鹅细小病毒VP3蛋白抗血清的制备及在鸭胚和鸭胚成纤维细胞中的增殖研究

doi:10.3969/j.issn.1674-5817.2017.03.014

实验动物与比较医学 ›› 2017, Vol. 37 ›› Issue (3): 240-243.DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2017.03.014

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鹅细小病毒VP3蛋白抗血清的制备及在鸭胚和鸭胚成纤维细胞中的增殖研究

牛银杰, 刘柏含, 赵丽丽, 孙畅, 陈洪岩

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室, 实验动物与比较医学创新团队, 哈尔滨 150069

收稿日期:2017-04-06 出版日期:2017-06-25 发布日期:2017-06-25
作者简介:牛银杰(1987-),女,博士研究生,研究方向:预防兽医学。E-mail:niuyinjie0530@163.com;共同第一作者:刘柏含(1992-),女,硕士研究生,研究方向:微生物学。E-mail:liubaihan456@163.com
基金资助:
国家科技支撑计划(2015BAI07B02-02);中国农业科学院基本科研业务费专项(Y2016PT41);黑龙江省自然科学基金重点项目(ZD2016006)

Preparation of Goose Parvovirus VP3 Antiserum and Identification of Propagation in Duck Embryo and Duck Embryo Fibroblasts

NIU Yin-jie, LIU Bai-han, ZHAO Li-li, SUN Chang, CHEN Hong-yan

Division of Laboratory Animal and Comparative Medicine, State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology/Heilongjiang Provincial Key Laboratory of Laboratory Animal and Comparative Medicine, Harbin Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150069, China

Received:2017-04-06 Online:2017-06-25 Published:2017-06-25

摘要/Abstract

摘要： 目的制备鹅细小病毒(GPV) VP3衣壳蛋白的兔抗血清, 在绍兴麻鸭鸭胚及其成纤维细胞中成功增殖GPV。方法根据GPV H 分离株的VP3基因序列构建原核表达载体pET3a -VP3,诱导纯化VP3蛋白, 皮下注射免疫新西兰白兔, 收集和纯化VP3抗血清, 经Western blotting检测VP3抗血清与VP3蛋白的反应性。GPV H株鹅胚尿囊液接种SPF绍兴麻鸭胚和其成纤维细胞, 通过PCR反应和间接免疫荧光方法, 检测GPV在鸭胚及其成纤维细胞中的增殖。结果成功制备了VP3的兔抗血清,同时GPV在鸭胚及其成纤维细胞中进行良好增殖。结论 VP3抗血清的制备及GPV在绍兴麻鸭鸭胚及成纤维细胞中的增殖实验为GPV分子生物学特性及致病机制的研究奠定基础。

关键词: 鹅细小病毒(GPV), VP3基因, VP3抗血清, 增殖

Abstract: Objective To prepare antiserum against VP3 protein and propagate goose parvovirus (GPV) H in duck embryo and duck embryo fibroblasts (DEFs). Methods The prokaryotic expression vector pET30a-VP3 were constructed based on VP3 seqeucne of GPV H. VP3 protein was induced, expressd and purified, then immunized the New Zealand white rabbit. The VP3 antiserum was collected, purified and verified by Western blotting. GPV H fluid was inoculated into shaoxing duck embryo and DEFs, and the propagation of GPV was identified by PCR and indirect immunofuorescence. Result The VP3 antiserum was successfully prepared, and GPV H was well propagated in shaoxing duck embryo and DEFs. Conclusion VP3 antiserum preparation and GPV replication in duck embryo and DEFs may be provided basis for GPV molecular biological characteristic and pathogenic mechanism research.

Key words: Goose parvovirus (GPV), VP3 gene, VP3 antiserum, Propagation

中图分类号:

Q95-33

牛银杰, 刘柏含, 赵丽丽, 孙畅, 陈洪岩. 鹅细小病毒VP3蛋白抗血清的制备及在鸭胚和鸭胚成纤维细胞中的增殖研究[J]. 实验动物与比较医学, 2017, 37(3): 240-243.

NIU Yin-jie, LIU Bai-han, ZHAO Li-li, SUN Chang, CHEN Hong-yan. Preparation of Goose Parvovirus VP3 Antiserum and Identification of Propagation in Duck Embryo and Duck Embryo Fibroblasts[J]. Laboratory Animal and Comparative Medicine, 2017, 37(3): 240-243.

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鹅细小病毒VP3蛋白抗血清的制备及在鸭胚和鸭胚成纤维细胞中的增殖研究

Preparation of Goose Parvovirus VP3 Antiserum and Identification of Propagation in Duck Embryo and Duck Embryo Fibroblasts

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