胶原酶冷消化法分离制备罗非鱼肝细胞

›› 2007, Vol. 27 ›› Issue (3): 180-182.

胶原酶冷消化法分离制备罗非鱼肝细胞

同济大学附属东方医院，上海 200120

收稿日期:2007-03-30 出版日期:2007-03-31 发布日期:2007-03-31
基金资助:
上海市自然科学基金资助项目（03ZR14079）

Preparation of Tilapia Hepatocytes by Cold Digestion of Collagenase

Department of General Surgery, Shanghai East Hospital, Tongji University, Shanghai 200120, China

Received:2007-03-30 Online:2007-03-31 Published:2007-03-31

摘要/Abstract

摘要： 目的研究罗非鱼肝细胞的分离提取的方法、鉴定.方法将鱼肝脏经D-Hank液反复洗涤后剪碎经IV型胶原酶消化后过滤、离心、经DMEM洗涤后用Percoll分离液行肝细胞纯化、细胞计数，光镜下观察其形态结构.结果胶原冷消化法分离后的细胞中仍含有一定量的杂细胞，可采用90g，60g，30g离心进一步分离提纯.结论胶原酶冷消化法获得满意结果，60g离心2min和30g离心3min可达到纯度和产量均较理想的结果.

关键词: 胶原酶, 冷消化, 罗非鱼, 肝细胞, 分离

Abstract: Objective To investigate the method of isolation and extraction of tilapia hepatocytes. Methods The fish liver was washing repeatedly by D-Hank, then the liver was cut into small pieces. The tissues was filtered and centrifuged after digested by Collagenase IV. Then the suspensions were purified by Percoll isolation medium after washed by DMEM. Hapatocytes was counted. The morphologic characteristics of the isolated hapatocytes were accessed and observed by light microscope. Result An amount mixed cells were found through the cold digestion of Collagenase method. Further isolation was done by centrifuged at 90 g, 60 g and 30g. Conclusion The method of Cold digestion by Collagenase had obtained the best isolated result. Better purification and amount of hepatocytes could be done by centrifugation with 60g for 2 minutes and centrifugation with 30g for 3 minutes.

Key words: Collagenase, Cold digestion, Hepatocytes, Tilapia, Isolation

赵中辛，李铁岩，刘妍芳，杨朝武，郑星丽，魏峥，黄卫. 胶原酶冷消化法分离制备罗非鱼肝细胞[J]. , 2007, 27(3): 180-182.

ZHAO Zhong-xin,LI Tie-yan,LIU Yan-fang,YANG Chao-wu,ZHENG Xing-li,WEI Zheng,HUANG Wei. Preparation of Tilapia Hepatocytes by Cold Digestion of Collagenase[J]. , 2007, 27(3): 180-182.

[1]	胡耀华, 赵菊梅, 师长宏. 动物模型在Eph家族蛋白功能研究中的应用[J]. 实验动物与比较医学, 2022, 42(4): 351-357.
[2]	施梅言, 王璇, 王文广, 阮蕾颖, 代解杰. 树鼩脊髓微血管内皮细胞的分离培养及EV71感染实验[J]. 实验动物与比较医学, 2021, 41(2): 148-154.
[3]	鄢东海, 黄小昆, 向雪萍, 卿德科, 方伟, 李自安, 王强, 王金祥, 庞荣清. 山羊胎肝内人脐带间充质干细胞的存活与分化研究[J]. 实验动物与比较医学, 2019, 39(5): 364-370.
[4]	李明学, 黎晓慧, 黄鑫, 王璇, 张志成, 袁园, 陆彩霞, 孙晓梅. 树鼩大脑皮层少突胶质前体细胞的分离鉴定[J]. 实验动物与比较医学, 2019, 39(4): 260-266.
[5]	王璇, 王文广, 李娜, 袁园, 张志成, 孙晓梅. 树鼩脊髓星形胶质细胞的分离鉴定[J]. 实验动物与比较医学, 2019, 39(1): 15-20.
[6]	王勤周, 张成, 李丽, 谭邓旭, 张彩勤, 师长宏. 七甲川菁荧光染料在肝细胞癌移植模型活体成像中的应用[J]. 实验动物与比较医学, 2018, 38(4): 250-254.
[7]	程继帅, 袁征, 杨文静, 李壘辰, 丛薇, 孙伟, 柏晓松, 崔淑芳. 裸鼹鼠血清中免疫球蛋白的分离纯化及含量的检测[J]. 实验动物与比较医学, 2017, 37(5): 414-417.
[8]	陈献花, 方丽, 李雪来, 余陈欢, 应华忠. 偏苯三酸三辛酯对肝细胞的毒性作用及其机制[J]. 实验动物与比较医学, 2016, 36(3): 212-215.
[9]	程继帅, 李莉, 肖邦, 赵善民, 林丽芳, 丛薇, 汤球, 孙伟, 余琛琳, 杨文静, 崔淑芳. 裸鼹鼠骨髓巨噬细胞分离培养方法的建立及其功能的初步研究[J]. 实验动物与比较医学, 2016, 36(1): 72-75.
[10]	李玉华, 段斐, 周小羽, 李扬, 李润生. 小鼠精原细胞的分离纯化[J]. 实验动物与比较医学, 2015, 35(1): 42-45.
[11]	戚文军, 汪亦男, 胡强, 唐华, 那顺巴雅尔, 顾为望. 西藏小型猪胰岛细胞体外分离和纯化方法[J]. 实验动物与比较医学, 2013, 33(2): 126-129.
[12]	安学芳, 肖宇宙, 夏克详, 张帆, 朱幼玲. 实验棉铃虫携带微生物的检测[J]. 实验动物与比较医学, 2012, 32(2): 89-93.
[13]	冯洁, 谢建云, 丁聪, 王杰, 胡建华. 上海地区实验大小鼠肺支原体感染情况调查[J]. 实验动物与比较医学, 2012, 32(2): 149-151.
[14]	周晶晶1，杨明2，毛玉昌3，陆解旗2，杨幼明3，胡卓汉1，3. 体外替代安全评价方法的验证-代谢性相互作用对细胞毒性的影响[J]. , 2010, 30(2): 87-94.
[15]	高正琴1，张强2，岳秉飞1，贺争鸣1. 贵州小型猪幽门螺杆菌的分离及其鉴定[J]. , 2010, 30(1): 24-28.