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2005年 第25卷 第3期    刊出日期：2005-09-25

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论文

具有潮霉素B抗性的NIH3T3细胞饲养层的制备

张梅英, 李华, 董婉维, 杨葳, 秦英, 汪瑛, 周生来, 于洋, 王惟, 王太一, 王禄增

2005, 25(3):  131-135. 

摘要 ( 1147 )   PDF (12378KB) ( 620 )  

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目的 建立具有潮霉素B（hygromycin B）抗性的3T3细胞系，用于转染目的基因（pTRE2-human-Ins）的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层。方法 通过脂质体转染的方法，将含有潮霉素B磷酸转移酶基因（hyg）的质粒pHyg导入NIH3T3细胞中，利用潮霉素B的药物选择特性，对转染细胞进行压力筛选，并对其进行PCR和Southern blot鉴定。结果 经300μg/ml的潮霉素B压力筛选后，获得了抗性细胞克隆。抗性NIH3T3细胞的形态和生长速度与正常NIH3T3细胞没有差异，特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA，可以扩增出相应的核苷酸片段，Southern blot鉴定结果表明潮霉素基因片段已整合入潮霉素抗性NIH3T3细胞。结论 本实验通过脂质体介导的方法成功地培育了潮霉素B抗性的NIH3T3细胞，为进行目的基因（pTRE2-human-Ins）转染ES细胞的阳性细胞克隆筛选打下了基础。

本刊2006年起将由邮局发行

2005, 25(3):  135-135. 

摘要 ( 571 )   PDF (1830KB) ( 517 )  

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硒对汞致剑尾鱼鳃和肝组织总抗氧化能力变化的拮抗作用

方展强, 王春凤

2005, 25(3):  136-139. 

摘要 ( 983 )   PDF (10733KB) ( 605 )  

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目的 研究汞（Hg）对剑尾鱼（Xiphophorus helleri Heckel）鳃和肝组织总抗氧化能力（T-AOC）的影响以及硒（Se）对Hg致机体损伤的拮抗作用，探讨剑尾鱼器官组织内T-AOC变化作为环境风险评价（ERA）的有效生物学标记的可行性。方法 使用浸浴法以0、0.21、0.42 mg/L三个Hg浓度，（0.21+0.0664）和（0.42+0.0664）mg/L二个Hg加Se浓度，以及0.0664 mg/L一个Se浓度为剑尾鱼染毒，定量测定了染毒5 d内鳃和肝组织中总抗氧化能力的变化。结果 在整个实验期间Hg暴露组剑尾鱼组织的T-AOC值都有不同程度的下降，与对照组相比高Hg组在染毒第5天时鳃和肝脏组织总抗氧化能力分别降低了39%和30%（P＜0.01），相反，单独硒处理不论鳃和肝脏组的T-AOC则自第1天起持续显著升高（P＜0.05）。低Hg加Se组鳃组织T-AOC在实验期间基本上维持在接近对照组的水平，但肝组至第5天时，T-AOC下降明显（P＜0.05）。而高Hg加Se组无论鳃或肝组虽然在第1天时T-AOC仍保持一定的活力，但随染毒时间的延长，T-AOC有显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。结论 硒在一定程度上拮抗汞对机体T-AOC的降低。剑尾鱼鳃和肝组织的总抗氧化能力可作为环境风险评价（ERA）的有效生物学标记。

小鼠哮喘模型的建立及其相关机理初步研究

黄莉1, 胡玉敏2, 陈煦艳1, 施勤2, 季伟1

2005, 25(3):  140-142. 

摘要 ( 928 )   PDF (11058KB) ( 532 )  

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目的 通过制备BALB/c小鼠过敏性哮喘模型，研究共刺激分子OX40在哮喘中的表达。方法 腹腔注射卵蛋白致敏小鼠，两周后雾化吸入卵蛋白激发哮喘发作，以生理盐水腹腔注射及雾化吸入为空白对照。比较支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞总数及嗜酸性粒细胞和淋巴细胞数百分数；肺组织HE及PAS染色以确定动物造模是否能模拟哮喘的病理状态；肺组织冰冻切片行免疫组化检测哮喘小鼠肺组织OX40的表达情况。结果 卵蛋白激发后，小鼠的支气管肺泡灌洗液中的细胞总数及嗜酸性粒细胞和淋巴细胞百分数较对照组增高，且差异有统计学意义，哮喘小鼠肺组织中OX40的表达明显增多。结论 BALB/c小鼠是制备过敏性哮喘的理想模型，哮喘时小鼠肺组织中OX40的表达明显增多。

地方株HPV16L1基因诱发的小鼠体液免疫反应

高慧1, 2, 孙强2, 黄正芳2, 吴宝金1, 2, 李厚达2

2005, 25(3):  143-146. 

摘要 ( 995 )   PDF (9975KB) ( 569 )  

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目的 检测pcDNA-L1的表达，评价地方株HPV16L1基因疫苗诱导的体液免疫反应。方法 采用PCR技术从宫颈癌组织中获得L1基因，以pGEM-T Easy为克隆载体构建重组质粒pGEM-T-L1，进行限制性核酸内切酶及核苷酸序列分析，再将L1基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1（-）中，构建地方株HPV16L1基因疫苗，转染COS-7细胞，通过IFA试验验证L1蛋白的表达。用pcDNA-L1肌肉内注射方法分别于第1天、第15天和第43天免疫6周龄BABL/c小鼠，在特定时间段采血分离血清，IFA分析基因免疫在小鼠体内诱导的免疫应答，设pcDNA载体对照。结果 pcDNA-L1能够在COS-7细胞中暂态表达，免疫小鼠后能检测出特异的抗体，用IFA方法在第一次免疫后的第30、60和180天均可检测到抗体；原载体免疫后未检出特异抗体。结论 本实验构建的地方株HPV16L1基因疫苗可诱导产生特异性的体液免疫反应。

幼龄大鼠弥漫性肺出血模型的建立

吴春英, 鲁建生, 舒涛, 黄静宁, 周泉

2005, 25(3):  147-150. 

摘要 ( 1120 )   PDF (10707KB) ( 592 )  

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目的 模拟临床肺血管严重充血的病因，建立弥漫性肺出血幼龄大鼠模型以期有助于对新生儿肺出血的研究。方法 24只幼龄大鼠随机分为2组，每组12只。实验组皮下注射0.1%肾上腺素，每日2次，第一天剂量每次0.2 mg/kg，第2天每次0.3 mg/kg，以此逐渐增加至第7天0.8 mg/g。对照组以同样容量及方法注射生理盐水。实验组每死亡一只大鼠，对照组即随机处死一只大鼠。肉眼观察肺出血情况，将结果分为5级.Ⅰ级正常肺，Ⅱ级肺水肿，Ⅲ级点状肺出血，Ⅳ级局灶性肺出血，Ⅴ级弥漫性肺出血，并作光镜及电镜观察。结果 平均用药天数5.24±1.82 d.肉眼观察实验组10只大鼠肺呈Ⅴ级改变，Ⅲ、Ⅳ级改变各一只，对照组12只大鼠肺均为Ⅰ级（RIDIT分析，x²=18.00，P＜0.01）。光镜见Ⅴ级肺有多处小叶融合性出血，出血区肺泡内充满红细胞，间质也出血，小血管及毛细血管重度扩张、瘀血。电镜示Ⅴ级肺肺泡Ⅰ型上皮局部崩解，气血屏障变薄及全层断连，肺泡腔内充满红细胞。结论 采用肾上腺素皮下注射可成功制作严重肺血管充血所致弥漫性肺出血幼龄大鼠模型。

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2005, 25(3):  150-150. 

摘要 ( 567 )   PDF (2456KB) ( 590 )  

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高糖高脂高胆固醇致兔糖、脂代谢紊乱和胰、肝、肾组织结构的变化

刘毅1, 张弛1, 肖俊霞2, 席守民1, 尹卫东1, 王宗保1

2005, 25(3):  151-156. 

摘要 ( 1148 )   PDF (15653KB) ( 640 )  

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目的 探讨高糖高脂高胆固醇饲料对新西兰兔血糖、甘油三酯、总胆固醇水平和胰、肝、肾组织结构的影响。方法 将雄性新西兰兔20只随机分为2组，10只饲以基础饲料作为正常对照组（C组）；10只饲以高糖高脂高胆固醇饲料作为实验组（HD组），共观察16周，每4周从禁食过夜的兔耳缘静脉抽取血样，测定血清中葡萄糖、甘油三酯和总胆固醇水平。16周时全部处死动物，取胰腺、肝脏和肾脏，用10%中性甲醛液固定，常规石蜡包埋切片，作HE染色、VG染色，并用免疫组织化学方法检测胰岛β细胞。结果 与对照组相比，实验组出现空腹血清总胆固醇、甘油三酯、葡萄糖相继升高（P＜0.05）。以不同喂养时间作方差分析，整体上差异具有统计学意义。喂养16周后，实验组胰、肝、肾病理检查及胰腺免疫组化结果显示：胰岛数量减少，萎缩，胰岛内细胞数目亦减少，胞核浓染、缩小，胞浆内空泡变性明显，红染加深；肝脏脂肪样变性，纤维化；肾小球肥大，硬化，而正常对照组组织结构基本正常。结论 高糖高脂高胆固醇饲料对新西兰兔具有脂肪毒性和葡萄糖毒性，可致血糖、甘油三酯、总胆固醇水平升高，并可引起胰岛β细胞和肝脏、肾脏组织结构损伤。

慢性阻塞性肺病复合肾虚证大鼠模型的建立

张炜, 毕小利

2005, 25(3):  157-161. 

摘要 ( 942 )   PDF (16476KB) ( 532 )  

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目的 建立慢性阻塞性肺病复合肾虚证大鼠模型的方法。方法 采用二氧化硫气体熏吸合并腺嘌呤饲料喂饲复制慢阻肺复合肾虚证模型。分别进行病理图像描述，病理图像分析以进行细支气管内径、外径测量和内外径比值的计算，放射免疫法检测血清睾酮和雌二醇含量。采用SPSS统计软件进行单因素方差分析。结果 复合模型组实验动物肺脏组织病理表现出慢性阻塞性肺病（COPD）特征性改变。与正常组相比复合模型组细支气管内径减少、外径增加以及内外径比值减少，具备了COPD的病理基础；同时还较正常组出现了血浆雌二醇和睾酮含量的下降，具有肾虚证的实验室改变。结论 本造模方法可以复制出慢性阻塞性肺病复合肾虚证的动物模型。

太行山猕猴肩胛骨和肱骨变量相关与异速生长分析

赵晓进, 雷梦云, 赵玉廷, 胡春红, 吴宿慧

2005, 25(3):  162-164. 

摘要 ( 916 )   PDF (7281KB) ( 515 )  

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目的 探讨肩胛骨和肱骨有关变量性别间的差异。方法 测量了26例（♀16，♂10）成年太行山猕猴肩胛骨和肱骨15项变量，并进行SPSS11.0单因素方差分析、双变量相关分析和异速生长分析。结果 （1）9项变量在两性间差异有统计学意义；（2）所分析变量因性别不同，与体重的相关程度不同；与体重呈弱正相关或负相关的变量，其异速生长指数均为负异速生长（b＜1.00）；与体重呈显著或极显著正相关的变量，均为正异速生长（b＞1.00）。结论 成年太行山猕猴性别差异与性成熟时间、生长速度、生活方式和运动行为等有关。

SPF仓鼠种群的建立及规模化生产

夏放, 张华琼, 黄麟, 张水田, 罗素兰, 何凡

2005, 25(3):  165-167. 

摘要 ( 996 )   PDF (6503KB) ( 916 )  

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目的 为提高我国乙型脑炎减毒活疫苗的质量，推动乙型脑炎减毒活疫苗进入国际市场，对普通级金黄仓鼠进行生物学净化。方法 采用剖宫产手术，SPF金黄仓鼠母鼠代乳，建立SPF金黄仓鼠种群。结果 去年年底建立了有200多对SPF金黄仓鼠组成的核心种群，经送中检所实验动物标准化实验室和英国Q-one公司检测，微生物学和寄生虫学检测结果达到国家SPF金黄仓鼠质量标准，尤其是英国Q-one公司检测的10种病毒全部阴性，符合WHO乙型脑炎活疫苗生产和鉴定规程中对金黄仓鼠的质量要求。结论 通过剖宫产手术，成功建立起SPF金黄仓鼠种群，并在屏障系统进行了大规模生产。

弹簧圈阻塞心大静脉动物实验研究

刘凡1, 崔炜1, 郝玉明1, 杜国英1, 张涛1, 张庆1, 苗华为1, 李保华1, 吴金凤1, 谢瑞芹1, 刘坤申2, 都军1

2005, 25(3):  168-169. 

摘要 ( 892 )   PDF (5284KB) ( 702 )  

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目的 应用COOK EMBOLIZATION弹簧圈建立猪心大静脉阻塞的动物模型。方法 20头猪采用经皮穿刺技术，将弹簧圈经冠状窦导管在心大静脉释放并造成心大静脉阻塞的实验模型。结果 20头猪全部完成弹簧圈释放至心大静脉，成功率100%；其中1头猪于弹簧圈放置40min后死亡。1h后造影显示19头中18头猪心大静脉于弹簧圈放置处完全闭塞；1周后再次造影，19头猪心大静脉均于弹簧圈放置部位完全闭塞。结论 采用经皮穿刺技术，放置COOK EMBOLIZATION弹簧圈可造成持久性冠状静脉阻塞的动物模型。

小鼠基因组RAPD-PCR反应条件的优化与筛选

梁永利, 刘学玲, 李浩, 朱健

2005, 25(3):  170-173. 

摘要 ( 1132 )   PDF (10841KB) ( 596 )  

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目的 筛选优化小鼠RAPD-PCR反应体系及扩增程序。方法 以2条引物对4个品系的小鼠基因组DNA在各种不同条件下进行RAPD-PCR，分析比较扩增结果。结果 扩增结果较好的反应体系及扩增程序如下：在25ml的反应体系中含有10×buffer2.5μl，dNTP 200mmol/L，Mg²⁺2.5 mmol/L，引物0.2 mmol/L，Taq酶1.25U，扩增程序为94℃变性1 min，40℃退火1 min，72℃延伸90 s，40个循环后72℃延伸5 min。结论 这一反应体系和扩增程序在我们实验室得到了较好的扩增效果。

去胸腺小鼠模型的建立与改进

冯剑锷, 孙宗全

2005, 25(3):  174-174. 

摘要 ( 1042 )   PDF (4972KB) ( 800 )  

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目的 建立简单易行、稳定可靠的去胸腺小鼠模型。方法 采用术中呼吸机辅助呼吸，术后胸管抽气的方法建立成年去胸腺小鼠模型，结果实验20次，成功16例，成功率为80%。结论 用该方法建立去胸腺小鼠模型成活率高，胸腺切除彻底，效果满意。

几种实验用鱼的研究现状

龙华1, 2, 汪登强2, 陈建武2, 张燕2, 刘江东1, 赵刚1, 陈戟1, 刘薇1, 余其兴1

2005, 25(3):  175-181. 

摘要 ( 837 )   PDF (20807KB) ( 607 )  

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综述了斑马鱼、青鳉、鮈鲫、河鲀、红鲫以及剑尾鱼等6种小型鱼在血液学、遗传学、环境科学、发育生物学以及分子生物学等方面的研究现状，并对具有实验用鱼开发前景的野生白缘（鱼央）的生物学特征进行了评估。

微卫星标记技术及其应用

陈锡文, 管敏强

2005, 25(3):  182-185. 

摘要 ( 1977 )   PDF (11835KB) ( 636 )  

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微卫星标记具有数量多、在基因组中分布广、多态性丰富、呈孟德尔共显性遗性、检测快速方便等特点。本文简述了微卫星技术基本原理、优点和检测方法以及在实验动物科技等领域中的应用，例如遗传连锁图谱、分子标记辅助育种、遗传多样性分析、遗传质量检测等。

独立通气笼具的技术分析与发展前景

尹松林, 袁春萍, 严国锋, 周勇

2005, 25(3):  186-189. 

摘要 ( 854 )   PDF (12004KB) ( 600 )  

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陈天培先生传略

2005, 25(3):  190-190. 

摘要 ( 493 )   PDF (2441KB) ( 518 )  

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本刊征订启事

2005, 25(3):  190-190. 

摘要 ( 251 )   PDF (2057KB) ( 374 )  

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