长爪沙鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒抗体ELISA检测方法的建立与应用

doi:10.3969/j.issn.1674-5817.2015.06.009

实验动物与比较医学 ›› 2015, Vol. 35 ›› Issue (6): 473-477.DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2015.06.009

长爪沙鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒抗体ELISA检测方法的建立与应用

王吉, 卫礼, 付瑞, 李晓波, 王淑菁, 邢进, 冯育芳, 巩薇, 岳秉飞, 贺争鸣

中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所、国家实验动物微生物、遗传检测中心, 北京 100050

收稿日期:2015-06-15 出版日期:2015-12-25 发布日期:2015-12-25
作者简介:王吉(1974-), 女, 副研究员, 研究方向: 微生物学和免疫学。E-mail: wj_nd_jds@sina.com
基金资助:
国家科技支撑计划项目(2013BAK11B01)

Establishment and Preliminary Application of ELISA in Detecting Lymphocytic Choriomeningitis Virus Antibody in Mongolian Gerbil

WANG Ji, WEI Li, FU Rui, LI Xiao-bo, WANG Shu-jing, XING Jin, FENG Yu-fang, GONG Wei, YUE Bing-fei, HE Zheng-ming

National Institutes for Food and Drug Control, National Center for Quality of Laboratory Animal, Beijing 100050, China

Received:2015-06-15 Online:2015-12-25 Published:2015-12-25

摘要/Abstract

摘要： 目的建立长爪沙鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)抗体ELISA检测方法, 应用于长爪沙鼠携带LCMV的检测。方法培养Vero细胞,接种LCMV毒种,制备Vero正常抗原和LCMV特异抗原,滴定酶结合物、正常抗原及特异抗原最佳工作浓度,并进行方法的特异度、灵敏度、精密性、稳定性实验。结果正常抗原、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为0.4 mg/mL、10 mg/mL和1∶5 000; 正常抗原、特异抗原批内变异系数分别为6.8%和8.9%,批间平均变异系数分别为9.3%和8.4%; 检测灵敏度达到1∶1 280; 与小鼠仙台病毒(SV)、小鼠呼肠孤病毒3型(Reo3)均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于25%。结论建立的ELISA方法特异度、灵敏度强,重复性、稳定性好,可用于长爪沙鼠LCMV抗体的检测。

关键词: 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV), ELISA, 长爪沙鼠

Abstract: Objectives To develope the ELISA method for determination of lymphocytic choriomeningitis virus (LCMV) antibody in Mongolian gerbils. Methods Raised the Vero cell, vaccinated the LCMV, prepared the normal Vero antigen and specific LCMV antigen, titrated the best working density of enzyme union, the normal and specific antigen and verified the specificity, sensitivity, accuracy and stability of the method. Result The best working density of normal, specific antigen and the enzyme union were 0.4 mg/mL, 10 mg/mL and 1∶5 000, respectively. The inter-assay coefficient of variation of normal antigen and specific antigen were 6.8% and 8.9%, respectively, the intra-assay average coefficient of variation were 9.3% and 8.4%, respectively. The detection sensitivity was 1∶1 280. There was no cross-reactivity with mammalian orthoreovirus 3 (Reo3) and murine encephalomyelitis virus (M-TMEV). The stability test shows the relative deviation was below 25%. Conclusion The ELISA method is good in specificity, sensitivity, duplication, and stability, so ELISA could be used in detecting the LCMV antibody.

Key words: Lymphocytic choriomeningitis virus (LCMV), ELISA, Mongolian gerbil

中图分类号:

Q95-33

王吉, 卫礼, 付瑞, 李晓波, 王淑菁, 邢进, 冯育芳, 巩薇, 岳秉飞, 贺争鸣. 长爪沙鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒抗体ELISA检测方法的建立与应用[J]. 实验动物与比较医学, 2015, 35(6): 473-477.

WANG Ji, WEI Li, FU Rui, LI Xiao-bo, WANG Shu-jing, XING Jin, FENG Yu-fang, GONG Wei, YUE Bing-fei, HE Zheng-ming. Establishment and Preliminary Application of ELISA in Detecting Lymphocytic Choriomeningitis Virus Antibody in Mongolian Gerbil[J]. Laboratory Animal and Comparative Medicine, 2015, 35(6): 473-477.

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长爪沙鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒抗体ELISA检测方法的建立与应用

Establishment and Preliminary Application of ELISA in Detecting Lymphocytic Choriomeningitis Virus Antibody in Mongolian Gerbil

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