ELISA方法检测抗体中两种显色系统的比较研究

›› 2010, Vol. 30 ›› Issue (5): 368-371.

ELISA方法检测抗体中两种显色系统的比较研究

中国药品生物制品检定所；国家实验动物微生物、遗传检测中心，北京100050

收稿日期:2010-01-14 出版日期:2010-05-31 发布日期:2010-05-31

Comparative Study on Two Color Systems in Antibody Detection by ELISA

National Institute for the Control ofPharmaceutical and Biology Products, National Center for Microbiological and Cenetic Monitoring of Laboratory Animal，Beijing 100050, China

Received:2010-01-14 Online:2010-05-31 Published:2010-05-31

摘要/Abstract

摘要： 目的用TMB（3，3，5，5-四甲基联苯胺）替代OPD（邻苯二胺）作为ELISA实验中的显色剂，以减少OPD对实验操作人员的危害及对环境的污染。方法依据国家标准ELISA法进行操作，对小鼠肝炎病毒（MHV）抗体ELISA法的OPD和TMB两种显色系统的稳定性、特异性、敏感性及重复性进行比较。结果 TMB系统较OPD系统：TMB比OPD稳定，相对偏差（15.3%）小于OPD（17.7%）；TMB系统特异抗原孔P/N值高于OPD特异抗原孔P/N值，差异显著（P＜0.05）；酶的使用浓度TMB是OPD的0.25倍，检测灵敏度是OPD的2倍；使用TMB，正常抗原和特异抗原孔批内和批间变异系数分别为3.9%、4.7%和13.0%、11.3%：而OPD分别为2.7%、4.5%和11.2%、9.5%。结论 TMB较OPD稳定性、重复性好，敏感性、特异性强，可以替代OPD作为MHV抗体ELISA法的显色剂。

关键词: ELISA, 小鼠肝炎病毒, TMB, OPD

Abstract: Objective In order to reduce the harm of OPD(O-phenylenediamine) to the operators and pollution to environment, TMB (tetramethylbenzidine) was used as a color reagent to replace OPD in ELISA. Methods The operation was carried out on the basis of GB/T 14926.50-2001, to compare stability, specificity, sensitivity and repeatability of two color systems in detection of mouse hepatitis virus (MHV) antibody by ELISA. Result The TMB is more stable tiian OPD, the relative deviation (15.3%) is smaller than OPD(17.7%); the special antigen P/N value of TMB is higher than OPD and the difference is significant (P＜0.05); The working concentration of Enzyme of TMB is 0.25 times that of OPD, and the detection sensitivity is twice that of OPD; When using TMB, The inter-assay and the intra-assay average coefficient of variation of normal antigen and special antigen is 3.9%513.0% and 4.7%, 11.3% while the OPD is 2.7%, 11.2% and 4.5%,9.5%. Conclusion TMB is better than OPD in stability，reproduction, sensitivity and specificitys. TMB as a color reagent may replace OPD in detection of mouse hepatitis virus (MHV) antibody by ELISA.

Key words: ELISA, TMB, OPD

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