不同冷冻保护剂用于C57BL/6J小鼠精子冷冻的比较研究

›› 2009, Vol. 29 ›› Issue (3): 147-152.

不同冷冻保护剂用于C57BL/6J小鼠精子冷冻的比较研究

1.南京农业大学动物医学院，南京，210095；中国科学院上海实验动物中心，上海，201615；2.中国科学院上海实验动物中心，上海，201615；3.中国科学院上海实验动物中心，上海，201615；西北农林科技大学动物医学院，杨凌，712100；4.南京农业大学动物医学院，南京，210095

收稿日期:2008-10-27 出版日期:2009-03-31 发布日期:2009-03-31

The Comparative Studies on Spermatozoa Cryopreservation in C57BL/6J Mice by Various Cryoprotectants

1. College of Veterinary, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China;2. Shanghai Laboratory Animal Center, CAS, Shanghai 201615, China; 3. College of Veterinary, Northwest Agriculture and Forestry University, Tangling 712100, China

Received:2008-10-27 Online:2009-03-31 Published:2009-03-31

摘要/Abstract

摘要： 目的通过对不同冷冻保护剂用于C57BL/6J小鼠精子冷冻后冻融精子体外受精率的比较，建立一套更适合C57BL/6J小鼠精子冷冻的方法。方法以R18S3为基础液添加不同体积浓度的卵黄和甘油作为冷冻保护剂对C57BL/6J和Y3F小鼠精子进行冷冻，并采用同种方法复苏精子，以体外受精率来评价精子冷冻的效果。结果以R18S3为基础液分别添加体积浓度为5%、10%、15%、20%、25%卵黄离心后获得的上清液作为冷冻保护剂，C57BL/6J小鼠冻融精子体外受精率分别为18.7%、15.6%、36.0%、40.0%、29.7%，差异显着（ P＜0.05）；以R18S3为基础液分别添加体积浓度为1%、2%、3%、4%、5%、6%的甘油作为冷冻保护剂， C57BL/6J小鼠冻融精子体外受精率分别为7.8%、10.0%、16.9%、6.0%、10.3%、18.1%，差异显著（ P＜0.05）；以R18S3+5%卵黄离心后获得的上清液+6%甘油、R18S3+15%卵黄离心后获得的上清液+2%甘油、R18S3+20 %卵黄离心后获得的上清液+1%甘油作为冷冻保护剂，C57BL/6J小鼠冻融精子体外受精率分别为： 16.7%、36.0%、22.9%，差异显著（P＜0.05）；以R18S3作为冷冻保护剂，C57BL/6J小鼠冻融精子体外受精率为25%，异常卵裂率为2.6%。Y3F小鼠冻融精子体外受精率为52.2%，异常卵裂率为 5.1%。结论以R18S3为基础液添加15%或20%的卵黄离心后获得的上清液可以有效提高C57BL/ 6J小鼠冻融精子的体外受精率但添加不同浓度的甘油却降低C57BL/6J小鼠冻融精子体外受精率。添加卵黄和甘油冷冻效果不如卵黄但好于甘油。

关键词: 卵黄, 甘油, 精子, 体外受精

Abstract: Objective To establish a more suitable method to frozen sperm of C57BL/6J by comparing in vitro fertilization rate of post- thawed C57BL/6J mice spermatozoa in various cryoprotectants. Methods To R18S3-based fluid, adding with the different concentrations of egg yolk and glycerine as cryoprotectants to frozen sperm from C57BL/6J and Y3F mice and using the same method of sperm recovery with the rate of in vitro fertilization to evaluate the effect of frozen sperm. Results R18S3 with liquid-based, add with the concentration of 5%，10%，15%，20%, 25% of yolk and centrifuged, then the supernatant as cryoprotectants, the rate of in vitro fertilization and frozen-thawed sperm of C57BL/ 6J mice is 18.7%, 15.6%，36.0%, 40.0%，29.7% respectively with a significant different. R18S3 with liquid-based,add with the concentration of 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6% glycerol as cryoprotectants, the rates of in vitro fertilization of freeze-thawed sperm of C57BL/6J mice were 7.8%, 10.0%, 16.9%, 6.0%, 10.3%, 18.1% respectively with a significant difference.The supernatant of R18S3 +5%yolk after centrifugation +6% glycerol; the supernatant of R18S3 +15% yolk after centrifugation +2% glycerol; the supernatant of R18S3 +20% yolk after centrifugation +1% glycerol as cryoprotectants, the rates of in vitro fertilization of freeze-thawed sperm of C57BL/6J mice were 16.7%, 36.0% and 22.9% respectively with a significant difference. R18S3 as cryoprotectants, the rate of in vitro fertilization of freeze-thawed sperm of C57BL/6J mice is 25%, the rate of abnormal cleavage is 2.6%; the rate of in vitro fertilization of freeze-thawed sperm of Y3F mice is 52.2%, the rate of abnormal cleavage is 5.1%. Conclusion The supernatant of R18S3 +15%/20% yolk after centrifugation as cryoprotectants can raise the rate of in vitro fertilization of freeze-thawed sperm of C57BL/6J mice but adding with the different concentrations of glycerol can reduce the rate. The frozen effect of adding with both yolk and glycerol less than the effect of adding only yolk, but better than the effect of adding only glycerol.

Key words: Yolk, Glycerol, Sperm, in vitro fertilization

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