豚鼠弓形虫抗体ELISA检测方法的建立及应用

doi:10.3969/j.issn.1674-5817.2013.04.006

实验动物与比较医学 ›› 2013, Vol. 33 ›› Issue (4): 275-278.DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2013.04.006

豚鼠弓形虫抗体ELISA检测方法的建立及应用

李晓波, 付瑞, 巩薇, 王吉, 卫礼, 王淑菁, 岳秉飞, 贺争鸣

中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所, 北京 100050

收稿日期:2012-11-29 出版日期:2013-08-25 发布日期:2013-08-25
作者简介:李晓波(1980-),男,硕士,研究方向:实验动物免疫学。E-mail:lxb8493059@yahoo.com.cn
基金资助:
国家科技支撑计划(编号: 2011BAI15B01)

Establishment and Application of ELISA for Detection of Anti-Toxoplasma Antibodies in Guinea Pig

LI Xiao-bo, FU Rui, GONG Wei, WANG Ji, WEI Li, WANG Shu-jing, YUE Bing-fei, HE Zheng-ming

Laboratory Animal Institute, National Institutes for Food and Drug Control, Beijing 100050, China

Received:2012-11-29 Online:2013-08-25 Published:2013-08-25

摘要/Abstract

摘要： 目的建立以弓形虫重组抗原的豚鼠弓形虫抗体ELISA方法,并进行初步应用。方法根据重组抗原的工作浓度包被酶标板,确定酶标二抗浓度,对方法的特异性、灵敏度、稳定性和重复性等进行测试。结果确定酶标二抗最佳稀释度为1∶8 000; 与豚鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCM)、仙台病毒(SV)、肺炎病毒(PVM)及呼肠孤3型(Reo3)阳性血清均无交叉反应; 对已知阳性血清的检测上限可达1∶2 560; 6个月的稳定性试验显示A₄₉₀值的相对偏差均小于15%; 批内变异系数(CV)5.7%~9.5%,批间变异系数(CV)1.9%~9.0%; 对182份样本的检测表明豚鼠弓形虫抗体阳性率为7.14%(13/182),与IFA检测结果的符合率为100%,与商品化试剂盒的阳性符合率为92.3%,阴性符合率为100%。结论建立的豚鼠弓形虫重组抗原ELISA检测方法可用以弓形虫抗体的常规检测。

关键词: 豚鼠, 弓形虫, 重组抗原, 酶联免疫吸附试验

Abstract: Objective To establish and apply a ELISA method for detecting the toxoplasma antibodies by recombinant antigen in guinea pig. Methods ELISA plates were coated using optimized recombinant toxoplasma antigen. we then determine optimal HRP-conjugated IgG concentration and test the assays specificity, sensitivity, stability and repeatability. Results The optimal HRP-IgG concentration is 1∶8000. There is no cross reaction when guinea pig sera with LCM, SV, PVM and Reo3 antibodies positive were added. The control positive serum could be detected at a maximum dilution of 1∶2560. Stability tests within six monthes show that the relative deviation of A₄₉₀ is less than 15%. The coefficient variation of the same batch is 5.7%-9.5%, of different batches is 1.9%-9.0%. The tox antibodies positive rate of 182 samples is 7.14%(13/182). The results coincidence rate between the assay and IFA is 100%, the positive coincidence is 92.3% and then negative is 100% compared to commercial kit. Conclusion The ELISA based on recombinant tox antigen can be used for routine test of guinea pig tox antibodies and be popularized.

Key words: Guniea pig, Toxoplasma, Recombinant antigen, ELISA

中图分类号:

Q95-33

李晓波, 付瑞, 巩薇, 王吉, 卫礼, 王淑菁, 岳秉飞, 贺争鸣. 豚鼠弓形虫抗体ELISA检测方法的建立及应用[J]. 实验动物与比较医学, 2013, 33(4): 275-278.

LI Xiao-bo, FU Rui, GONG Wei, WANG Ji, WEI Li, WANG Shu-jing, YUE Bing-fei, HE Zheng-ming. Establishment and Application of ELISA for Detection of Anti-Toxoplasma Antibodies in Guinea Pig[J]. Laboratory Animal and Comparative Medicine, 2013, 33(4): 275-278.

[1]	吴畅, 李晓洁, 吴殷囡, 王瑶, 汪玉馨, 宗卫峰, 孟长虹, 陆益红. 离体豚鼠回肠法应用于骨肽类注射剂中组胺类物质检测[J]. 实验动物与比较医学, 2022, 42(2): 159-165.
[2]	温福利, 郑和平, 党源, 薛来恩, 赵东岳. 弓形虫生物检测靶标miR-191的鉴定[J]. 实验动物与比较医学, 2018, 38(5): 350-355.
[3]	张玥晗, 文静, 朱海桃, 赵光宗, 李晓愚. 雌激素灌胃法制备豚鼠子宫肌瘤模型[J]. 实验动物与比较医学, 2016, 36(3): 195-199.
[4]	卫振, 娄绘芳, 吴凯, 陈雁虹, 谢敏, 刘迪文, 谢强敏. 两个豚鼠品系速发型哮喘模型中组胺受体的表达及对肺功能的影响[J]. 实验动物与比较医学, 2016, 36(2): 101-106.
[5]	顾筠莹, 印慧聪, 盛佳妮, 俞铭华, 蒋婉娟, 李英, 朱根麟. 电子摄像技术在豚鼠全身主动过敏试验中的应用[J]. 实验动物与比较医学, 2015, 35(3): 227-229.
[6]	肖萍, 王宁, 范玉兰, 董妙珠, 洪新宇, 仲伟鉴. 氨基葡萄糖及硫酸软骨素对豚鼠软骨组织结构及组织中糖胺多糖含量的影响[J]. 实验动物与比较医学, 2011, 31(3): 193-197.
[7]	倪丽菊，濮俊毅，魏晓锋，胡建华. 上海地区实验用羊的血清学调查初报[J]. , 2010, 30(4): 300-301.
[8]	李晓波，肖镜，付瑞，贺争鸣. B病毒糖蛋白的原核表达及ELISA检测方法的建立[J]. , 2009, 29(3): 162-167.
[9]	王吉，卫礼，巩薇，付瑞，肖镜，马丽颖，邢瑞昌，贺争鸣. 2003-2007年我国实验小鼠病毒抗体检测结果与分析[J]. , 2008, 28(6): 394-396.
[10]	王万山1，曲莉芝1，刘真喜2，吴清洪1，张嘉宁1，顾为望1. 脑炎微孢子虫病豚鼠模型的实验研究[J]. , 2008, 28(4): 246-250.
[11]	林琳，徐剑钦，张利棕，陈民利，潘永明，寿旗扬，王辉. 豚鼠静脉血血气、电解质及能量代谢指标的测定[J]. , 2008, 28(4): 263-265.
[12]	王万山1，刘真喜2，张嘉宁1，吴清洪1，顾为望1. FMMU白化豚鼠类鼻疽病模型的建立[J]. , 2008, 28(3): 167-170.
[13]	王胜昌1, 2, 3, 邵伟娟1, 谢建云1, 高诚1. 三种病原体PCR检测方法与血清学检测方法的比较[J]. , 2006, 26(4): 218-222.
[14]	宫兆华1, 董竞成1, 倪健2. 豚鼠支气管哮喘模型建立[J]. , 2004, 24(4): 204-206.
[15]	王婷，宋怀燕，张文明. 止脱生发酊生发作用的实验研究[J]. , 2004, 24(2): 99-100.

豚鼠弓形虫抗体ELISA检测方法的建立及应用

Establishment and Application of ELISA for Detection of Anti-Toxoplasma Antibodies in Guinea Pig

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