猫泛白细胞减少症病毒环介导等温扩增检测方法的建立

doi:10.3969/j.issn.1674-5817.2019.01.007

实验动物与比较医学 ›› 2019, Vol. 39 ›› Issue (1): 34-38.DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.01.007

猫泛白细胞减少症病毒环介导等温扩增检测方法的建立

马芹¹, 闫文卓¹, 周洁², 高诚², 刘铁龙³, 赵丽丽¹, 陈洪岩¹, 陆涛峰¹

1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所, 哈尔滨 100193;
2.上海实验动物研究中心, 上海 201203;
3.河南省济源市动物卫生监督所, 济源 454650

收稿日期:2018-09-17 出版日期:2019-02-25 发布日期:2021-01-29
作者简介:马芹(1990-),女,硕士研究生,研究方向:预防兽医学。E-mail:542446515@qq.com
基金资助:
上海市科委科研计划项目(16140900500)

Establishment of Loop-mediated Isothermal Amplification for Detection of Feline Panleukopenia Virus

MA Qin¹, YAN Wen-zhuo¹, ZHOU Jie², GAO Cheng², LIU Tie-long³, ZHAO Li-li¹, CHEN Hong-yan¹, LU Tao-feng¹

1. Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 100193, China;
2. Shanghai Laboratory Animal Research Center, Shanghai 201203, China;
3. Jiyuan Animal Health Inspection, Jiyuan 454650, China

Received:2018-09-17 Online:2019-02-25 Published:2021-01-29

摘要/Abstract

摘要： 目的建立一种快速、简便检测猫泛白细胞减少症病毒(FPV)的环介导等温扩增(LAMP)方法。方法针对Genbank 中FPV基因组设计了4条LAMP扩增引物,通过优化反应温度和反应时间,确定高效的LAMP扩增条件。结果建立的LAMP方法在65 ℃水浴条件下反应60 min可对FPV进行高效扩增,检测限量为5.01×10²拷贝/µL,比常规PCR检测的敏感性高10倍,且与猫疱疹病毒1型(FHV-1),犬细小病毒(CPV)及犬腺病毒(CAV)均无交叉反应。结论建立的LAMP方法设备要求低、特异性好、灵敏度高,适用于FPV临床样品的快速检测。

关键词: 猫泛白细胞减少症病毒(FPV), 环介导等温扩增(LAMP), 检测方法

Abstract: Objective To establish a rapid, convenient detection method of feline panleukopenia virus (FPV) by loop-mediated isothermal amplification (LAMP). Methods Two pairs of primers were designed according to the conserved sequences of FPV in Genbank. The efficient LAMP amplification conditions were determined by optimizing temperature and time. Results The results showed a highly efficient amplification for FPV nucleic acid which performed at 65 ℃for 60 min. It also showed a high sensibility with a detection limit of 5.01×102 copies/µL, 10 times higher than the conventional PCR detection in the sensitivity. There was no cross reaction with feline herpesvirus type 1(FHV-1), canine parvovirus(CPV) and vanine adenovirus (CAV). Conclusion The established LAMP method is good in duplication, stability, specificity, and sensitivity. This method can be used for the fast detection of FPV nucleic acid in clinical samples from cats.

Key words: Feline panleukopenia virus(FPV), Loop-mediated isothermal amplification(LAMP), Detecting method

中图分类号:

Q95-33

马芹, 闫文卓, 周洁, 高诚, 刘铁龙, 赵丽丽, 陈洪岩, 陆涛峰. 猫泛白细胞减少症病毒环介导等温扩增检测方法的建立[J]. 实验动物与比较医学, 2019, 39(1): 34-38.

MA Qin, YAN Wen-zhuo, ZHOU Jie, GAO Cheng, LIU Tie-long, ZHAO Li-li, CHEN Hong-yan, LU Tao-feng. Establishment of Loop-mediated Isothermal Amplification for Detection of Feline Panleukopenia Virus[J]. Laboratory Animal and Comparative Medicine, 2019, 39(1): 34-38.

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猫泛白细胞减少症病毒环介导等温扩增检测方法的建立

Establishment of Loop-mediated Isothermal Amplification for Detection of Feline Panleukopenia Virus

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