猴小肠结肠炎耶尔森氏菌实时荧光PCR快速检测方法的建立

doi:10.3969/j.issn.1674-5817.2011.02.004

实验动物与比较医学 ›› 2011, Vol. 31 ›› Issue (2): 92-95.DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2011.02.004

猴小肠结肠炎耶尔森氏菌实时荧光PCR快速检测方法的建立

温和心¹, 蒋荣华¹, 王杰¹, 苏栋¹, 李世照¹, 盘宝进²

1.贵港出入境检验检疫局综合实验室, 贵港537100;
2.广西出入境检验检疫局检验检疫技术中心, 南宁 530021

收稿日期:2010-05-12 出版日期:2011-04-25 发布日期:2011-04-25
作者简介:温和心(1977-), 男, 硕士, 兽医师, 从事进出境动检疫, E-mail: wensomewhx@163.com
基金资助:
广西检验检疫局2009年重点基金项目(2009IK006)

Establishment of Real-time Fluorescent PCR for Rapid Detecting Yersinia Enterocolitica in Monkey

WEN He-xin¹, JIANG Rong-hua¹, WANG Jie¹, SU Dong¹, LI Shi-zhao¹, PAN Bao-jin²

1. Integrated Lab of Guigang Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Guigang 537100, China;
2. Technology Centre of Guangxi Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Nanning 530021, China

Received:2010-05-12 Published:2011-04-25 Online:2011-04-25

摘要/Abstract

摘要： 目的建立一种能快速检测猴小肠结肠炎耶尔森氏菌实时荧光PCR方法。方法以小肠结肠炎耶尔森氏菌耐热肠毒素基因的保守区为靶区域设计特异引物和探针,建立一种能快速检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的实时荧光PCR方法, 并对方法的特异性、敏感性、线性相关性、重复性等因素进行试验。结果建立的荧光PCR法对小肠结肠炎耶尔森氏菌具有特异的反应性,最低检出限为3.3×10 cfu/ml,菌液浓度在3.3×10⁷cfu/ml 至3.3×10 cfu/ml时与Ct值有较好的线性关系,试验重复性良好。结论建立的小肠结肠炎耶尔森氏菌实时荧光PCR检测方法适用于猴小肠结肠炎耶尔森氏菌的快速检测。

关键词: 猴, 小肠结肠炎耶尔森氏菌, 荧光PCR, 快速检测

Abstract: Objective To rapidly detect the Yersinia enterocolitica in monkey ,a real time fluorescent PCR assay was established. Method The primers and probe were designed based on the conserved sequence of heat-labile enterotoxin gene of Yersinia enterocolitica. Then PCR reaction system was optimized and evaluated. Results The established real-time PCR method was sensitive and specific to 3.3×10 cfu/ml bacteria concentration. There was reliable correlation between the template copies (3.3×10¹cfu/ml-3.3×10⁷cfu/ml) and the Ct value. Conclusion The real-time PCR assay was proved to be specific with high sensitivity and efficiency, and would be a powerful diagnosis method of Yersinia enterocolitica in monkey.

Key words: Monkey, Yersinia enterocolitica, Real-time PCR, Detection

中图分类号:

Q95-33

温和心,蒋荣华,王杰,等. 猴小肠结肠炎耶尔森氏菌实时荧光PCR快速检测方法的建立[J]. 实验动物与比较医学, 2011, 31(2): 92-95. DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2011.02.004.

WEN He-xin,JIANG Rong-hua,WANG Jie,et al. Establishment of Real-time Fluorescent PCR for Rapid Detecting Yersinia Enterocolitica in Monkey[J]. Laboratory Animal and Comparative Medicine, 2011, 31(2): 92-95. DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2011.02.004.

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猴小肠结肠炎耶尔森氏菌实时荧光PCR快速检测方法的建立

Establishment of Real-time Fluorescent PCR for Rapid Detecting Yersinia Enterocolitica in Monkey

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