啮齿类螺杆菌SYBR Green Ⅱ荧光定量PCR检测方法的建立

doi:10.3969/j.issn.1674-5817.2018.02.003

实验动物与比较医学 ›› 2018, Vol. 38 ›› Issue (2): 91-97.DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2018.02.003

啮齿类螺杆菌SYBR Green Ⅱ荧光定量PCR检测方法的建立

孙靖谕¹, 谢灵志¹, 冯洁², 于宁¹, 钱淼¹, 曹舒扬¹, 张泉¹

1.扬州大学兽医学院,扬州 225009;
2.上海实验动物研究中心,上海 201203

收稿日期:2017-09-20 出版日期:2018-04-25 发布日期:2018-04-25
作者简介:孙靖谕(1993-),女,硕士研究生,专业:动物学。E-mail:945547127@qq.com
基金资助:
上海市科技创新行动计划(17140900600)

Establishment of SYBR Green Ⅱ Based Real-time PCR Method for Detection of Helicobacter Rodentium

SUN Jing-yu¹, XIE Ling-zhi¹, FENG Jie², YU Ning¹, QIAN Miao¹, CAO Shu-yang¹, ZHANG Quan¹

1. College of Veterinary Medicine,Yangzhou University,Yangzhou 225009,China;
2. Shanghai Experimental Animal Research Center,Shanghai 201203,China

Received:2017-09-20 Online:2018-04-25 Published:2018-04-25

摘要/Abstract

摘要： 目的建立一种啮齿类螺杆菌(helicobacter rodentium)的快速检测方法。方法根据啮齿类螺杆菌16S rRNA的基因序列设计了1对特异性引物, 建立了啮齿类螺杆菌 SYBR Green Ⅱ荧光定量PCR检测方法。结果在10²拷贝/µL~10⁷拷贝/µL浓度范围中标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系。该方法特异性良好, 仅对啮齿类螺杆菌产生特异性扩增, 且灵敏度可达到30拷贝/µL, 组内和组间的变异系数均小于2%,具有良好的重复性。结论建立了SYBR Green Ⅱ荧光定量PCR检测啮齿类罗杆菌的一种方法。

关键词: 啮齿类螺杆菌, SYBR Green Ⅱ, 荧光定量PCR

Abstract: Objective To establish a rapid detection method for helicobacter rodentium.Method A pair of specific primers was designed according to the gene sequence of Helicobacter rodentium 16S rRNA.The method of SYBR Green Ⅱ real-time PCR was established.Results The standard curve cycle threshold had a good linear relationship with the template concentration in the range of 10² copies /µL to 10⁷ copies /µL concentration.This method has good sensitivity,only specific amplification of Helicobacter rodentium,could detect 30 copies /µL,the coefficient of variation (CV) was less than 2% within and between groups with good reproducibility.Conclusion The method of SYBR Green Ⅱ real-time PCR was established for the identification of Helicobacter rodentium.

Key words: Helicobacter rodentium, SYBR Green Ⅱ, Real-time PCR

中图分类号:

Q95-33

孙靖谕, 谢灵志, 冯洁, 于宁, 钱淼, 曹舒扬, 张泉. 啮齿类螺杆菌SYBR Green Ⅱ荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 实验动物与比较医学, 2018, 38(2): 91-97.

SUN Jing-yu, XIE Ling-zhi, FENG Jie, YU Ning, QIAN Miao, CAO Shu-yang, ZHANG Quan. Establishment of SYBR Green Ⅱ Based Real-time PCR Method for Detection of Helicobacter Rodentium[J]. Laboratory Animal and Comparative Medicine, 2018, 38(2): 91-97.

[1]	于灵芝, 谢建芸, 冯丽萍, 魏晓锋. 金黄色葡萄球菌荧光定量PCR检测方法的建立及其在大鼠、小鼠粪便检测中的应用[J]. 实验动物与比较医学, 2023, 43(5): 566-573.
[2]	刘芳妮, 吕军苹, 柯跃华, 王长军, 郭金鹏. 北京地区实验小鼠诺如病毒流行情况[J]. 实验动物与比较医学, 2023, 43(2): 205-212.
[3]	陈伟盛, 高亚奇, 梁宁, 陈海宇, 陈兴致, 詹纯列, 张修彦. 不同途径感染后5型腺病毒在C57BL/6J小鼠体内的分布[J]. 实验动物与比较医学, 2020, 40(4): 334-.
[4]	闫文卓, 陆涛峰, 周洁, 赵丽丽, 陈洪岩. 水貂阿留申病毒VP2基因TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用[J]. 实验动物与比较医学, 2020, 40(4): 289-.
[5]	王吉, 王莎莎, 付瑞, 王淑菁, 李威, 秦骁, 黄宗文, 李晓波, 巩薇, 岳秉飞, 贺争鸣. 小鼠肝炎病毒实时荧光定量PCR方法的建立及在部分啮齿类动物的应用[J]. 实验动物与比较医学, 2020, 40(2): 95-103.
[6]	温福利, 郑和平, 党源, 薛来恩, 张诗兰. 兔斯氏艾美耳球虫荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 实验动物与比较医学, 2017, 37(6): 448-454.
[7]	孙竹筠, 蔡骁垚, 熊炜, 陈懿斐, 张泉, 李泽君, 魏晓锋, 陈鸿军. 大鼠微小病毒和细小病毒双重荧光定量PCR检测方法建立[J]. 实验动物与比较医学, 2017, 37(5): 372-377.
[8]	王瑞琪, 廉传江, 易诚, 韩凌霞, 杨春文, 陈洪岩. miR-200b-3p和miR-200b-5p在马立克氏病抗性与易感SPF鸡法氏囊组织的差异表达分析[J]. 实验动物与比较医学, 2017, 37(3): 244-248.
[9]	范君文, 隋丽华, 许琴, 刘一, 刘慧芳, 孙兆增, 闫亮. 小鼠感染大肠杆菌O127:H6肠炎模型的建立及受激活调节正常T细胞表达和分泌活性因子的表达[J]. 实验动物与比较医学, 2016, 36(1): 1-5.
[10]	刘慧芳, 孙书芳, 曾林, 曹玉华, 严翔, 范君文, 孙兆增, 王新. SLC24A5,SLC39A9基因在黑线仓鼠及其A: CHA品系表达水平的比较分析[J]. 实验动物与比较医学, 2014, 34(6): 438-442.
[11]	袁文, 张钰, 王静, 刘香梅, 黄韧. 小鼠脑脊髓炎病毒非编码蛋白片段实时荧光定量PCR标准品的构建[J]. 实验动物与比较医学, 2012, 32(1): 8-13.

啮齿类螺杆菌SYBR Green Ⅱ荧光定量PCR检测方法的建立

Establishment of SYBR Green Ⅱ Based Real-time PCR Method for Detection of Helicobacter Rodentium

PDF (PC)

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 11

编辑推荐

Metrics

本文评价