2017年, 第37卷, 第2期　
刊出日期：2017-04-25

  

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论著
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  槲皮素对大鼠非酒精性脂肪肝炎的治疗作用及其机制

  李剑波, 余陈欢, 王志远, 方杰, 应华忠

  实验动物与比较医学. 2017, 37(2): 83-88. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2017.02.001

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  目的 观察槲皮素对大鼠非酒精性脂肪肝炎(NASH)的治疗作用,以及槲皮素对NASH大鼠肝组织核因子-κB(NF-κB)及其下游转录因子表达水平的影响。方法 采用高脂饲料喂食6周,建立NASH大鼠模型。灌胃给予40~160 mg/kg槲皮素治疗4周。采用生化检测仪检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平。采用Western blotting法检测各组肝脏中NF-κB蛋白表达情况。采用RT-PCR技术检测各组肝脏中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β) mRNA的表达情况。结果 与高脂模型组相比, 槲皮素各剂量组大鼠血清LDL-C、TC、AST水平显著降低。病理组织学检查结果表明,给予槲皮素治疗后,可明显减轻NASH大鼠肝脏脂肪变性和炎性细胞浸润; 同时, 还可明显降低TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA 以及NF-κB p65蛋白的表达,并呈一定的量效关系。结论 槲皮素对高脂饮食诱导大鼠NASH有明显治疗作用,作用机制可能与其抑制肝细胞脂质沉积和调控NF-κB通路有关。
  
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  Afp-cre-lacZ转基因小鼠的构建

  顾晓雯, 孙瑞林, 费俭

  实验动物与比较医学. 2017, 37(2): 89-93. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2017.02.002

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  目的 研究甲胎蛋白(Afp)阳性细胞的增殖分化在组织生长修复,肿瘤发生过程中的作用,建立Afp-CreERT转基因小鼠细胞示踪系统。方法 采用DNA雄原核显微注射方法获得Afp-CreERT转基因小鼠,筛选出合适的品系后,使之与Rosa26-lacZ工具小鼠杂交,获得Cre/lacZ双阳性的Afp-cre-lacZ转基因小鼠。结果 显微注射后,共出生小鼠56只,经PCR鉴定Cre阳性小鼠共4只,阳性小鼠传代后各为一系。筛选内源性Afp表达与Cre表达相对符合的品系作为Afp-CreERT转基因小鼠品系建系。Afp-CreERT转基因小鼠与Rosa26-lacZ工具小鼠杂交,经PCR鉴定后获得Cre/lacZ双阳性的Afp-cre-lacZ转基因小鼠。经实时PCR,X-gal染色,免疫荧光染色鉴定后得到Afp-cre-lacZ转基因小鼠细胞示踪系统,同时证实该系统能够正确示踪Afp表达阳性的细胞,同时也能够应用于肝损伤小鼠模型中。结论 成功构建了Afp-cre-lacZ转基因小鼠细胞示踪系统,为研究这类细胞的谱系发生提供了工具。
  
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  斑马鱼鳍和鳞片色素细胞的显微观察

  林金杏, 冯丽萍, 胡建华, 高诚

  实验动物与比较医学. 2017, 37(2): 94-101. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2017.02.003

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  目的 观察斑马鱼鳍和鳞片色素细胞的组成、分布及形态特征。方法 应用光学显微镜对AB品系斑马鱼鳍和鳞片色素细胞的显微结构进行观察。结果 斑马鱼鳍上分布有黑色素细胞和黄色素细胞,未观察到虹彩细胞。根据色素细胞的分布规律,将斑马鱼鳍分为有、无斑马鱼条纹两类。鳞片中分布有黑色素细胞、黄色素细胞和虹彩细胞。黑色素细胞较大,形态上主要分为呈树突状、颜色较浅、体积较大的I类黑色素细胞和呈团状、颜色较深、个体较小的II类黑色素细胞。黄色素细胞个体最小,呈黄色或者橙黄色。虹彩细胞较长呈长棒状或梭形,数量最少。结论 斑马鱼体表有黑色素细胞、黄色素细胞和虹彩细胞三种类型色素细胞,但鳍和鳞片在色素细胞组成和分布上存在着差异,鳞片中色素细胞的种类和形态特征较鳍中色素细胞更丰富。
  
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  4-苯基咪唑+氢氧化铝复合佐剂对甲型肝炎减毒活疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响

  马静, 王海漩, 李思瑾, 何慧, 胡凝珠, 胡云章

  实验动物与比较医学. 2017, 37(2): 102-107. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2017.02.004

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  目的 研究4-苯基咪唑(4-PI)+氢氧化铝[Al(OH)₃]复合佐剂对甲型肝炎减毒活疫苗(HepA-l)诱导的小鼠体液免疫应答的影响。方法 实验设置7个分组,分别是: 阴性对照组(1×PBS),铝佐剂组[HepA-l+Al(OH)₃], 疫苗组(HepA-l), M1[HepA-l+Al(OH)₃+4-PI 500 μg]组,M2[HepA-l+Al(OH)₃+ 4-PI 1 mg]组,M3[HepA-l+Al(OH)₃+4-PI 1.5 mg]组和M4(HepA-l+4-PI 1 mg)组, 200 μL HepA-l, 24 μL Al(OH)₃,随机分配小鼠,7只/组,分别皮下注射300 μL,接种一次。用间接酶联免疫吸附法测试抗-甲型肝炎病毒(HAV) IgG抗体滴度,检测时间为免疫后4周、8周、12周、16周。实验过程中, 观察和记录小鼠的健康情况。结果 除阴性对照组, 其余各组4个时间点均检测到抗-HAV IgG抗体,12周达到峰值。M2组在整个检测阶段抗体水平最高,显著高于疫苗组(t=4.449、3.633、2.565、6.809,P<0.05)和M4组(t=6.256、4.796、4.153、4.113,P<0.05),且第4周高于铝佐组(t=2.877, P<0.05); M4组在4个时间点检测到的抗体水平与疫苗组相当。4-PI最佳剂量组是1 mg/只。实验全程观察到小鼠每项生理指标均正常。结论 4-PI+氢氧化铝复合佐剂能增强HepA-l诱导的小鼠体液免疫应答,有望开发成HepA-l新型复合佐剂。
  
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  吲哚胺-2,3-双加氧酶抑制剂联合铝佐剂对甲型肝炎减毒活疫苗诱导小鼠体液免疫应答的效应分析

  何慧, 李彦涵, 李建芳, 马静, 胡云章, 胡凝珠

  实验动物与比较医学. 2017, 37(2): 108-112. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2017.02.005

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  目的 探讨吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂INCB024360类似物与铝佐剂联合对甲型肝炎减毒活疫苗(HepA-l)诱导小鼠体液免疫应答的影响,以评价其复合佐剂效应。方法 分别将三种不同剂量的INCB024360类似物(150 μg, 100 μg, 50 μg)与Al(OH)₃(300 μg)复合后与HepA-1共同免疫ICR小鼠分别作为复合佐剂1组,2组,3组,同时设空白对照组、单纯疫苗组、铝佐剂对照组和单一INCB024360类似物(100 μg)组, 共免疫一次,于免疫后 4周、8周、12周、16周进行尾静脉采血, 采用间接 酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清抗甲型肝炎病毒(HAV) IgG 抗体水平。结果 除空白对照组外, 各组小鼠免疫后4周、8周、12周、16周, 均产生抗HAV IgG抗体, 抗体水平随免疫时间的延长逐渐升高, 于12周达到峰值。复合佐剂2组[HepA-118 EU+Al(OH)₃ 300 μg+ INCB024360类似物100 μg]产生的抗体水平最高且持续时间较长, 在8周和12周时, 其对HepA-1的免疫增强效应显著高于单一佐剂组以及铝佐剂对照组(P<0.05, t值分别为3.169、2.439)。4周、8周、12周、16周, 单一佐剂组与单纯疫苗组差异均不具有统计学意义(P>0.05)。结论 IDO抑制剂INCB024360类似物与铝佐剂复合后具有较强的复合佐剂效应,免疫增强效应优于铝佐剂对照组; 但是单一的INCB024360类似物不具有显著佐剂效应。
  
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  树鼩经甲型肝炎减毒活疫苗、乙型肝炎疫苗及联合硫酸乙酰肝素佐剂免疫后的免疫效果评价

  王东宝, 胡云章, 胡凝珠, 罕园园, 匡德宣, 李彦涵

  实验动物与比较医学. 2017, 37(2): 113-117. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2017.02.006

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  目的 探讨甲型肝炎减毒活疫苗(HepA-l)、乙型肝炎疫苗(Hbv)以及HepA-l、Hbv分别与佐剂硫酸乙酰肝素(HS)联合对树鼩进行免疫后树鼩体液免疫应答的影响。方法 按照疫苗种类、佐剂以及免疫途径将树鼩随机分组,同时设空白对照组,分别于末次免疫后的4周、8周、12周、16周和20周尾静脉采血,用ELISA法检测树鼩血清中的特异性IgG抗体水平。结果 除空白对照组外,实验组均在末次免疫的第四周检测到抗甲型肝炎病毒(HAV)及抗乙型肝炎病毒(HBV)抗体,抗体水平随着免疫时间延长而逐渐升高并于12周达到峰值,此后逐渐下降。同时,联合HS佐剂组的体液免疫效果均优于单纯疫苗免疫组。并且不同抗原以及联合佐剂采用不同的免疫途径免疫树鼩其免疫效果存在显著性差异。结论 通过对树鼩进行疫苗免疫原性和增强免疫效果检测,证实以树鼩作为动物模型进行疫苗评价的可行性。
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  自发性糖尿病长爪沙鼠环氧化酶(COX)-2在三种组织中的表达

  王菲菲, 龚菁菁, 霍学云, 路静, 郭萌, 刘欣, 李长龙, 杜小燕, 陈振文, 吕建祎

  实验动物与比较医学. 2017, 37(2): 118-122. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2017.02.007

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  目的 研究环氧化酶(COX)-2基因在糖尿病长爪沙鼠3种组织中的表达水平,进一步探索其与长爪沙鼠糖尿病发生和发展的关系。方法 选取糖尿病长爪沙鼠和正常沙鼠各6只,分别采集动物的骨骼肌、肝脏和肾脏组织,用实时PCR和Western blotting检测COX-2基因在各组织中mRNA和蛋白表达水平。结果 实时PCR的结果表明,COX-2基因的mRNA水平在糖尿病组动物的骨骼肌组织中表达与对照组无明显差异,而肝脏和肾脏组织中有表达升高趋势。Western blotting结果显示,糖尿病组COX-2的蛋白水平在肝脏和肾脏组织中存在表达升高趋势,且肾脏具有统计学意义。结论 COX-2在糖尿病长爪沙鼠肝脏和肾脏组织中表达升高,在肾脏组织尤其明显,说明COX-2对长爪沙鼠糖尿病的影响可能发生在肝脏和肾脏组织中。
  
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  肠道病毒71型体外感染树鼩肾细胞特性观察

  王文广, 匡德宣, 尹博文, 陆彩霞, 罕园园, 李娜, 仝品芬, 孙晓梅, 蔡路奎, 代解杰

  实验动物与比较医学. 2017, 37(2): 123-129. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2017.02.008

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  目的 探讨肠道病毒71型(EV71)对树鼩肾细胞的感染特性。方法 通过组织块贴壁法分离培养树鼩原代肾细胞,观察细胞形态并进行传代培养,利用细胞角蛋白18 对树鼩肾细胞进行间接免疫荧光鉴定。用EV71感染树鼩肾细胞,通过倒置显微镜观察细胞病变情况,结合间接免疫荧光实验观察细胞中病毒蛋白的表达情况,采用实时荧光定量PCR技术检测病毒载量,以Vero细胞为对照,研究EV71对树鼩肾细胞的感染情况。结果 通过组织块贴壁法可以快速获得树鼩原代肾细胞,并可进行多次传代培养,细胞为梭形,贴壁呈铺路石状,免疫荧光鉴定为肾上皮细胞。EV71可以感染树鼩肾细胞,使之出现明显的细胞变圆、脱落或解体等病变,免疫荧光实验可以观察到病毒蛋白的分布,实时荧光定量PCR检测病毒载量最高可达10⁵拷贝/mL,病变情况和增殖趋势与Vero细胞相似。结论 EV71可以体外感染树鼩肾细胞,该细胞模型可为EV71药物筛选和感染机制研究提供平台。
  
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  树鼩角膜原代上皮细胞的分离培养、纯化与鉴定

  苗雨润, 宋庆凯, 匡德宣, 陈玲霞, 尹博文, 李晓飞, 代解杰

  实验动物与比较医学. 2017, 37(2): 130-135. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2017.02.009

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  目的 建立树鼩角膜上皮细胞(CECs)稳定的体外培养技术,为人类角膜疾病研究提供新的实验材料。方法 使用改进的双酶消化法取得树鼩CECs, 用转化生长因子-β(TGF-β)抑制剂配合梯度消化对树鼩CECs进行纯化,角蛋白3/12抗体对CECs进行免疫荧光检测及鉴定。结果 优化的酶消化法可以快速、有效得到高纯度的树鼩CECs。TGF-β 抑制剂及梯度消化法可以达到良好的纯化目的,纯化的CECs在传代过程中仍保持良好形态。树鼩CECs免疫荧光染色显示角蛋白3/12单克隆抗体阳性。结论 成功建立了一种有效、简单、经济适用的树鼩角膜上皮原代细胞的体外培养技术,所获得的原代细胞具有较好的上皮细胞形态特征并可以连续传代,为眼科疾病的研究提供一种新材料。
  
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  紫杉醇缓释微球对卵巢癌裸小鼠原位移植瘤的抑瘤效果

  饶子亮, 王弋, 王诺, 熊仁清, 张明浩, 邝少松, 唐小江

  实验动物与比较医学. 2017, 37(2): 136-139. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2017.02.010

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  目的 研究以新型聚乳酸磷酸酯聚合物(PLCE)为载体的紫杉醇缓释微球体内抑瘤效果。方法 采用HO8910人卵巢癌细胞株,手术接种于68只BALB/c裸小鼠卵巢包膜下。3周后,取肿块大小相对均匀的42只裸小鼠随机分成7组: 空白对照组、聚合物空白微球对照组、紫杉醇注射液组,紫杉醇缓释微球1中、低剂量组,紫杉醇缓释微球2中、低剂量组,每组6只。分组当日给药1次,连续观察一个月。结果 紫杉醇注射液抑瘤率57.0%; 紫杉醇缓释微球2中剂量抑瘤率77.1%,低剂量抑瘤率58.7%。结论 以新型PLCE为载体的紫杉醇缓释微球2(60 mg/kg)对卵巢癌裸小鼠原位移植瘤有良好的抑制效果,但是毒性仍然较大,需要进一步改进。
  
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  不同辐照剂量率X射线对小鼠外周血细胞及免疫器官的影响

  于纯淼, 王贺, 赵力松, 孟丹, 郭旭, 于栋华

  实验动物与比较医学. 2017, 37(2): 140-143. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2017.02.011

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  目的 探讨不同辐照剂量率X射线对小鼠外周血细胞及免疫器官的影响。方法 120只小鼠随机分为正常对照组、低剂量率照射组和高剂量率照射组,每组40只,雌雄各半。分别于照射后24 h、48 h、96 h、192 h每组各取10只小鼠摘眼球取血用于测定红细胞计数(RBC)、白细胞计数(WBC)、血小板数(PLT)和血红蛋白(HGB)含量,然后处死小鼠取胸腺和脾脏称重,计算胸腺指数和脾脏指数。另取一部分做组织匀浆,测定匀浆中的超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。结果 不同剂量率X射线照射均会造成小鼠外周血细胞中RBC、WBC、PLT和HGB的降低,高、低剂量率组间无显著差异。在相同取样时间,高、低剂量率组小鼠胸腺、脾脏指数与对照组比较均差异显著,高、低剂量率组间脾脏指数差异显著,在取样时间24 h,高、低剂量率组间胸腺指数差异显著。高、低剂量率组小鼠胸腺、脾脏组织匀浆中MDA的含量均升高,SOD含量均降低,且与对照组比较差异显著。高、低剂量率组小鼠胸腺组织匀浆中MDA的含量在取样时间48 h、96 h差异显著,SOD的含量在取样时间24 h、48 h、96 h差异显著; 脾脏组织匀浆中MDA的含量在取样时间24 h、48h差异显著,SOD的含量在取样时间24 h、48 h、192 h差异显著。结论 高、低剂量率辐照对小鼠外周血细胞数量的影响无显著差异; 高剂量率辐照对小鼠脾脏指数的影响较低剂量率大,对胸腺指数的影响无显著差异;高剂量率辐照小鼠胸腺、脾脏组织中SOD和MDA的影响较低剂量率大。
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  生化标记方法在KM小鼠遗传结构分析中的应用

  王洪, 魏杰, 李晓波, 巩薇, 岳秉飞

  实验动物与比较医学. 2017, 37(2): 144-149. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2017.02.012

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  目的 利用生化标记检测法分析1990年和2010年KM小鼠群体遗传结构的变化。方法 采用国家标准GB/T 14927.1-2008推荐的生化标记检测法对同一种群的来源KM小鼠(1990年的18只和2010年的50只)进行遗传质量检测,借助统计软件POPGENE 1.32进行群体遗传结构分析。结果 1990年群体的平均杂合度是0.262 5,多态性信息含量是0.206 5。2010年群体的平均杂合度是0.161 5,多态性信息含量是0.130 7。群体间比较显示,群体间分化系数为0.122 4,遗传距离为0.095 1。结论 经过20年的封闭繁育,该KM小鼠群体出现了中度的遗传分化,但仍属于同一品系(同种同属)的小鼠群体。
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  排气通风笼具微环境的动态检测

  王贵平, 薛智谋, 周正宇, 吴强, 华晨, 王婧

  实验动物与比较医学. 2017, 37(2): 150-154. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2017.02.013

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  目的 动态检测屏障环境中用于小鼠的新型排气通风笼具(EVC)的微环境指标。方法 测定两种饲养小鼠的EVC笼盒内通风风速和笼盒体积,计算笼盒换气次数。使用刨花垫料时换笼周期设置为7 d,使用玉米芯垫料时换笼周期设置为14 d,分别在每种换笼周期内每日连续检测笼盒内的噪声、压差、温度、相对湿度和氨浓度指标。结果 两种EVC笼盒内噪声分别为54.2±3.4 db和55.6±4.1 db,笼盒与屏障环境压差分别为-23.1±9.2 Pa和-27.5±11.6 Pa。从换笼周期第1日起,饲养小鼠的EVC笼盒内的温度差、相对湿度和氨浓度都呈现逐步升高的趋势; 使用刨花垫料的两种EVC笼盒其第6日的氨浓度分别达到1.28±0.08 mg/m³和1.33±0.15 mg/m³,笼盒内温度分别为23.5±0.27 ℃和22.8±0.15 ℃,湿度分别为67.8%±2.2%和70.2%±1.1%;而使用玉米芯垫料的两种EVC笼盒内第12日达到氨浓度分别为1.95±0.46 mg/m³和2.17±0.33 mg/m³,笼盒内温度分别为23.8±0.4 ℃和24.1±0.2 ℃,湿度分别为70.3%±1.8%和69.6%±1.8%。结论 使用EVC笼盒饲养小鼠时,刨花垫料采取每6日换笼及玉米芯垫料采取每12日换笼的方案,可以使笼盒内的微环境指标: 噪声、压差、温度、湿度和氨浓度,均符合国标GB14925-2010要求。提示EVC与玉米芯垫料相结合,有助于维持笼盒内微环境稳定,可用于实验动物的生产和相关研究中。
  
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  三种不同固定液对小鼠组织过碘酸雪夫染色效果比较

  徐瑶瑶, 李思琪, 田雪梅

  实验动物与比较医学. 2017, 37(2): 155-159. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2017.02.014

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  目的 比较小鼠肝脏、肾脏、小肠三种组织在质量分数4%多聚甲醛液、Carnoy’s液、Bouin’s液三种固定液不同固定时间下的制片质量和过碘酸雪夫染色(PAS)效果,筛选出一种最为适用的固定方法。方法 取成年雄性C57BL/6小鼠肝脏、肾脏、小肠,分别固定于三种固定液,固定时间分别是质量分数4%多聚甲醛液: 24 h、48 h、72 h; Carnoy’s液: 4 h、8 h、12 h; Bouin’s液：12 h、24 h、48 h,充分固定后,常规制作石蜡切片,然后进行PAS染色,对比观察染色效果。结果 三种固定液对不同组织、不同固定时间下PAS染色结果存在差异。肝脏、肾脏、小肠经Carnoy’s液处理12 h后PAS效果最佳,质量分数4%多聚甲醛液固定24 h基本满足观察检测效果,而经Bouin’s液固定组织染色效果相对较差。结论 PAS反应对固定液和固定时间具有选择性, Carnoy’s 液是组织进行PAS染色的理想固定液,但从固定效果、重复性、安全性、成本等多因素综合考虑,在PAS反应中,质量分数4%多聚甲醛液可以替代Carnoy’s液。
综述
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  甲状腺疾病啮齿类动物模型的研究进展

  塔拉, 金山

  实验动物与比较医学. 2017, 37(2): 160-165. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2017.02.015

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  综述了甲状腺功能亢进症、甲状腺功能减退症、自身免疫性甲状腺炎和甲状腺癌等甲状腺疾病啮齿类动物模型的建立方法,并对分化型甲状腺癌术后促甲状腺激素(TSH)抑制治疗大鼠模型的建立提出设想。
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  实验动物福利实施研究进展

  冶冬阳, 孙静, 李日飞, 左儒楠, 李引乾

  实验动物与比较医学. 2017, 37(2): 166-170. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2017.02.016

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  动物实验是生命科学研究中不可或缺的手段,因此实验动物对生物医学发展有着重要作用。随着人类社会的发展进步,实验动物福利日益受到人们的关注。本文从动物福利的内涵出发,讨论了实施实验动物福利的必要性,阐述了其发展历史及遵循原则,比对了国内外实验动物福利的现状,并探讨了实施实验动物福利的影响因素与改善措施。旨在提高实验动物福利在动物实验工作者心中的地位,号召与引导人们实施实验动物福利,使其得到良好保障。