kg,建立大鼠化疗损伤性POF模型。观察大鼠一般情况、动情周期, 检测体质量变化和血清抗苗勒氏管激素(AMH)水平,以及卵巢病理学改变和各级卵泡数量。结果 与A组比较,各给药组大鼠动情周期明显紊乱,体质量明显下降,血清AMH水平也有明显降低(P<0.05),其中E组下降最为明显;各模型组大鼠卵巢各级卵泡数均有显著减少(P<0.05),其中E组、F组各级卵泡数量减少更为明显(P<0.01)。结论 大鼠腹腔注射4 mg/kg CP,间隔一周再次注射,诱导化疗损伤性POF的造模效果更好,造模方法简便。



臭氧大自血法对睡眠剥夺大鼠褪黑素及氧化应激指标的影响

税云华, 张兰, 雷光磊, 诸源江, 李培玉

2020, 40(2):  110-115.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.02.004

摘要 ( 362 )   PDF (649KB) ( 257 )  

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

目的 观察臭氧大自血法对睡眠剥夺大鼠褪黑素及氧化应激指标的影响。方法 选取40只成年雄性Wistar大鼠,采用“改良多平台睡眠剥夺法”制作快速眼球运动(rapid eye movement sleep, REM)睡眠剥夺模型。根据随机数字表原则,将大鼠分为对照组和观察组,每组各20只。观察组大鼠给予臭氧自体血回输,对照组大鼠以空气进行对照。分别在干预0 h、24 h、48 h和72 h时,采尾静脉血检测血清褪黑素水平,在干预0 h、72 h时,检测静脉血氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)和丙二醛(MDA)水平。结果 干预0 h时,两组大鼠觉醒期(wake, W)、慢波睡眠(slow-wave sleep, SWS)、快波睡眠(fast-wave sleep, FWS)比较,差异均无统计学意义(P>0.05); 干预72 h时,观察组大鼠W低于对照组,SWS、FWS高于对照组(P<0.05)。干预48 h、72 h时,观察组大鼠血清褪黑素水平均高于对照组(P<0.05)。干预72 h时,观察组大鼠SOD水平、MDA水平低于对照组,GSH-px水平高于对照组(P<0.05)。结论 臭氧大自血法可促进睡眠剥夺大鼠褪黑素释放,降低大鼠血清SOD水平、MDA水平,提高大鼠血清GSH-px水平。



纳米脂质体槲皮素对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及机制

康瑜, 杨小芳

2020, 40(2):  116-122.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.02.005

摘要 ( 358 )   PDF (1823KB) ( 296 )  

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

目的 研究纳米脂质体槲皮素(nLQ)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及机制。方法 80只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组,以及nLQ低、中、高剂量组,每组16只。用改良线栓法制备大鼠中动脉脑缺血再灌注模型。各组大鼠脑缺血再灌注48 h后,采用神经功能缺损评分法观察大鼠的行为学评分; 2,3,5-氯化三苯基四氮唑 (TTC)染色实验测定脑梗死体积,干湿重法测定脑组织含水量;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素10 (IL-10)含量;流式细胞术检测脑组织神经细胞凋亡情况;蛋白质印迹法(Western blotting)检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达变化。结果 与模型组相比,nLQ低、中、高剂量组大鼠神经功能缺损症状明显改善,行为学评分显著降低,脑梗塞体积显著减小,脑水肿程度显著降低,血清TNF-α和 IL-10的含量显著降低,细胞凋亡率显著降低,凋亡相关蛋白Bcl-2表达水平显著升高,Bax表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01),且具有剂量-效应关系。结论 nLQ对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有很好的保护作用,其机制可能与nLQ能够改善神经功能缺损症状,减少神经细胞凋亡及降低血中炎性反应因子TNF-α和 IL-10的含量有关。



高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝病食蟹猴模型

高仕平, 李锋, 查思凡

2020, 40(2):  123-127.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.02.006

摘要 ( 361 )   PDF (1301KB) ( 345 )  

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

目的 建立高脂饲料诱导非酒精性脂肪肝病(NAFLD)食蟹猴动物模型,分析高脂饲料饲喂时间对动物NAFLD形成的影响,探索高脂饲料饲喂时间与血清中生化指标、肝脏脂肪化及纤维化形成的相关性。 方法 实验前对700只健康食蟹猴收集基础血液,然后用高脂饲料饲喂,分别在饲喂1年、2年、3年、4年、5年、6年和7年时,随机抽取部分实验猴,用盐酸氯胺酮麻醉并收集动物血液,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)指标,并进行肝组织活检。结果 在饲喂高脂饲料2年时, 食蟹猴血清ALT、AST、TG、TC、LDL水平均显著升高,HDL水平显著下降(P<0.01)。高脂饲料饲喂2年及以上时间与ALT、AST、TG、TC、脂肪化、纤维化在0.01水平(双侧)上显著相关(r分别为0.127、0.121、0.246、0.128、0.306和0.220), 与HDL呈负相关(r=-0.298, P<0.05), 与LDL在0.05水平(双侧)上显著相关(r=0.081)。病理组织学观察显示,随时间推移肝脏发生严重的脂肪变性和气球样变性、脂肪肝,进而发生肝炎、纤维化。结论 高脂饮食可导致食蟹猴血脂及肝酶活性指标明显升高,肝脏脂质聚集,炎性浸润明显,表明高脂饮食能够成功诱导NAFLD食蟹猴模型并促进NAFLD的进展。



幼龄SD大鼠自发性病变分析

黄暨生, 吴淑仪, 詹锦河, 倪庆纯

2020, 40(2):  128-135.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.02.007

摘要 ( 368 )   PDF (2439KB) ( 309 )  

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目的 研究幼龄SPF级SD大鼠自发性病变的发生情况,为药物临床前安全性评价研究特别是儿科药物临床前评价研究提供资料。方法 收集近2年幼龄SD大鼠药物重复给药毒性研究试验中出生51 d(PND51)、出生65 d(PND65)、出生111 d(PND111)、出生139 d(PND139)阴性对照组大鼠,制作病理切片,光学显微镜下观察SD大鼠病变的种类及组织形态学特点,并统计其病变发生率。结果 分析报告了幼龄SPF级SD大鼠发育不同时间的自发性病变,主要有心脏、肝脏、肾脏等脏器病变,其中肝脏、心脏、肾脏自发性病变发生率及程度随着大鼠的发育有所提高和加深。结论 幼龄SPF级SD大鼠发育不同时间的自发性病变及其发生率可为药物重复给药毒性研究提供参考。



糖尿病模型兔眼结膜损伤的病理机制研究

葛健, 朱彩红, 吴彦霖, 吴永杰

2020, 40(2):  136-140.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.02.008

摘要 ( 330 )   PDF (574KB) ( 265 )  

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目的 通过检测高脂高糖饲料饲喂加链佐脲菌素诱发的糖尿病兔结膜组织细胞的基质金属蛋白酶(MMPs)和基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMPs),分析二者与眼结膜病变间关系。方法 选取日本大耳白兔20只,随机分成2组。对照组喂饲普通实验兔饲料;实验组饲喂高脂高糖饲料8周后,耳缘静脉注射链佐脲菌素制备糖尿病模型。在完成模型制作后2周, 2组兔经全身麻醉后分别选取双眼的球结膜组织(2 mm×3 mm)各1片。右眼球结膜用于常规病理观察;左眼球结膜用于MMP-1、MMP-3、MMP-9测定,以及TIMP-1、TIMP-3的检测。结果 实验组中MMP-1、MMP-3和MMP-9表达高于对照组(P<0.05)。实验组中TIMP-1表达略高于对照组(P>0.05),但TIMP-3表达明显低于对照组(P<0.05)。实验组兔眼结膜上皮排列整齐,上皮下组织明显减少, 结膜组织疏松, 可见萎缩的筋膜组织, 结膜固有层细胞松散, 且细胞间炎性细胞增多。结论 糖尿病兔结膜组织MMPs和TIMPs的平衡打破,使结膜组织中产生弹力纤维减少,结膜下组织疏松; 筋膜萎缩的病理改变,使糖尿病兔结膜出现松弛,造成兔眼表微环境产生改变。



不同年龄段自发性高血压大鼠脉搏波传导速度和动脉管壁结构的观察

郭菁, 顾文勇, 吴永杰

2020, 40(2):  141-143.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.02.009

摘要 ( 534 )   PDF (288KB) ( 239 )  

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目的 通过对不同年龄段自发性高血压大鼠(SHR)的脉搏波传导速度(PWV)的测定,以及同期SHR主动脉中膜横截面积 (MCSA)结构分析,揭示SHR不同生长阶段血管生理变化。方法 使用彩色超声多普勒和测定血管病理分析对4月龄、6月龄、8月龄、10月龄、12月龄的SHR进行PWV测定及MCSA分析。结果 随年龄的增长, SHR的PWV开始升高。12月龄SHR的PWV显著高于8月龄、6月龄及4月龄组大鼠(P<0.05)。10月龄SHR的PWV显著高于6月龄组和4月龄组大鼠(P<0.05)。MCSA分析显示,随着年龄的增加,SHR主动脉MCSA也呈现逐步上升的趋势。结论 随着年龄的增长,SHR动脉顺应性变差,血管弹性功能降低,动脉硬化程度增强。

SPF金黄仓鼠乳主要营养成分及氨基酸组成分析

范方玲, 夏爽, 甘露, 夏放

2020, 40(2):  144-148.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.02.010

摘要 ( 404 )   PDF (387KB) ( 263 )  

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目的 了解SPF金黄仓鼠乳的组成成分,并与其他啮齿类动物(小鼠、大鼠、豚鼠)乳、兔乳、牛乳以及婴儿配方乳进行比较分析。方法 按照国家标准,采用凯氏定氮法、电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)等测定金黄仓鼠乳中基本营养成分; 使用氨基酸自动分析仪测定氨基酸含量。结果 金黄仓鼠乳100 g主要营养成分含量如下: 水分86.4 g、蛋白质6.94 g、脂肪2.70 g、乳糖2.21g; 矿物质元素钙120.00 mg、镁20.10 mg、磷82.05 mg、锌1.470 mg等; 16种氨基酸,水解氨基酸总含量为61 mg/g,必需氨基酸含量24.4 mg/g,占氨基酸总量的40%。结论 金黄仓鼠乳汁具有高蛋白、低脂肪、低乳糖的特点,为无菌金黄仓鼠配方乳的配制提供了科学依据。

经验交流

浅谈ABSL-2实验室运行管理要点

杨华, 赵勇, 宋志刚, 李顺, 周晓辉

2020, 40(2):  149-153.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.02.011

摘要 ( 495 )   PDF (481KB) ( 309 )  

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实验动物是医学研究广泛应用的重要工具, 实验动物和动物实验的生物安全保障是支撑人类生物医学研究与相关科技进步的关键基础条件之一。目前,动物生物安全二级(ABSL-2) 实验室已被广泛应用于生命科学和医学研究的多个领域。本文通过介绍ABSL-2实验室管理要点,围绕实验室建筑设计、资质审批及实验项目审批管理、设施运行、人员管理、操作规程、应急处置等方面,如何加强管理,建立一个有效的生物安全管理体系,以防止危害生物因子泄露,提高动物生物安全二级实验室生物安全保障支撑水平,为同行提供信息参考。

高等院校实验动物的信息化管理体系建设及初步运行

李巍, 陈晓娟, 柯贤福, 汪洌

2020, 40(2):  154-158.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.02.012

摘要 ( 277 )   PDF (2711KB) ( 402 )  

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针对高等院校实验动物管理的复杂现状, 分析管理的关键要素, 探索适合高校实验动物信息化管理体系, 充分发挥信息化管理规范化、智能化等优势,为高校的教学和科研提供保障。



综述

骨性关节炎动物模型研究进展

夏梦熊, 韩海慧, 梁倩倩, 翟伟韬, 徐浩

2020, 40(2):  159-165.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.02.013

摘要 ( 421 )   PDF (516KB) ( 356 )  

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骨性关节炎(OA)动物造模方式繁多,国内外众多学者针对其发病特点,利用不同种类的动物进行造模。各造模方案不同,其动物模型特点亦不同。本文从原发性OA和继发性OA两点入手,以转基因模型和实验诱导模型为主要切入点进行整理,并分析其优缺点,以期对OA的发病机制、疾病发展变化、过程、转归以及相关的科学研究有所帮助。



国内外大鼠和小鼠微生物、寄生虫检测标准的比较

陶凌云, 周洁, 胡建华, 高诚

2020, 40(2):  166-172.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.02.014

摘要 ( 540 )   PDF (472KB) ( 312 )  

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本文简要介绍国外大鼠和小鼠微生物和寄生虫检测的指标、方法和频率,结合我国微生物和寄生虫国家标准中要求的检测项目及实际检测情况提出建议。