小鼠肝炎病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

doi:10.3969/j.issn.1674-5817.2015.01.002

实验动物与比较医学 ›› 2015, Vol. 35 ›› Issue (1): 6-9.DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2015.01.002

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小鼠肝炎病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

周洁, 高诚, 胡建华

上海实验动物研究中心, 上海 201203

收稿日期:2014-06-30 出版日期:2015-02-25 发布日期:2015-02-25
作者简介:周洁(1978-), 女, 博士, 副研究员, 主要从事动物病毒分子生物学及免疫学方面的研究。 E-mail:zhoujie1025@yahoo.com.cn
基金资助:
上海市科委科技创新行动计划(08140901200)

Development of a Double Antibody Sandwich ELISA for Detection of Mouse Hepatitis Virus

ZHOU Jie, GAO Cheng, HU Jian-hua

Shanghai Laboratory Animal Research Center, Shanghai 201203, China

Received:2014-06-30 Online:2015-02-25 Published:2015-02-25

摘要/Abstract

摘要： 目的建立小鼠肝炎病毒(MHV)双抗体夹心ELISA检测方法。方法将4株特异性抗MHV N蛋白的单克隆抗体进行抗体配对试验确定3D4H9为捕获抗体,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的4G9F2为检测抗体;通过方阵试验确定了3D4H9和4G9F2-HRP的最佳工作浓度分别为12.8 ng/mL和70.84 ng/mL,以P/N>2,同时D_450nm≥0.248作为阳性临界值的判定。结果该ELISA方法重复性变异系数小于10%,与小鼠细小病毒、仙台病毒、小鼠肺炎病毒、呼肠孤病毒3型等无交叉反应,对358份血清样品进行检测,与美国EBI公司的间接ELISA试剂盒检测结果无明显差异。结论本研究建立的双抗体夹心ELISA方法检测MHV具有较高的特异性和敏感性,可以用于MHV的病原学检测。

关键词: 小鼠肝炎病毒(MHV), 单克隆抗体, 双抗体夹心ELISA方法

Abstract: Objective To develop a sandwich ELISA for detection of mouse hepatitis virus (MHV). Method The ELISA was standardized by pair-matching experiment, and the working concentrations of the mAb 3D4H9 and HRP-conjugate mAb 4G9F2 were 12.8 ng/mL and 70.84 ng/mL, respectively, and judging with P/N>2 and absorbance_450nm ≥0.248 as positive criteria. Results The DAS-ELISA was specific for detection of MHV, but no cross-reaction with minute virus of mouse, reovirus type 3, sendai virus, pneumonia virus of mice. The intra-assay and inter-assay coefficient of variability were within 10%. In addition, a total 358 samples were tested by the DAS-ELISA, and indirect ELISA, there was no significant difference between results. Conclusion The DAS-ELISA was sensitive and specific which provided a useful tool for diagnosis of MHV.

Key words: Mouse hepatitis virus(MHV), Monoclonal antibodies, Double antibody sandwich ELISA

中图分类号:

Q95-33

周洁, 高诚, 胡建华. 小鼠肝炎病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立[J]. 实验动物与比较医学, 2015, 35(1): 6-9.

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小鼠肝炎病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

Development of a Double Antibody Sandwich ELISA for Detection of Mouse Hepatitis Virus

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