实验动物与比较医学

实验动物身份识别与追踪技术在生物安全实验室的应用前景

陈丽香, 秦波音, 杨华, 徐春华, 彭秀华, 李顺, 周晓辉

2022, 42(2): 89-94. DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2021.174

摘要 ( 580 )

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生物安全实验室的有效、安全管理是保障国家生物安全的重要环节之一。作为生物医学研究最广泛的材料之一，实验动物被大量应用于各类感染相关的生物安全实验研究中，而感染性动物实验必须在动物生物安全实验室中开展。在动物生物安全实验室中，实验动物及动物实验相关的风险评估与控制至关重要。通过无线追踪技术实现实验动物身份识别及可追溯性是未来动物生物安全实验室风险控制与管理的重要手段之一。本文对实验动物身份识别及追踪技术进行了概括，并描述了无接触识别技术尤其是无线射频识别技术在实验动物生物安全管控中的应用前景，可为相关从业人员更好地应用实验动物身份识别与追踪技术进行生物安全管控提供参考。

实验动物屏障设施管理中面临的生物安全问题及对策探讨

杨玉琴

2022, 42(2): 95-101. DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2021.164

摘要 ( 545 )

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生物安全是国家安全的重要组成部分，有效控制实验动物生物危害是使用实验动物的基础。本文从实验动物设施管理者的角度，以上海市第一人民医院实验动物中心的生物安全管理经验为基础，分析了目前实验动物屏障设施在保证动物实验顺利开展过程中所面临的潜在生物安全威胁，并探讨了降低此类风险的相关对策，以期为良好控制动物实验中生物安全问题提供借鉴。

自主研发生物安全型换笼工作台的性能检测与评价

苏世博, 马文杰, 王伟, 郭慧娟, 张贺, 王梓, 康雷, 刘守琦, 刘怀然, 司昌德, 苟春天, 张伟, 陈洪岩

2022, 42(2): 102-110. DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2021.102

摘要 ( 388 )

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目的　对自主研发的生物安全型换笼工作台进行功能检测与安全性评价。方法　依据YY 0569—2011《Ⅱ级生物安全柜》、RB/T 199—2015《实验室设备生物安全性能评价技术规范》等标准对自主研发的由深圳泓腾生物科技有限公司生产的生物安全型换笼工作台（HT-1303）的各项性能指标进行检测，并判定其有效性及安全性。结果　换笼工作台的主体外观完整性和稳定性、工作区洁净度、流入气流流速、下降气流流速、照度、噪声、气流流向、高效过滤器等检测效果良好，达到Ⅱ级生物安全柜标准。污染物品回收舱及器物表面灭菌舱的气密性效果良好，其尺寸、灭菌笼盒数量等还需进一步改进。结论　本团队研制的生物安全型换笼工作台可实现整机正常运行，其各项指标合格，能够完成负压环境下独立通风笼具的更换，并保证操作者、实验对象及环境的安全。

部分兽医相关单位Ⅱ级生物安全柜的性能测试与分析

马文杰, 张伟, 王伟, 苏世博, 郭慧娟, 张贺, 王梓, 刘怀然, 陈洪岩

2022, 42(2): 111-116. DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2021.101

摘要 ( 284 )

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目的　了解兽医相关单位实验室Ⅱ级生物安全柜的性能与使用情况。方法　测试哈尔滨市3家兽医相关单位正在使用的126台Ⅱ级生物安全柜，依据相关标准针对检测结果进行性能指标的判定与分析，了解生物安全柜的使用情况。结果　126台Ⅱ级生物安全柜性能检测总合格率为17.5％。Ⅱ级生物安全柜的外观完整性、工作区洁净度、送排风高效过滤器检漏、气流模式、流入气流流速、下降气流流速、照度、噪声及报警和联锁系统共9个项目的检测总合格率分别为100％、100％、100％、100％、49.2％、92.9％、68.3％、22.2％和100％。结论　兽医相关单位实验室Ⅱ级生物安全柜性能检测总合格率较低，应对生物安全柜做定期性能检测，加强运行维护管理，及时排除生物安全隐患，防止实验室感染事故发生。

微电解无菌水系统在实验动物屏障设施中应用的跟踪监测

张薇, 唐彬, 赵勇, 张志妮, 邓新燕

2022, 42(2): 117-121. DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2021.154

摘要 ( 355 )

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目的　跟踪观察实验动物屏障设施长期应用微电解无菌水系统是否可以持续维持终端供水的无菌。方法　在2018年4月—2022年3月期间，每季度跟踪监测中山大学实验动物中心生产繁殖SPF级大小鼠的屏障设施中微电解无菌水系统1次。设置8个采样点，包括微电解出水口进入输水管道前取样点1个、终端出水口6个、输水管网回水取样点1个。按无菌操作流程取样，依据国家标准GB 14925—2010、GB/T 14926.41—2001进行微电解无菌水微生物检测。结果　2018年4月—2022年3月共进行17次采样；在微电解无菌水系统正常运行期间，8个采样点的微电解水均检测无菌，符合国家标准。结论　微电解无菌水系统能持续维持终端供水的无菌，可以长期应用于实验动物屏障设施。

实验动物尸体及相关废弃物无害化处置信息化监管系统初探

李勇, 周亮, 何勇, 闫志峰, 王海江

2022, 42(2): 122-126. DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2021.075

摘要 ( 342 )

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目前我国尚缺乏针对实验动物尸体及相关废弃物的规范化、制度化管理规范，对其无害化处置过程也未实现有效的监管，尤其缺少有效的全过程生物安全监管体系。本研究采用计算机网络、全球卫星定位系统、无线通信、地理信息系统等多学科的前沿技术，初步建立了一种新型的实验动物尸体及相关废弃物无害化处置信息管理系统，并与生物安全监管紧密结合，可以实现全程动态跟踪监控。该系统的建立有利于加强对实验动物尸体及相关废弃物的规范化、制度化管理，促进医疗废物的安全管控，防止疾病传播，保护环境，保障人体健康。

适用于微创消融治疗研究的小鼠胰腺癌原位模型建立方法及比较

毛璐婧, 张娜娜, 刘昊, 史爱华, 朱子语, 吕毅

2022, 42(2): 127-134. DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2021.094

摘要 ( 718 )

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目的　探究应用肿瘤细胞原位注射和肿瘤组织块移植法建立小鼠胰腺癌原位模型的优缺点，为以精准消融治疗研究为目的的小鼠胰腺癌原位模型的建立提供技术参考。方法　取20只6～8周龄的健康雄性C57BL/6小鼠，分为4组，每组5只：A组采用小鼠胰腺癌Panc02细胞悬液直接注射法；B组采用含基质胶的小鼠胰腺癌Panc02细胞悬液注射法；C组采用小鼠胰腺癌组织块移植法；D组采用小鼠肿瘤组织块水凝胶粘接法。术后观察各组小鼠胰腺癌的成瘤率、肿瘤大小、腹腔脏器粘连程度和肿瘤转移情况，分别采用HE染色法和免疫组织化学法检测肿瘤组织形态学变化以及Ki67和α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）表达差异。结果　A、B、C、D四组小鼠胰腺癌成瘤率分别为60%、80%、100%和100%。建模16 d后，A组小鼠肿瘤体积为（47.80±42.99）mm³，均质性差；B、C与D组小鼠肿瘤体积分别为（68.43±16.77）mm³、（105.86±17.25）mm³和（128.98±13.41）mm³，比A组明显增大（P＜0.01），且均质性较好。A组小鼠腹腔重度粘连率为100%，Ｂ组重度粘连率为80%，C组与D组均未出现重度腹腔粘连。Ａ组小鼠肿瘤转移率为100％，Ｂ组转移率为60％，C组与D组小鼠均未发现肿瘤转移。4组小鼠的肿瘤在组织学上无明显差异，且肿瘤组织中Ki67和α-SMA蛋白的相对表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。结论　采用肿瘤组织块移植法及水凝胶粘接法建立小鼠胰腺癌原位模型的成瘤率高，转移少，腹腔粘连轻，且未改变肿瘤细胞的生物学特性，易于操作和普及，造模效果更好。

利格列汀对2型糖尿病大鼠肾组织纤维化过程中骨膜蛋白及转化生长因子-β1的影响

弓慧杰, 张光明

2022, 42(2): 135-140. DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2021.093

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目的　通过观察利格列汀对2型糖尿病大鼠肾组织纤维化过程中骨膜蛋白（periostin）及转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）的影响，探讨利格列汀治疗糖尿病肾病患者的抗炎、抗纤维化等保护机制。方法　24只SD大鼠采用腹腔注射链脲佐菌素的方式建立2型糖尿病大鼠模型，另取12只SD大鼠注射等剂量的柠檬酸缓冲液作为对照组。糖尿病模型大鼠分为模型组及治疗组。治疗组大鼠予以利格列汀（10 mg?kg^-1?d^-1）持续灌胃12周，其他2组予以等量生理盐水灌胃。12周后取材，HE染色和Masson染色法观察肾组织病理学变化，分别采用免疫组织化学法和RT-PCR法检测各组大鼠肾组织中骨膜蛋白和TGF-β1蛋白及mRNA的表达水平。结果　与对照组相比，模型组大鼠的肾间质有大量被深染为蓝色的炎性细胞浸润，治疗组则有较少的炎性细胞浸润；模型组的肾间质纤维含量比对照组增多，而治疗组的纤维化不明显。与对照组相比，模型组大鼠的肾脏组织中骨膜蛋白和TGF-β1蛋白表达水平及mRNA含量均明显升高（P＜0.05）；与模型组相比，治疗组大鼠的肾脏组织中骨膜蛋白和TGF-β1蛋白表达水平及mRNA含量均明显降低（P＜0.05）。结论　利格列汀可通过抑制2型糖尿病大鼠肾脏组织中TGF-β1的过表达，下调骨膜蛋白表达，减缓肾组织纤维化进程。

花生四烯酸诱导建立大鼠弥漫性脑血栓模型

宁珑, 孙航, 冯晋, 孟庆婷, 杨茜, 何芳雁

2022, 42(2): 141-145. DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2021.091

摘要 ( 465 )

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目的　建立并优化花生四烯酸诱导的大鼠弥漫性脑血栓模型。方法　经颈内动脉注射花生四烯酸，建立大鼠弥漫性脑血栓模型；同时设定假手术组作为对照。通过检测脑组织中伊文思蓝（Evans blue，EB）渗出含量以及HE染色法检测脑组织病理损伤程度评价建模效果。结果　与假手术组相比，模型组大鼠损伤侧脑组织中均出现弥漫性EB渗出（P＜0.01），且渗出情况均一性较佳。损伤侧脑组织病理表现为细胞排列混乱，细胞核皱缩，细胞间隙增大，空泡细胞增多，个别微血管呈红色条形管型的缺血病理损伤。结论　花生四烯酸可成功诱导弥漫性脑血栓模型，且优化方法后模型稳定性较好，死亡率较低。

胰腺星状细胞与胰腺疾病模型研究进展

魏迅, 江霞, 郑羽旋, 张乐文, 周正宇

2022, 42(2): 146-151. DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2021.088

摘要 ( 336 )

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常见的胰腺疾病类型有胰腺炎、糖尿病和胰腺癌。临床研究显示，在人体内胰腺星状细胞（pancreatic stellate cells，PSCs）可以从纤维化、氧化应激和炎性反应等方面影响胰腺病变，导致胰腺疾病的发生。本文综述了不同胰腺疾病的造模方法，以及PSCs对胰腺疾病发生发展的影响及其应用前景，以期为研究和治疗胰腺疾病提供新思路。

环境丰富对英国短毛猫应激相关指标的改善作用

陈鸿婷, 杨斐, 胡樱

2022, 42(2): 152-158. DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2021.130

摘要 ( 435 )

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目的　研究环境丰富对实验用英国短毛猫应激反应的缓解作用。方法　将14只实验用英国短毛猫按有无环境丰富干预措施随机分为福利组和对照组，每组7只，实验共持续11周。测定并分析比较各组实验猫的血液生理生化指标、神经内分泌指标、免疫学指标，评价不同组别的应激水平。结果　福利组的平均红细胞体积明显小于对照组（P＜0.05），淋巴细胞百分比极明显大于对照组（P＜0.01），中性粒细胞百分比极明显小于对照组（P＜0.01）。另外，福利组的尿素、肌酐、球蛋白和总蛋白水平均明显低于对照组（P＜0.05），肾上腺素、多巴胺两项指标也明显低于对照组（P＜0.05），而Ⅱ型干扰素（interferon-γ，IFN-γ）、白细胞介素（interleukin，IL）-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ/IL-4比值、IL-2/IL-4比值、IFN-γ/IL-5比值和IL-2/IL-5比值均高于对照组；其中IFN-γ、IL-2、IFN-γ/IL-5比值和IL-2/IL-5比值差异明显（P＜0.05），IL-5差异极明显（P＜0.01）。结论　采取环境丰富的干预措施能够有效提高实验猫的福利水平，缓解应激反应。

离体豚鼠回肠法应用于骨肽类注射剂中组胺类物质检测

吴畅, 李晓洁, 吴殷囡, 王瑶, 汪玉馨, 宗卫峰, 孟长虹, 陆益红

2022, 42(2): 159-165. DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2021.082

摘要 ( 299 )

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目的　评价离体豚鼠回肠法检测骨肽类注射剂中组胺类物质的效果，以及代替猫降压物质检查法的可行性。方法　按照《中国药典》2020版中组胺类物质检查法（即离体豚鼠回肠法），对5家企业共7批骨肽类注射剂进行组胺类物质检查，同时利用猫降压物质检查法对其结果进行确证和比较。结果　用离体豚鼠回肠法进行组胺类物质检查发现有3批制剂结果呈阴性，与猫降压物质检查法的检查结果一致；另外4批制剂结果可疑，对照猫降压物质检查结果是3批制剂可疑，1批制剂呈阳性。离体豚鼠回肠法检查结果与猫降压物质检查法对于可疑结果的检出较为一致，总体结果一致率为85.7%（6/7）。结论　离体豚鼠回肠法与猫降压物质检查法的结果基本一致，可用于骨肽类制剂中组胺类物质筛查及研究；同时，骨肽类制剂标准中建议增订降压物质或组胺类物质检查项。

电极植入猕猴脑皮层手术的护理实践及探讨

徐西彬, 朱青, 张恩

2022, 42(2): 166-170. DOI: 10.12300/j.issn.1674-5817.2021.078

摘要 ( 305 )

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利用电极植入技术探讨群体神经元的电活动对于脑与认知科学、类脑研究和脑机接口技术研究是至关重要的。本文介绍了电极植入猕猴大脑皮层手术前、中、后的护理要点及其重要意义。其中，术前护理包括术前准备、术前用药和头颅固定、备皮等，术中护理包括生理指标监护和脑皮层植入手术护理，术后护理包括观察监测、清创和营养护理。做好电极植入猕猴脑皮层手术的护理，不仅能够提高手术成功率，使用尽量少的实验动物来获取实验所需数据，而且能够减轻手术给动物带来的疼痛和伤害，对脑与认知科学研究和保障动物福利均具有重要意义。

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