nklin大肠杆菌ompT基因的相对表达定量PCR方法的建立

doi:10.3969/j.issn.1674-5817.2011.04.009

实验动物与比较医学 ›› 2011, Vol. 31 ›› Issue (4): 269-272.DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2011.04.009

nklin大肠杆菌ompT基因的相对表达定量PCR方法的建立

徐晓静, 殷为民, 赵李祥

苏州大学医学院, 苏州 215123

收稿日期:2010-12-10 出版日期:2011-08-25 发布日期:2011-08-25
作者简介:徐晓静, 女(1982-), 助理实验师, 研究方向: 干细胞与组织工程, E-mail: xuxiaojing@suda.edu.cn。殷为民, 共同第一作者。

Detection of Relative Expression of ompT Gene in Escherichia coli by SYBR Green I RT-PCR

XU Xiao-jing, YIN Wei-min, ZHAO Li-xiang

Medical college, Soochow University, Suzhou 215123, China

Received:2010-12-10 Online:2011-08-25 Published:2011-08-25

摘要/Abstract

摘要： 目的建立ompT基因表达水平解析的定量方法。方法利用嵌合荧光(SYBR GreenI)标记,以编码甘油醛3-磷酸脱氢酶的看家基因gapA为内参基因,建立用于ompT基因表达水平解析的两步法实时定量反转录PCR。通过大肠杆菌的鸡体内感染模型,获取感染菌体,利用该定量PCR对感染菌体中ompT基因在感染鸡体内的表达水平进行了解析。结果成功建立了ompT基因表达水平解析的定量PCR。定量PCR结果显示,相对于体外培养,APEC E058株ompT在鸡体内的表达上调了6.69倍。结论建立的ompT基因定量PCR方法稳定、可靠,可用于ompT表达水平的解析。

关键词: SYBR GreenI, 定量反转录PCR, ompT, 表达

Abstract: Objective To establish a method to relatively quantify the expression of ompT and the gene of APEC strain E058 in vivo. Methods Two-step real time quantitative RT-PCRs (qRT-PCR) of ompT and gapA were developed based on SYBR Green I, respectively. In these qRT-PCRs, ompT was identified as the target gene and gapA as internal reference, and two standard curves were established using a series dilution of cDNA synthesized from the RNA of APEC E058 grown statically to exponential phase in rich medium. Results qRT-PCR of ompT was established. In chicken challenge model, the expressions of ompT in APEC E058 were up-regulated 6.69-fold compared to that of APEC E058 grown statically to exponential phase in rich medium. Conclusion The established qRT-PCR was reliable for the expression analysis of ompT.

Key words: SYBR GreenI, qRT-PCR, ompT, expression

中图分类号:

Q95-33

徐晓静, 殷为民, 赵李祥. nklin大肠杆菌ompT基因的相对表达定量PCR方法的建立[J]. 实验动物与比较医学, 2011, 31(4): 269-272.

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nklin大肠杆菌ompT基因的相对表达定量PCR方法的建立

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