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2021年 第41卷 第4期    刊出日期：2021-08-25

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创刊40 周年专家论坛

脑缺血动物模型的制备及评估进展

胡志斌, 黄缨, 丁玉强

2021, 41(4):  271-283.  DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2021.085

摘要 ( 724 )   HTML ( 255)   PDF (17292KB) ( 467 )  

图表数据 | 参考文献 | 相关文章 | 计量指标

脑缺血是临床上常见的脑血管疾病,约占所有脑血管疾病的80%,其主要是由于脑血管供血不足引起。目前已有多种动物模型被用来进行脑缺血致病机制及治疗研究。本文结合造模示意图,介绍全脑及局灶性相关脑缺血动物模型的种类及制备方法,并对其优缺点进行了概括;同时对脑缺血模型制备所用的动物种类、啮齿类动物相关感觉运动能力评估及组织学评估的研究进展进行综述,以期为脑缺血动物模型的选择和应用提供参考。



创刊40 周年专题：各地实验动物科学发展

江苏省实验动物行政许可现状

陈林, 艾曼, 徐航, 漆重阳, 施爱民

2021, 41(4):  284-289.  DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2021.071

摘要 ( 498 )   HTML ( 28)   PDF (8791KB) ( 304 )  

图表数据 | 参考文献 | 相关文章 | 计量指标

本文对江苏省实验动物行政许可的情况进行了调查,综述了近年来江苏省实验动物行政许可的具体数据,分析了江苏省实验动物行政管理的现状,并提出相应的对策和措施,为江苏省及其他地区实验动物行业管理提供参考。



人类疾病动物模型

小鼠脊髓损伤打击模型精细行为的比较研究

颜义彤, 白帆, 荆瀛黎, 王立淼, 李子晗, 于艳

2021, 41(4):  290-298.  DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2020.221

摘要 ( 359 )   HTML ( 20)   PDF (4290KB) ( 884 )  

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目的 探讨脊髓损伤小鼠除运动功能障碍外,在自主运动、探索行为和自我照顾行为等家笼（homecage）内精细行为方面的异常表现。方法 8周龄雌性C57BL/6小鼠10只,接受T10脊髓打击造模。另选11只小鼠为假手术组。术后1~5周,每日固定时间将小鼠置于家笼中记录其精细行为,使用HomeCageScan软件分析动物32种日常行为所占时间百分比。结果 与假手术组动物相比,早期脊髓损伤小鼠的探索行为、自主运动和自我照顾行为中多数行为活动均存在显著异常（P<0.01）,部分行为在损伤后1~5周出现恢复。脊髓损伤后1~5周小鼠以直立和嗅为代表的探索行为与假手术组相比明显减少（P<0.01）,分别于术后第4周与第3周恢复至与术后第1周有明显差异（P<0.05）;脊髓损伤组小鼠以缓慢行走和跳跃为代表的自主运动与假手术组相比明显减少（P<0.05）,分别于术后第2周和第5周恢复至与术后第1周有明显差异（P<0.05）;以抽搐和理毛行为为代表的自我照顾行为与假手术组相比明显增加（P<0.01）,且在术后1~5周无明显改善。结论 脊髓损伤小鼠除双下肢运动功能障碍外,还存在探索行为、自主运动和自我照顾行为等方面的异常。损伤后1~5周,探索行为和自主运动行为出现不同程度的恢复,而自我照顾行为持续异常。自动化高通量家笼内精细行为检测系统可对数十种动物行为进行精确分类和全面记录,是针对脊髓损伤行为障碍的一种更全面和敏感的评价工具。



肉芽肿小叶性乳腺炎大鼠模型建立初探

左禧萌, 史晓光, 刘洁丽, 杨臻瑞, 高翔, 赖瑞, 赵泽, 汪唐顺

2021, 41(4):  299-304.  DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2020.149

摘要 ( 478 )   HTML ( 13)   PDF (19180KB) ( 186 )  

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目的 利用人肉芽肿小叶性乳腺炎标本匀浆和完全弗氏佐剂的混悬液构建肉芽肿小叶性乳腺炎动物模型。方法 将25只有孕产史的SD大鼠随机分为5组：空白对照组、完全弗氏佐剂组、正常乳腺组织匀浆组、病变乳腺组织匀浆低剂量组和病变乳腺组织匀浆高剂量组,每组5只。病变乳腺组织匀浆组以人肉芽肿性乳腺炎组织匀浆制备的完全弗氏佐剂混悬液,接种于大鼠第3、4对乳腺组织（高剂量组注射0.2 mL,低剂量组注射0.1 mL）;正常乳腺组织匀浆组接种肉芽肿性乳腺炎患者的正常乳腺组织匀浆液;空白对照组接种生理盐水（即0.9% NaCl溶液）;完全弗氏佐剂组接种完全弗氏佐剂。造模完成后维持饲养14 d,观察组织形态学及HE切片染色后的组织病理学特征,比较肉芽肿小叶性乳腺炎模型的建立效果。结果 与空白对照组、完全弗氏佐剂组、正常乳腺组织匀浆组对比,病变乳腺组织匀浆高低剂量组均呈现不同程度的肉芽肿小叶性乳腺炎特有的形态学改变及病理学特征,组间对比差异具有统计学意义（P<0.001）。结论 人肉芽肿小叶性乳腺炎标本匀浆和完全弗氏佐剂的混悬液可成功建立肉芽肿小叶性乳腺炎大鼠模型,为该病的病因学研究奠定了基础。



槲皮素对镉致小鼠肝脏脂质代谢紊乱模型的保护效应

李自发, 张浩, 任萌, 徐凯勇, 胡明会, 周苗苗, 王可洲

2021, 41(4):  305-312.  DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2021.007

摘要 ( 400 )   HTML ( 9)   PDF (6313KB) ( 438 )  

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目的 探究槲皮素对镉致小鼠肝损伤的保护效应及机制。方法 C57BL/6J小鼠分为对照组、镉组（灌胃氯化镉）、槲皮素组（灌胃槲皮素）、镉与槲皮素共处理组（灌胃氯化镉+槲皮素）。给药结束后,测定小鼠体质量、血清中谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）活性及血清与肝组织中总胆固醇（TC）和三酰甘油（TG）含量;HE染色观察肝组织病理学变化,油红O染色观察肝组织脂滴变化;免疫印迹法检测脂质合成关键酶脂肪酸合成酶（FAS）与分解关键酶脂蛋白脂酶（LPL）变化。结果 与对照组相比,镉染毒小鼠体质量显著下降（P<0.01）,血清ALT与AST活性显著升高（P<0.01）,肝组织发生明显肝损伤病理学变化,血清与肝脏中TC和TG含量明显上升（P<0.01）,且肝组织内脂肪滴大量沉积（P<0.01）,肝脏中FAS蛋白水平显著上调（P<0.01）,而LPL蛋白水平显著下调（P<0.01）。槲皮素干预可显著改善以上各项指标的异常变化（P<0.05或P<0.01）。结论 槲皮素可通过调节肝脏脂质代谢紊乱,对镉导致的小鼠肝损伤起到保护效应。



二甲双胍对阿尔茨海默症模型大鼠认知功能障碍及PI3K/Akt通路的影响

王百乔, 林小茹, 韩敏, 刘煜, 唐超玲

2021, 41(4):  313-320.  DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2020.185

摘要 ( 383 )   HTML ( 29)   PDF (21274KB) ( 186 )  

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目的 探讨二甲双胍（metformin,Met）对阿尔茨海默症（Alzheimer's disease,AD）大鼠磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）通路及认知功能障碍的影响。方法 取SD大鼠50只,用随机数字表法分为正常组（Normal组）、AD模型组（AD组）、Met低剂量（50 mg/kg）组、Met中剂量（100 mg/kg）组、Met高剂量（200 mg/kg）组,每组10只;除Normal组外,其余各组大鼠均在双侧脑室注射10 μL链脲霉素（3 mg/kg）建立AD模型。造模成功后开始给药,Met组灌胃给予相应剂量的Met溶液,Normal组和AD组灌胃给予等量生理盐水,各组连续给药14 d,1次/d。末次给药后用Morris水迷宫试验检测大鼠空间认知功能。处死大鼠,取海马组织,用ELISA法检测海马组织中β-淀粉样蛋白42（β-amyloid protein 42,Aβ42）与磷酸化Tau蛋白（p-tau）含量;用HE染色法观察海马组织中神经元病理变化;用免疫组织化学法检测PI3K阳性表达;用蛋白质印迹法检测海马组织中PI3K、磷酸化Akt（p-Akt）、胰岛素受体底物-1（insulin receptor substrate-1,IRS-1）、糖原合酶激酶-3（glycogen synthase kinase-3,GSK-3）蛋白相对表达水平。结果 与Normal组相比,AD组大鼠海马可见神经元细胞排列紊乱、减少等病理损伤,大鼠穿越平台次数、原平台象限游泳距离与总距离的比值、游泳时间与总时间的比值均明显减少（P<0.05）,海马组织中PI3K、p-Akt和IRS-1蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）,平均逃避潜伏期延长（P<0.05）,海马组织Aβ42及p-tau含量、GSK-3蛋白表达明显升高（P<0.05）;与AD组相比,Met低、中、高剂量组大鼠海马组织的病理损伤减轻,大鼠穿越平台次数、原平台象限游泳距离与总距离的比值、游泳时间与总时间的比值均明显增加（P<0.05）,海马组织PI3K、p-Akt、IRS-1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,平均逃避潜伏期缩短（P<0.05）,海马组织Aβ42及p-tau含量、GSK-3蛋白表达明显降低（P<0.05）,且Met各剂量组上述指标呈剂量依赖性。结论 Met可激活AD大鼠海马组织PI3K/Akt通路,降低海马组织p-tau、Aβ42含量,改善AD大鼠认知障碍。



β-氨基丙腈联合血管紧张素Ⅱ改良法建立小鼠主动脉夹层模型

程玲霞, 陈琳, 杨帆, 刘英, 陈睦虎, 胡迎春, 宋其泰, 钟武

2021, 41(4):  321-326.  DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2020.200

摘要 ( 337 )   HTML ( 8)   PDF (10545KB) ( 153 )  

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目的 探讨一种构建小鼠主动脉夹层模型的改良方法。方法 β-氨基丙腈（β-aminopropionitrile,BAPN）联合血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,Ang-Ⅱ）建立小鼠主动脉夹层模型。100只6周龄雄性C57BL/6J小鼠随机取20只作为对照组,另80只用于造模,其中单纯BAPN组40只和BAPN+ Ang-Ⅱ组40只。BAPN组小鼠给予0.1 g·kg^-1·d^-1 BAPN饮水;BAPN+Ang-Ⅱ组小鼠除给予BAPN 0.1g·kg^-1·d^-1饮水外,皮下注射Ang-Ⅱ（根据时间调整注射剂量：1~7 d Ang-Ⅱ 剂量为1.5 mg·kg^-1·d^-1,8~14 d Ang-Ⅱ为 0.75 mg·kg^-1·d^-1,15~16 d Ang-Ⅱ为 0.375 mg·kg^-1·d^-1）,BAPN组注射等体积生理盐水。药物干预16 d后取材。记录小鼠体质量及饮水量,实验进程中小鼠如有死亡立即解剖,分析死因。实验17 d,将未死亡的小鼠颈部脱臼处死,留取组织备用;HE染色判断主动脉夹层形成情况。结果 BAPN+ Ang-Ⅱ组及BAPN组分别与对照组相比,动物饮水量均减少、体质量增加趋势减慢（P<0.05）。对照组夹层发生率及死亡率均为0;BAPN组夹层发生率为7.5%,死亡率为2.5%,BAPN+Ang-Ⅱ组夹层发生率为80%,死亡率为30%。BAPN+Ang-Ⅱ组小鼠均死于调整Ang-Ⅱ剂量后1~3 d,83.3%小鼠死于注射药物后数分钟。结论 给于C57BL/6J小鼠持续BANP饮水联合Ang-Ⅱ皮下注射成功构建主动脉夹层模型,具有周期短、模拟效果确切、死亡时间有一定规律、经济、稳定可重复等优点。



高渗盐水保护血脑屏障减轻脑出血大鼠脑水肿的相关机制研究

第五飞虎, 赵志靖, 邓毅恒

2021, 41(4):  327-332.  DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2020.140

摘要 ( 329 )   HTML ( 12)   PDF (20877KB) ( 139 )  

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目的 探讨高渗盐水治疗减轻脑出血模型大鼠脑水肿的相关机制。方法 60只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组。在大鼠脑实质注射胎牛血清制作脑出血大鼠模型后,治疗组大鼠经尾静脉泵入10%高渗盐水,0.3 mL/h,共48 h。对比各组大鼠死亡率,取脑组织,肉眼观察其外观与病理学变化;同时,测定各组大鼠的脑含水量、脑组织中基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）与基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（metallopeptidase inhibitor-1,TIMP-1）比例,以及相关紧密连接蛋白claudins、occludin和zonula occludens-1（ZO-1）表达的差异。结果 模型组大鼠死亡率和脑组织含水量均明显高于治疗组（均P<0.05）。肉眼观察显示,模型组大鼠脑中线明显从病灶侧移向对侧,治疗组大鼠脑中线未见偏移。显微镜下,治疗组大鼠脑组织水肿明显减轻,炎性细胞渗出明显减少。另外,治疗组大鼠脑组织中MMP-9/TIMP-1比例明显低于模型组,而紧密连接蛋白claudin-5、occludin以及ZO-1均高于模型组（均P<0.05）。结论 高渗盐水可通过降低MMP-9/TIMP-1比例,稳定紧密连接蛋白claudin-5、occludin以及ZO-1的表达,维持血脑屏障结构完整性,改善脑出血后脑水肿的严重程度,从而降低实验模型大鼠的死亡率。



实验动物与安全性评价

耐辐射奇球菌R1对大鼠的慢性毒性实验

许琴, 王玮, 董翔, 李建瑛, 是文辉, 刘晓禄, 刘爱中, 马娜, 宋来阳, 刘江伟

2021, 41(4):  333-342.  DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2020.213

摘要 ( 312 )   HTML ( 8)   PDF (14608KB) ( 143 )  

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目的 观察耐辐射奇球菌R1（Deinococcus radiodurans R1,DRR1）对SD大鼠的慢性毒性。方法 将高浓度（10⁹/mL,LDRH组）和低浓度（10⁷/mL,LDRL组）的DRR1活菌以及高浓度（10⁹/mL,BDRH组）和低浓度（10⁷/mL,BDRL组）的细菌破碎物以1 mL/100 g体质量的剂量灌胃SD大鼠,同时以灌胃相同体积的TGY琼脂培养液（含0.5%胰蛋白胨、0.1%葡萄糖和0.3%酵母提取物）作为对照组（TGY组）;每组16只,雌雄各半,每日灌胃给药1次,连续30 d。每组随机取8只大鼠,用3%戊巴比妥钠0.15 mL/100 g体质量腹腔注射麻醉,收集血液及脏器标本,检测血常规、血清电解质、血清生化指标和脏器系数;主要脏器经体积分数为10%的中性甲醛溶液固定,行HE染色,光学显微镜下观察病理学变化。每组其余8只大鼠于停药14 d后作相同处理,观察DRR1的延迟毒性。实验期内观测大鼠行为、摄食量和体质量等一般情况。结果 不同浓度的DRR1活菌及DRR1破碎物给药30 d后,停药即刻及停药14 d后,未见各组大鼠的运动、呼吸异常,未观察到反应迟钝、瞳孔改变、眼球凸出、皮肤颜色改变等异常现象,口、耳、鼻、眼角均未见异常分泌物,排便及形态正常;摄食量、体质量变化和脏器系数与TGY组比较,均无显著改变;白细胞数在给药30 d时显著下降（P<0.05）,停药14 d后恢复至正常水平;红细胞数、红细胞压积和血红蛋白含量无显著变化,淋巴细胞、粒细胞、单核细胞数及其百分比无显著变化,血小板数也无显著变化。停药后即刻血清谷丙转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、总蛋白（TP）、尿酸（UA）、尿素（UREA）、血糖（Glu）、镁（Mg）和磷（P）含量无显著变化,血清谷草转氨酶（AST）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）和乳酸脱氢酶（LDH）在LDRH组显著升高（P<0.05）;经14 d恢复期后,AST、CK降至恢复期TGY组水平,CK-MB仍高于恢复期TGY组（P<0.05）;恢复期的LDH水平与停药即刻比较,显著增高（P<0.05）,与恢复期TGY组比较无显著差异。与TGY对照组比较,给药30 d时血清离子浓度在各给药组间没有显著变化（P>0.05）;停药14 d后,LDRH组血清Cl^-、Ca²⁺降低,Na⁺、pH值升高（P<0.05）;对心、肝、肺和肾的病理学观察均未见明显实质性病变。结论 DRR1活菌及其细菌破碎物对大鼠无实际毒性,该实验为DRR1的拓展应用提供了实验数据。



实验动物质量控制

小鼠诺如病毒感染实验小鼠的抗体变化规律分析

李晓波, 付瑞, 王淑菁, 李威, 王莎莎, 黄宗文, 秦骁, 王吉, 岳秉飞

2021, 41(4):  343-350.  DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2020.127

摘要 ( 278 )   HTML ( 12)   PDF (7133KB) ( 377 )  

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目的 研究KM、BALB/c、NIH、C57BL/6J及BALB/c-nu共5个品系小鼠感染小鼠诺如病毒（murine norovirus,MNV）后总IgG抗体及中和抗体的变化规律。方法 收集KM、BALB/c、NIH、C57BL/6J及BALB/c-nu共5个品系小鼠,每个品系分为对照组和感染组,感染组灌胃接种MNV液,对照组灌胃同等体积的生理盐水（即0.9%NaCl溶液）。分别在感染后第1~9周采血分离血清,ELISA法测定总IgG抗体水平（即吸光度值）,RAW264.7细胞病变法测定中和抗体滴度（即半数保护剂量,PD₅₀）。t检验比较感染组和对照组在每个时间点的总IgG抗体吸光度均值差异;单因素方差分析比较各品系小鼠感染组总抗体及中和抗体滴度,分析各品系小鼠的抗体变化规律。结果 经t检验,KM、BALB/c、NIH、C57BL/6J及BALB/c-nu小鼠分别在第21、35、14、14及28天感染组总IgG抗体吸光度均值显著高于对照组（P<0.01）。各品系小鼠的总IgG抗体水平相比,NIH>C57BL/6J>KM>BALB/c>BALB/c-nu,且BALB/c及BALB/c-nu总抗体吸光度均值显著低于NIH和C57BL/6J小鼠（P<0.05）;NIH、C57BL/6J、KM及BALB/c小鼠感染第6周时抗体水平升高较快,NIH小鼠第49天进入平台期,其余3个品系小鼠在实验周期内总IgG抗体水平仍处于上升趋势,其中BALB/c-nu小鼠总抗体水平最低。各品系小鼠的中和抗体滴度比较,C57BL/6J>NIH>KM>BALB/c>BALB/c-nu,其lgPD₅₀均值分别为3.881、3.819、3.746、3.146及2.338;经方差分析显示,BALB/c及BALB/c-nu小鼠中和抗体滴度显著低于C57BL/6J、NIH及KM小鼠（P<0.01）。除了BALB/c-nu小鼠外,其余4个品系小鼠感染第2周时中和抗体滴度升高较快,BALB/c-nu小鼠中和抗体一直处于较低水平。结论 NIH、C57BL/6J及KM小鼠感染MNV的体液免疫应答较强,BALB/c及BALB/c-nu小鼠体液免疫应答较弱。



小鼠嗜肺巴斯德杆菌检测方法优化及感染小鼠的药物净化

张韬, 崔璨, 马贯中, 张爱华

2021, 41(4):  351-357.  DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2020.197

摘要 ( 467 )   HTML ( 17)   PDF (7104KB) ( 351 )  

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目的 优化小鼠嗜肺巴斯德杆菌（Pasteurella pneumotropica）检测方法,提高检测敏感性以强化嗜肺巴斯德杆菌的日常监测,并探讨感染小鼠药物净化的可行性。方法 采用直接涂板法和改良增菌法同时检测嗜肺巴斯德杆菌,比较两种方法的检测效果。采用纸片扩散法研究本地分离的嗜肺巴斯德杆菌菌株对12种抗生素的敏感性。48只雌性C57BL/6小鼠随机分为6组,每组8只,用不同质量浓度的恩诺沙星连续给药6周,评估恩诺沙星在C57BL/6小鼠的安全使用剂量。用本地分离的嗜肺巴斯德杆菌感染小鼠,然后给予嗜肺巴斯德杆菌阳性鼠以含不同质量浓度恩诺沙星的饮用水,检测恩诺沙星对嗜肺巴斯德杆菌感染小鼠的清除效果,确定药物净化方案。结果 直接涂板法和改良增菌法检测嗜肺巴斯德杆菌的检出率分别为1.3%和15.1%（P<0.05）;嗜肺巴斯德杆菌对恩诺沙星、头孢西丁和头孢羟唑等抗生素敏感;300 mg·kg^–1·d^–1以下剂量的恩诺沙星饮水给药对小鼠无明显毒副作用;85 mg·kg^–1·d^–1以上剂量的恩诺沙星对嗜肺巴斯德杆菌阳性成年鼠饮用水给药,用药2周后均转阴,停药6周仍未转阳。结论 改良增菌法检测嗜肺巴斯德杆菌的敏感性高于直接涂板法,且流程简单便捷,适用于动物房的日常健康监测。85 mg·kg^–1·d^–1以上剂量的恩诺沙星饮水给药能安全有效地清除小鼠嗜肺巴斯德杆菌,必要时可以作为嗜肺巴斯德杆菌感染小鼠的应急净化方案。



实验动物福利与伦理

小鼠生活笼实验引入适应期的必要性研究

尹媛, 陆璐, 王蕴, 杨景, 付鹤玲

2021, 41(4):  358-362.  DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2020.154

摘要 ( 407 )   HTML ( 29)   PDF (1013KB) ( 811 )  

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目的 探讨用于小鼠代谢功能检测的生活笼实验是否需要引入适应期,以及如何判断和设置适应期时间长短。方法 收集2016—2017年的31次小鼠生活笼实验数据。每次实验设置3 d即72 h适应期,记录小鼠饮水、饮食、产热率和体质量等数据,72 h后开始正式检测。对收集到的饮水、饮食、产热率和体质量数据做24 h分段分析,判断小鼠适应效果。结果 356只小鼠中有约12%在96 h实验结束时饮水量低于1 mL,24~48 h与48~72 h的饮水量、进食量、产热率和体质量均存在明显差异（均P<0.05）;48~72 h与72~96 h的饮水量、产热率和体质量无明显差异（P>0.05）,但进食量仍存在明显差异（P<0.05）。对各次实验的进食量适应性做独立验证,发现进食量适应性与小鼠体质量存在显著相关性（P<0.05）。结论 有约12%的小鼠在72 h适应期结束后仍无法适应新水瓶,设计实验时需要考虑增加样本数量。如果进食量数据不是重点研究方向,48 h适应期已经足够得到稳定结果。

实验动物产业与信息服务

实验动物电商平台数据分析与对策建议

温金银, 陈焰, 李会萍

2021, 41(4):  363-368.  DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2021-017

摘要 ( 308 )   HTML ( 14)   PDF (3116KB) ( 469 )  

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本文以2018年广东省实验动物监测所建立的实验动物电子商务平台为例,着重分析平台商品类目的数据特点,以及平台运营过程中的访问量、点击率、转化率、搜索率等数据指标,并就当前存在的问题提出相关对策和建议,包括进一步明确和规范商品类目、完善搜索引擎功能、增强个性化服务和加强监管机制等,以期为实验动物电商平台的可持续运营和发展提供重要参考和指导。