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2016年 第36卷 第2期    刊出日期：2016-04-25

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论著

壬苯醇醚-9诱导小型猪阴道黏膜免疫炎症反应模型的建立

黄超, 弓艺涓, 田芳, 王玉柱, 孙冰, 夏敏杰, 职瑞娜, 丁训诚, 周新初, 李卫华

2016, 36(2):  81-86.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2016.02.001

摘要 ( 180 )   PDF (757KB) ( 241 )  

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目的 探索建立广西巴马小型猪阴道黏膜免疫炎症反应模型的方法。方法 将6只雌性小型猪随机分为基质对照组和壬苯醇醚-9(N-9)模型组(40 mg/mL)(每组3只)。肌肉注射苯甲酸雌二醇12 d后,各组阴道给药5 mL/d,连续7 d。造模后取阴道黏膜组织进行病理检查,并根据上皮溃疡、坏死、细胞浸润、出血、充血、水肿等指标进行病理评分; 造模后24 h与72 h,采集阴道灌流液(CVL), 采用流式细胞术对CVL沉淀细胞中的中性粒细胞比例和CD45⁺细胞百分率进行分析; 免疫组织化学法(IHC)检测阴道黏膜组织中CD45⁺细胞的表达及分布。结果 组织病理学观察显示,N-9模型组阴道黏膜上皮损伤明显,出现不同程度的溃疡、坏死、炎性浸润、出血、水肿等。病理评分结果显示,N-9模型组病理总分值(18.0±3.2)与基质对照组(3.3±0.2)相比明显升高(P<0.01)。N-9 模型组CVL的中性粒细胞比例为41.70%±1.63% (24 h)和51.17%±3.81%(72 h), CD45⁺细胞比例为58.5%±4.73%(24 h)和88.0%±3.57 %(72 h),与基质对照组相比均显著增高(P<0.01)。N-9模型组阴道黏膜CD45⁺细胞表达明显增多,累积光密度值为33.95±6.69,显著高于基质对照组(23.42±3.30)(P<0.05)。结论 阴道连续给予N-9凝胶7 d可以诱发小型猪阴道黏膜明显的炎性反应,符合阴道黏膜免疫炎症反应模型的特征。



微小RNA簇miR-302s条件性基因打靶小鼠的制备和鉴定

余飞, 钱丽萍, 丁利军

2016, 36(2):  87-92.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2016.02.002

摘要 ( 178 )   PDF (975KB) ( 173 )  

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目的 制备微小RNA簇miR-302s条件性基因打靶小鼠。方法 构建miR-302s打靶载体, 通过电穿孔的方法转染胚胎干细胞(ES细胞),用正负筛选法筛选阳性ES细胞并进行PCR鉴定和Southern分析。利用显微注射技术将正确同源重组的ES细胞注射至B6(Cg)-Tyr^c-2J/J小鼠囊胚腔内,注射后的囊胚植入受体小鼠子宫。将得到的嵌合体小鼠与野生型雌鼠交配获得miR-302s-LoxP基因打靶小鼠。结果 获得嵌合体小鼠11只, 其中4只嵌合雄鼠嵌合率>50%。利用嵌合体小鼠进行繁育交配,得到miR-302s基因打靶杂合子小鼠11只。结论 成功建立miR-302s条件性基因打靶小鼠模型,为进一步研究miR-302s基因功能打下基础。



Prss37 基因转录起始位点的确定及其转录调控的初步探讨

王津津, 匡昉哲, 庄华, 陆翠杰, 匡颖

2016, 36(2):  93-100.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2016.02.003

摘要 ( 224 )   PDF (701KB) ( 179 )  

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目的 确定Prss37基因的转录起始位点,并利用转基因技术在整体水平验证该启动子的组织特异性。方法 运用cDNA 5’末端快速扩增法(5’RACE)对C57BL/6J小鼠睾丸mRNA进行分析,确定Prss37的转录起始位点; 构建Prss37内源启动子区域转录起始位点上游不同长度DNA片段(1 kb、2 kb、4 kb)驱动的荧光素酶基因表达的质粒;通过受精卵雄原核显微注射技术获得上述三种启动子驱动荧光素酶基因表达的转基因小鼠;利用活体成像技术观察荧光素酶基因的表达,明确启动子的组织特异性。结果 Prss37基因的转录起始位点位于NCBI GeneBankTM(NM_026317.2)报道序列上游的40 bp处; 成功获得三种转基因小鼠,其中1 kb启动子驱动的转基因小鼠检测到荧光素酶基因的表达,且在脑、睾丸和附睾组织中的表达较强。结论 明确Prss37的转录起始位点,成功获得了睾丸和附睾表达荧光素酶基因的转基因小鼠,为进一步的Prss37基因转录调控研究奠定了基础。



两个豚鼠品系速发型哮喘模型中组胺受体的表达及对肺功能的影响

卫振, 娄绘芳, 吴凯, 陈雁虹, 谢敏, 刘迪文, 谢强敏

2016, 36(2):  101-106.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2016.02.004

摘要 ( 199 )   PDF (509KB) ( 235 )  

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目的 建立Zmu-1:DHP和DHP两个豚鼠品系的速发型哮喘模型,探讨组胺受体1(H1R)和组胺受体2(H2R)在肺组织中的表达及对肺功能的影响。方法 两个豚鼠品系分别设置模型组(MW,MP)和对照组(BW,BP),模型组采用卵清白蛋白(OVA)致敏,对照组使用生理盐水。第1,14日致敏豚鼠,第28日用OVA雾化激发,记录0~8 min内动态肺顺应性(Cdyn)和气道阻力 (Raw) 变化。取肺组织样品,进行H1R和H2R mRNA表达检测和免疫组织化学分析。结果 OVA雾化激发后,Zmu-1:DHP和DHP品系模型组(MW,MP) Cdyn下降,Raw上升,变化幅度先大后小,约3 min 达到最大,而两品系对照组(BW,BP)变化较小。其中,MW组反应较MP组更敏感。定量PCR分析, MW模型组的H1R, H2R mRNA表达量高于对照组BW(P<0.05, P<0.05),肺组织切片HE染色,模型组(MW,MP)肺泡间可见明显的炎症细胞浸润,而对照组(BW,BP)未见。免疫组织化学可见,H1R和H2R主要分布在气道和血管周围的平滑肌上。结论 速发型哮喘模型,H1R和H2R主要分布在肺部气管周围的平滑肌上,H1R的高表达与哮喘模型的气道敏感性密切相关。



高原多脏器功能障碍综合征蕨麻小型猪模型的建立及促肾上腺皮质激素与皮质酮的变化

冯小明, 罗晓红, 王红义, 郭晓宇, 陆璐, 申健, 肖攀, 牛廷献

2016, 36(2):  107-112.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2016.02.005

摘要 ( 200 )   PDF (440KB) ( 170 )  

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目的 研究高原多脏器功能障碍综合征(H-MODS)蕨麻小型猪模型的建立及促肾上腺皮质激素(ACTH)与皮质酮(CORT)的变化特点。方法 选用3个剂量(低、中、高)内毒素(LPS)诱导高原土生蕨麻小型猪成功建立H-MODS模型(B、C、D组),生理盐水为对照组(A组)。检测不同时点血清生理生化指标及ACTH与CORT表达水平。结果 各组蕨麻小型猪泵入LPS后肌酸激酶(CK)在3~24 h升高,48 h之后明显降低; 天门冬氨酸转氨酶(AST)在6~24 h升高; 丙氨酸氨基转移酶(ALT)在12 ~24 h的水平显著高于0 h和A组; 总胆红素(TBIL)在24~48 h的水平显著升高; 肌酐(CRE)在6 h水平明显高于0 h。白细胞数量在0~6 h升高,6~24 h降低。ACTH表达量在泵入LPS后开始上升, 在12 h后降低,在72 h基本恢复到与对照组相同水平; CORT在泵入LPS后3 h上升至最高,后又开始下降,24 h后开始上升,在72 h时基本恢复到正常。低、中、高剂量组的变化趋势基本相同。结论 高原MODS形成时机体处于严重感染应激状态下,ACTH与CORT表达水平出现剧烈变化, 下丘脑–垂体–肾上腺轴对机体调节的动态平衡被打破而出现紊乱。

奥曲肽对局灶性脑缺血的保护作用

丁雷, 王守宝, 宋鹤杰, 王晔

2016, 36(2):  113-116.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2016.02.006

摘要 ( 210 )   PDF (351KB) ( 175 )  

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目的 观察奥曲肽(OCT)对局灶性缺血再灌注的保护作用并探讨相关作用机制。方法 80只SD大鼠随机分为4组,分别为假手术组,缺血再灌注组,OCT低剂量组及OCT高剂量组。在建立缺血再灌注模型各组分别使用安慰剂或OCT处理。参照Longa 5分制评分标准,分别在再灌注后的各观察时间段对大鼠进行神经功能评分; 脑组织标本分别采用氯化三苯基四氮唑(TTC)染色进行梗死面积检测,并采用试剂盒检测丙二醛(MDA)和过氧化物歧化酶(SOD)含量。结果 高剂量OCT能够显著改善脑缺血再灌注组大鼠的功能评分。OCT高剂量组动物梗死面积明显小于缺血再灌注组(P<0.05),MDA在OCT高剂量组的活性分别显著低于缺血再灌注组(P<0.05),而SOD的活性OCT组则显著升高(P<0.05)。结论 OCT在大鼠脑缺血再灌注具有保护作用,可能是通过影响脑部的氧化来产生作用的。



球后静脉注射在裸小鼠纳米粒静脉给药中的可行性探讨

杨柳, 杨华, 刘云, 陈佳, 龚明福, 舒通胜

2016, 36(2):  117-120.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2016.02.007

摘要 ( 229 )   PDF (765KB) ( 170 )  

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目的 探讨球后静脉注射在裸小鼠纳米粒静脉给药中的可行性。方法 成年裸小鼠8只,随机分成2组,每组4只,分别通过尾静脉及球后静脉注射超顺磁性氧化铁(superparamagnetic iron oxide, SPIO)纳米粒, 行裸小鼠肝脏磁共振(magnetic resonance, MR)快速自旋回波(fast spin echo, FSE) T2WI扫描, 测量同一层面、同一区域肝实质及邻近肌肉在增强前后的信号强度,计算信号强度变化率。结果 8只裸小鼠全部穿刺成功。尾静脉穿刺平均耗时8 min 30 s,平均穿刺次数为3.7次; 球后静脉窦穿刺平均耗时约3 min 50 s,平均穿刺次数为2.3次。球后静脉及尾静脉两种方法注射纳米粒后肝脏的信号强度变化规律一致,纳米粒注射后即刻、5 min、10 min、30 min、1 h及2 h的信号强度变化率分别为：尾静脉注射66.78%±5.62%,72.92%±8.41%,73.08%±7.68%,74.06%±7.44%,74.61%±6.28%,73.66%±4.52%; 球后静脉注射: 69.29%±7.53%,74.86%±5.84%,77.54%±6.47%,78.85%±8.23%,79.05%±4.65%,77.99%±7.73%,两者差异无显著性(P>0.05)。结论 裸小鼠球后静脉穿刺简单、可靠,可以作为尾静脉穿刺以外纳米粒注射的途径。



多元福利措施改善巴马小型猪福利状况的实验评价

胡樱, 杨斐

2016, 36(2):  121-125.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2016.02.008

摘要 ( 209 )   PDF (457KB) ( 197 )  

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目的 研究多元福利措施(组合应用音乐、香薰、营养、玩具、生物活性垫料等环境丰富元素)对实验小型猪整体福利状况的综合改善作用。方法 将来自6窝的12头雌性巴马小型猪(每窝2头)分别编入常规饲养组和优化饲养组饲养9周,测定两组的应激分子表达、免疫平衡、血常规指标和生长情况。结果 相比于常规饲养组,优化饲养组具有更低的皮质醇水平和干扰素-γ/白细胞介素-4比值,糖皮质激素受体(GR) mRNA和热休克蛋白70 (HSP70) mRNA表达更少,红细胞数(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞比容(HCT)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、白细胞数(WBC)、中性粒细胞(NEUT)和嗜酸性粒细胞(EO)较高。结论 采用多元福利措施的优化饲养有助降低日常饲养中小型猪的应激水平,提高抗应激能力,同时可引起免疫平衡和血常规指标相应改变。



绿色荧光裸小鼠睾丸组织学观察及精子质量检查

胡文娟, 方天, 刘彪, 梁磊, 赵志刚, 贾春梅, 陈莉, 许龙祥, 恽时锋

2016, 36(2):  126-128.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2016.02.009

摘要 ( 257 )   PDF (495KB) ( 157 )  

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目的 探讨绿色荧光裸小鼠繁殖率低下的原因。方法 对绿色荧光裸小鼠的睾丸及附睾进行组织病理学及精子质量检查。比较雄性绿色荧光裸小鼠与BALB/c裸小鼠的睾丸、附睾脏器系数和精子浓度、精子活力、活率及精子畸形率; 观察睾丸及附睾组织病理学变化。结果 雄性绿色荧光裸小鼠及BALB/c裸小鼠的睾丸、附睾脏器系数、精子浓度及组织结构并无显著差异(P>0.05); 但精子活力(直线运动和原地转动及静止不动)的构成比、活精子率及畸形率间均具有显著差异(P<0.05)。结论 雄性绿色荧光裸小鼠精子质量(活力、活率及畸形率等方面)略为低下可能是影响绿色荧光裸小鼠繁殖性能的原因之一。



SCID Beige小鼠繁殖性能、脏器重量、血液生理生化指标和免疫细胞的测定

许文静, 郭建光, 杨东伟, 唐慧青, 符杰, 袁水娟, 施美莲

2016, 36(2):  129-133.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2016.02.010

摘要 ( 204 )   PDF (391KB) ( 172 )  

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目的 测定SCID Beige小鼠的繁殖性能、主要脏器重量、血液生理生化指标和免疫细胞比例。方法 (1)选取10周龄SCID Beige小鼠15雌15雄进行配种, 测定其繁殖性能; (2)选取4周龄、8周龄和16周龄SCID Beige小鼠各30只(雌雄各半), 称体质量, 依次剖取各脏器并称重;(3)使用毛细管眼眶采血,测定血液生理生化指标; (4)利用流式细胞仪检测其T细胞及其亚群、B细胞、NK细胞。结果 (1)SCID Beige小鼠妊娠率、窝产仔数和离乳率随胎次逐渐下降; (2)三个日龄段SCID Beige小鼠的脾脏重量随日龄的增加而减小,其余脏器重量随日龄的增加而增加,同日龄不同性别间肝脏和心脏重量呈显著性差异,脑重量无显著性差异; (3)SCID Beige小鼠112日龄雄鼠的白细胞计数(WBC)、红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)、血细胞压积(HCT)、淋巴细胞(LYM)及LYM%与同日龄雌鼠和其他日龄小鼠差异明显; (4)SCID Beige小鼠的CD3⁺T细胞、CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、CD19 B细胞,B220 B细胞和NK细胞含量极低,雌鼠T细胞含量低于雄鼠,不同性别间淋巴细胞含量无显著性差异。结论 SCID Beige小鼠表现为T、B、NK细胞联合免疫功能缺陷,且不存在渗漏现象,该小鼠在肿瘤移植的应用方面具有一定优势。

芹菜山楂汁对非酒精性脂肪肝模型小鼠血压、血脂、脂肪肝形成的影响

郎雪楠, 陈雪婷, 董婉维, 张梅英

2016, 36(2):  134-136.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2016.02.011

摘要 ( 159 )   PDF (481KB) ( 135 )  

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目的 探讨芹菜山楂混合提取液对非酒精性脂肪肝模型小鼠血压、血脂以及脂肪肝形成的影响。方法 30只3周龄C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组、高脂组和高脂饲料合并芹菜山楂汁灌胃组。饲养8周后进行血压、血脂、肝组织病理学检测。结果 高脂组小鼠血压、血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)较对照组有显著的升高(P<0.05),部分小鼠出现肝脂肪变性; 灌胃组小鼠血压、血脂各项指标较对照组有显著升高, 但低于高脂组(P<0.05), 且没有明显肝脂肪变性。结论 芹菜山楂汁具有降血脂、降血压和延缓脂肪肝形成的作用。



经验交流

三种麻醉方法对莱亨鸡麻醉效果比较

曹春艳, 孙雪健, 胡正云, 肖苒

2016, 36(2):  137-140.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2016.02.012

摘要 ( 475 )   PDF (382KB) ( 163 )  

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目的 比较3种不同麻醉方法在莱亨鸡的麻醉效果。方法 将30只实验用莱亨鸡随机分为A、B、C三组,A组10只(速眠新II组),B组10只(盐酸氯胺酮组),C组10只(速眠新II与盐酸氯胺酮复合组),三组均采用肌肉注射麻醉,在麻醉过程中观察其临床表现及麻醉效果,比较麻醉起效时间、麻醉维持、苏醒时间和动物的死亡率等。结果 A组麻醉诱导时间和苏醒时间长,死亡率高; B组麻醉诱导时间和苏醒时间短,但麻醉效果不理想; C组麻醉诱导时间短,麻醉效果理想,死亡率低。结论 速眠新II与盐酸氯胺酮复合麻醉莱亨鸡,是一种较为安全、可靠的麻醉方法。

湿帘降温原理及其在食蟹猴饲育设施中的初步应用

邢正弘

2016, 36(2):  141-145.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2016.02.013

摘要 ( 166 )   PDF (493KB) ( 182 )  

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目的 应用湿帘降温原理设计开发一种实用节能型食蟹猴饲育设施并进行初步应用。方法 根据食蟹猴的生活习性和上海地区气候特点并参考湿帘降温有关资料进行设计,对建成的设施进行相关环境指标的测试,并初步应用于食蟹猴的饲养。结果 该设施的环境条件能适用于上海地区气候条件下食蟹猴的人工饲养。结论 该设施能够实现气候条件的人工调节,能在节能的前提下满足食蟹猴的正常生长于繁育,具有一定的应用和推广前景。



浅论实验动物福利对提高科研质量的促进作用

徐海燕, 刘斌, 安然

2016, 36(2):  146-147.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2016.02.014

摘要 ( 149 )   PDF (304KB) ( 194 )  

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猕猴在人类神经及精神疾病研究应用中的进展

王宝田, 杨李, 田克印, 吴德, 唐久来

2016, 36(2):  148-151.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2016.02.015

摘要 ( 217 )   PDF (310KB) ( 170 )  

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动物疾病模型必须尽可能复制人类疾病表现的各个方面。猕猴作为动物模型在解剖、遗传和生理等方面与人类十分相似,在医学研究中广泛使用。本文主要讨论猕猴在人类神经精神疾病中的研究应用。

综述

绿色荧光蛋白裸小鼠的培育及应用进展

方天, 恽时锋

2016, 36(2):  152-156.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2016.02.016

摘要 ( 186 )   PDF (408KB) ( 157 )  

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绿色荧光蛋白(GFP)裸小鼠最初是为肿瘤研究而培育,是同时具有T淋巴细胞缺陷和系统表达GFP基因的裸小鼠。近20年来,学者们对其生物学特性进行了广泛而深入的研究,为该小鼠模型的应用奠定了基础。

曲古抑菌素A在体细胞核移植中的应用

施超, 陈国强, 马育芳

2016, 36(2):  157-160.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2016.02.017

摘要 ( 130 )   PDF (319KB) ( 150 )  

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体细胞核移植(SCNT)技术已成功获得多种哺乳动物的克隆后代,但一直以来克隆的成功率都很低,并且存活个体大多表型异常。研究表明,重构胚的重编程不完全是导致克隆动物存活率低下和发育异常的主要原因之一。DNA甲基化、组蛋白乙酰化都是影响重编程的重要因素,曲古抑菌素A(TSA)是链霉素的代谢产物,同时也是一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂,能降低DNA甲基化水平,促进重编程率,进而提高克隆效率。本文对TSA的生物学功能及其在动物SCNT中的应用进行了探究。