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2020年 第40卷 第4期    刊出日期：2020-08-25

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国内外不同体制下实验动物管理机制的实践与启示

刘晓宇, 卢选成, 陈洪岩, 卢胜明, 李根平, 贺争鸣

2020, 40(4):  263.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.04.001

摘要 ( 216 )   PDF (530KB) ( 289 )  

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在对国内外不同体制下实验动物管理机制发展形成进行分析的基础上，阐述我国现行管理机制优势，找出存在的不足，提出完善与强化我国实验动物管理体制和机制的对策与建议。





论著

小泛素样修饰物蛋白酶3调控小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬

朱慧琴, 邹嫣琼, 杨洁, 易静, 杨洁

2020, 40(4):  270.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.04.002

摘要 ( 229 )   PDF (2018KB) ( 317 )  

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目的   探讨小泛素样修饰物（small ubiquitin-like modifier，SUMO）特异性蛋白酶3（SUMO-specific protease 3，SENP3）对小鼠肺组织细胞自噬的调控作用及分子机制。方法    应用免疫荧光技术检测SENP3在肺组织细胞中的定位；对SENP3基因野生型C57BL/6J小鼠（SENP3+/+）和SENP3基因敲除杂合子小鼠（SENP3+/－）进行饥饿处理，诱导细胞自噬；应用免疫印迹法评估细胞自噬水平；应用电子显微镜观察和免疫荧光技术分析发生自噬的细胞类型；应用免疫共沉淀方法检测自噬相关分子卷曲螺旋状Myosin样Bcl-2相互作用蛋白1（coiled-coil myosin-like Bcl-2-interacting protein 1，BECN1）的SUMO化修饰。结果    SENP3在肺泡Ⅱ型上皮细胞中高表达。小鼠经饥饿处理后，肺泡Ⅱ型上皮细胞出现自噬现象，且SENP3+/－小鼠较 SENP3+/+小鼠更明显。同时，肺组织样品中BECN1的SUMO2/3化修饰被SENP3去除。结论    SENP3抑制饥饿应激时小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的自噬，并可对细胞自噬程度进行精细调控。





基于RNA-Seq技术的犏牛囊胚冷冻前后单核苷酸多态性和可变剪切分析

郑杰, 张国忠, 胡艳梅, 伍学一, 杨宗富, 字向东

2020, 40(4):  279.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.04.003

摘要 ( 227 )   PDF (1606KB) ( 345 )  

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目的    对犏牛囊胚玻璃化冷冻前后的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)和可变剪切(alternative splicing，AS)进行比较分析。方法    采用普通娟珊牛精子和牦牛卵母细胞，以体外授精(in vitro fertilization，IVF)的方式获得犏牛囊胚。提取犏牛新鲜囊胚和经玻璃化冷冻复苏后的犏牛冻融囊胚总RNA，构建文库并进行高通量测序。采用SAMtools-0.1.19和ASprofile软件分别进行SNP和AS分析。结果    犏牛新鲜囊胚和冻融囊胚样本通过去低质量序列、去接头污染等过程后，分别得到51 099 116和54 192 358条待分析数据(Clean Reads)。新鲜囊胚和冻融囊胚分别检测到116 681和224 750个SNP位点。在新鲜囊胚转换型SNP中，C/T类型数量略多于A/G类型；但在冻融囊胚中，A/G类型数量略多于C/T类型；两样本颠换型SNP中，A/T所占比例最少。新鲜囊胚和冻融囊胚转换和颠换型SNP的比例分别为2.57和2.45。新鲜囊胚和冻融囊胚分别检测出49 388和65 241个AS事件，主要有5种AS类型，其中转录起始区域和转录结束区域AS所占比例最大。结论   利用RNA-Seq技术对玻璃化冷冻前后犏牛囊胚SNP和AS进行比较分析，可为后续人类胚胎冷冻前后相关基因功能分析和挖掘提供有效数据和理论基础。





水貂阿留申病毒VP2基因TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用

闫文卓, 陆涛峰, 周洁, 赵丽丽, 陈洪岩

2020, 40(4):  289.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.04.004

摘要 ( 194 )   PDF (1893KB) ( 391 )  

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目的    建立一种方便、灵敏的水貂阿留申病毒(AMDV)荧光定量PCR检测方法，从而实现临床样品中AMDV的快速定量检测。方法    根据AMDV的结构蛋白VP2的基因保守区域设计一对特异性引物和探针，优化PCR反应条件，建立TaqMan实时荧光定量PCR检测方法，绘制标准曲线，并进行特异性、敏感性和稳定性分析。 结果    建立的标准曲线在1.0×102 拷贝/µL至1.0×108 拷贝/µL 之间具有良好的线性关系，相关系数(r2)大于0.994。该方法检测的灵敏度为102 拷贝/µL，且与犬细小病毒、犬腺病毒、犬瘟热病毒和水貂病毒性肠炎病毒均无明显交叉反应，特异性良好。重复性试验结果显示，该方法的组内和组间变异系数均小于3%，重复性良好。利用该方法对417 份临床组织样品进行检测的结果显示，中国部分地区的AMDV阳性率为81.5%。 结论    本研究建立了一种重复性、特异性和敏感性良好的AMDV荧光定量PCR检测方法，可用于AMDV的临床检测和流行病学调查。

论著

泛素羧基末端水解酶1基因缺失对雌性小鼠生殖系统发育的影响

吴 比, 梁珊珊, 阮井玲, 黄 鑫, 滕晓明, 洪 岭

2020, 40(4):  296.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.04.005

摘要 ( 231 )   PDF (3378KB) ( 267 )  

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目的    研究泛素羧基末端水解酶L1（ubiquitin C-terminal hydrolase L1，UCH-L1）基因缺失对雌性小鼠生殖系统的影响。方法    利用阴道涂片、免疫组织化学、蛋白质印迹和RNA干扰等方法，分析UCH-L1基因缺失对小鼠卵巢功能及卵泡发育的影响。结果    UCH-L1基因缺失纯合子成年雌性小鼠的体质量降低，运动困难，且子宫偏细。在UCH-L1基因缺失纯合子小鼠的卵巢和子宫中检测不到UCH-L1蛋白表达，卵巢体积明显小于杂合子小鼠，其卵巢皮质层存在一些原始卵泡或闭锁卵泡，没有成熟卵泡和黄体。雌激素受体（estrogen receptor，ER）、卵泡刺激素受体（follicle-stimulating hormone receptor，FSHR）、黄体生成素受体（luteinizing hormone receptor，LHR）及孕酮受体（progesterone receptor，PR）等生殖关键受体在UCH-L1缺失纯合子小鼠和杂合子小鼠卵巢中都有表达，其中纯合子小鼠卵巢中ER的表达水平明显低于杂合子小鼠。通过RNA干扰的方法下调生发泡（germinal vesicle, GV）期卵母细胞中UCH-L1的表达，能明显降低卵母细胞的成熟率。结论    UCH-L1基因缺失雌性小鼠不具备形成成熟卵泡及排卵的能力，卵巢中ER表达量显著降低。 推测UCH-L1有可能通过下调卵巢中ER的表达，影响卵母细胞成熟及排卵过程。

抑制素基因敲除小鼠模型的构建及表型初步分析

洪胜辉, 张旭亮, 王芊芊, 刘 平, 刘迪文

2020, 40(4):  306.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.04.006

摘要 ( 267 )   PDF (2779KB) ( 335 )  

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目的     利用成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白9[clustered regularly interspaced short palindromic repeat（CRISPR）/CRISPR-associated protein 9（Cas9）]基因编辑技术构建抑制素基因敲除小鼠模型，并对其表型进行初步分析。方法    根据抑制素α亚基的第一外显子碱基序列，设计单链向导RNA（single guide RNA，sgRNA）识别序列，构建sgRNA表达质粒。利用T7 RNA聚合酶体外转录sgRNA和Cas9 mRNA后，将sgRNA/Cas9 mRNA显微注射入C57BL/6J小鼠的受精卵，通过PCR和基因测序法检测新生小鼠抑制素α亚基的基因碱基突变情况。选取F2代基因敲除纯合子的雄鼠和雌鼠，分别取雄鼠睾丸和雌鼠卵巢进行观察，并进行石蜡切片和HE染色分析。结果    共获得了12只F0代抑制素基因敲除小鼠，选取8号雄鼠与C57BL/6J雌鼠回交，得到F1代小鼠，再相互交配得到F2代小鼠。F2代小鼠各基因型比例符合孟德尔定律，基因敲除小鼠不存在胚胎致死现象。F2代纯合子小鼠睾丸和卵巢发生癌变且无法生育。结论    成功构建了抑制素基因敲除小鼠模型，F2代纯合子小鼠的癌变表型显示抑制素在小鼠生殖系统中发挥重要功能。





盐敏感性高血压小鼠模型的建立

姚玎, 周晶, 严国锋, 王会阳, 汪雅荻, 马政文

2020, 40(4):  314.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.04.007

摘要 ( 644 )   PDF (3493KB) ( 401 )  

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目的    建立盐敏感性高血压小鼠模型，用降压药硝苯地平验证模型的有效性。方法     采用C57BL/6J小鼠为研究对象，分别设定常规饲料饲喂的正常组、高盐饲料饲喂的高盐组和高盐饲料饲喂后给予硝苯地平的干预组。采用无创血压测量系统测量各组小鼠的血压变化情况；采用血液生化分析仪测定小鼠血清的肝功能、肾功能、血脂、血糖和离子等生化指标；通过苏木精-伊红染色观察小鼠肝、肾和颈动脉的组织学变化。结果    与正常组小鼠血压相比，高盐组小鼠的收缩压和舒张压均显著升高（均P＜0.01），而干预组小鼠血压显著下降（均P＜0.01）。与正常组相比，高盐组小鼠的肝功能指标天冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶、白蛋白、血清总蛋白和直接胆红素水平，以及血脂指标胆固醇、肾功能指标尿酸、钙离子和镁离子水平都有显著变化（均P＜0.05），而干预组则逐步恢复。组织病理学显示，高盐组小鼠的肝和肾都有不同程度的损伤。结论   高盐饮食可成功建立盐敏感性高血压小鼠模型，硝苯地平可有效降低模型小鼠的血压。

抗C5aR抗体联合大蒜素对诱发性炎性肠病大鼠的治疗作用

周亚妮, 刘丹

2020, 40(4):  328.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.04.009

摘要 ( 235 )   PDF (1262KB) ( 382 )  

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目的   探索抗补体5a受体(C5aR)抗体联合大蒜素对大鼠炎性肠病(IBD)的治疗作用。方法    将80只经2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的IBD雄性大鼠随机分为4组：模型对照组、抗C5aR抗体治疗组、大蒜素治疗组、抗C5aR抗体联合大蒜素治疗组；另20只雄性大鼠为正常对照组。药物灌胃前和灌胃后14 d统计大鼠体质量变化和生存率，检测大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平，进行结肠组织大体观察以及病理学评分。结果    抗C5aR抗体联合大蒜素治疗组大鼠的体质量及生存率均高于其他治疗组，且大鼠血清中炎性因子IL-6、TNF-α的表达水平均呈明显回归趋势；结肠组织病理学评分也表明联合治疗组的效果明显优于其他治疗组(P<0.05)。结论    抗C5aR抗体联合大蒜素是治疗TNBS诱导的大鼠IBD的有效方案，其疗效优于单独使用抗C5aR抗体或者大蒜素。

巨细胞病毒对植入聚甲基丙烯酸甲酯小鼠部分免疫指标的抑制作用

江蓉, 张齐梅

2020, 40(4):  332.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.04.008

摘要 ( 336 )   PDF (1367KB) ( 373 )  

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目的    研究巨细胞病毒（cytomegalovirus, CMV）对植入聚甲基丙烯酸甲酯（polymethyl methacrylate, PMMA）后小鼠免疫反应的抑制作用。方法    腹腔接种病毒悬液构建CMV感染小鼠模型。病毒接种7 d后，将PMMA植入到小鼠背部皮下；流式细胞术检测外周血中单核/巨噬细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞和调节性T细胞（Treg细胞）所占比例；酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量。结果    相对于植入对照组，植入CMV组小鼠外周血中M1型单核/巨噬细胞的比例降低了73.18%（t=5.896，P=0.004），M2型单核/巨噬细胞的比例则升高了2.18倍（t=7.971，P=0.001），CD4+/CD8+T细胞比值降低了42.91%（t=6.468，P=0.003），而Treg细胞比例升高了2.49倍（t=4.495，P=0.011）。相对于植入对照组，植入CMV组小鼠外周血中TNF-α和IL-1β的浓度分别降低了71.65%和57.95%（t=7.236，P=0.019；t=7.543，P=0.002）。结论    CMV能够显著抑制PPMA植入后的免疫反应，这为CMV感染患者口腔生物材料植入后的抗病毒治疗提供了理论依据。

不同途径感染后5型腺病毒在C57BL/6J小鼠体内的分布

陈伟盛, 高亚奇, 梁 宁, 陈海宇, 陈兴致, 詹纯列, 张修彦

2020, 40(4):  334.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.04.010

摘要 ( 435 )   PDF (960KB) ( 341 )  

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目的    通过4种途径感染后检测5型腺病毒(Ad5)在C57BL/6J体内的分布。方法    112只C57BL/6J小鼠分为4组，以滴鼻、灌胃、尾静脉及腹腔注射方式每只小鼠给予1×109 pfu/mL的Ad5溶液100 µL，分别在感染后1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d和7 d每组处死雌雄小鼠各2只，取淋巴结、睾丸、附睾、子宫、卵巢、脾脏、肾脏、肝脏、肺、心脏、脑、血液和骨髓组织进行荧光定量PCR检测。结果    滴鼻组在肺和脊髓组织中检测到Ad5，肺组织中Ad5在感染后4 d下降比较多；灌胃组在所有组织中均没有检测到Ad5；尾静脉注射组在肝脏和脾脏中检测到Ad5，且下降速度比较慢；腹腔注射组在脊髓、脾脏、附睾和睾丸中检测出Ad5。腹腔注射组脊髓中Ad5的含量比滴鼻组约高10倍，脾脏中Ad5的含量与尾静脉注射组脾脏中的含量相当，附睾和睾丸中Ad5含量只有其他阳性组织中检测出含量的1%~10%。结论    Ad5的肺部感染实验，可每3 d滴鼻一次；肝脏感染实验，可以用尾静脉注射方法；脾脏感染实验，可以采用尾静脉注射或腹腔注射方法；脊髓感染实验，可以采用腹腔注射方法。

实验动物福利伦理审查与监管实践及探索

鹿双双, 师晓萌, 刘晓宇, 孙德明, 李晓燕, 卢选成

2020, 40(4):  339.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.04.011

摘要 ( 347 )   PDF (477KB) ( 354 )  

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经过近30年的发展，我国涉及实验动物的政策、法规、标准不断出台，科研人员对实验动物福利的认识不断加深，实验动物福利伦理委员会的运行和管理也越来越规范。只有实验动物福利伦理委员会高质量的管理，才能确保实验动物的福利落到实处。笔者结合近年在实验动物福利伦理审查及监督管理工作的实际以及文献检索和同行交流，对审查及监管中发现的常见问题进行阐述，并提出了解决方案，旨在为更好地提高实验动物福利工作提供参考。





综述

慢性不可预知性温和应激致抑郁样大鼠模型的研究进展

赵谦, 王安娜, 高雪松, 李丽, 赵静洁

2020, 40(4):  344.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.04.012

摘要 ( 657 )   PDF (664KB) ( 405 )  

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抑郁症是一种以情感低落、思维迟缓和言语动作减少为典型症状的精神疾病，严重时可引起自杀行为。慢性不可预知性温和应激（chronic unpredictable mild stress，CUMS）造模方法目前已被广泛应用于抑郁症研究，该方法造模所引起的模型动物病理生理改变与人类抑郁症相似。本文综述了CUMS的造模方法、模型评价以及病理生理变化，并对上述几方面进行了思考。

论著

改良右心导管法测量大鼠肺动脉压力综述

董政委, 樊官伟

2020, 40(4):  354.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.04.013

摘要 ( 463 )   PDF (457KB) ( 309 )  

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右心导管法作为检测肺动脉压力的金标准，操作时需经过3个重要的生理弯曲才可到达肺动脉。为快速、有效地对大鼠肺动脉压力进行准确测量，需要对右心导管的材质、头端角度及相应操作加以改良。现将国内外有关改良右心导管法测量大鼠肺动脉压力的方法进行总结，以期对从事该方面研究者提供参考和思路。