2016年, 第36卷, 第3期　
刊出日期：2016-06-25

  

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论著
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  泛素蛋白连接酶1在大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜中的表达及意义

  杨波, 林新铎, 王星人, 唐俊明, 杨建业, 张蕾, 曹腾, 姜峰波, 王家宁

  实验动物与比较医学. 2016, 36(3): 161-167. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2016.03.001

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  目的 研究胞质泛素蛋白连接酶1(KPC1）在大鼠颈动脉球囊损伤后的蛋白表达情况,探讨其在新生内膜形成过程中的生物学功能。方法 将成年雄性SD大鼠(450~500 g)随机分为假手术组和颈动脉球囊损伤模型组,建模后以左侧损伤动脉为实验组,同时以假手术组的左侧正常颈动脉为对照组。实验组大鼠于损伤后1 d、3 d、7 d、14 d、28 d分别处死并取材,采用 Western blot 检测KPC1蛋白、内膜增殖细胞核抗原(PCNA)表达情况,以qRT-PCR检测KPC1的mRNA表达,苏木精-伊红(HE)染色后比较内膜增生程度; 采用体外培养血管平滑肌细胞(VSMC)建立增殖模型,运用Western blot及qRT-PCR检测其KPC1蛋白、KPC1 mRNA表达特征。结果 Western blot 结果显示,颈动脉球囊损伤后实验组KPC1蛋白表达水平明显低于正常对照组(P<0.05),而PCNA蛋白表达量明显高于正常对照组(P<0.05); qRT-PCR检测结果显示,实验组KPC1的mRNA水平明显低于对照组(P<0.05); HE染色结果示颈动脉球囊损伤后1 d、3 d时光镜下血管内膜增生不明显; 7 d时光镜下可见新生内膜,增生的VSMC向内膜下迁移,管腔开始狭窄; 14 d时,可见明显新生内膜,VSMC排列紊乱,内弹力膜断裂,管腔明显狭窄,内膜厚度超过中膜; 28 d时,血管内膜继续不规则增生,血管腔狭窄程度继续加重,狭窄超过50%。体外培养并模拟VSMC增殖,提取细胞进行 Western blot和qRT-PCR检测显示,KPC1蛋白、KPC1 mRNA表达在血小板源性生长因子-BB刺激增殖后开始逐渐减低。结论 抑制KPC1基因表达可促进损伤内膜增生,其作用机制可能与促进VSMC增殖有关。
  
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  慢性束缚应激对小鼠认知功能及海马不同亚区星形胶质细胞的影响

  王彦永, 张忠霞, 孙美玉, 王铭维

  实验动物与比较医学. 2016, 36(3): 168-173. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2016.03.002

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  目的 探讨慢性束缚应激(CRS)对小鼠认知功能的影响,观察海马不同亚区(CA1、CA3和DG区)星形胶质细胞(AS)的激活情况,明确慢性应激对海马的损伤是否存在特异性靶点。方法 雄性KM小鼠24只按体质量随机分为对照组和应激组,每组各12只。采用慢性束缚方法建立小鼠CRS模型,利用新异物体识别实验(NORT)和Morris水迷宫(MWM)评测其认知功能,HE染色观察细胞的形态结构变化,免疫组织化学染色法对海马CA1、CA3和DG区AS标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)进行染色,采用显微镜和图像分析软件对海马上述亚区AS进行计数并分析GFAP的表达。结果 与对照组相比,应激组小鼠NORT及MWM实验的成绩均显著下降(P<0.05),海马神经元形态结构损伤,CA1和CA3区AS细胞数及GFAP表达均显著增加(P<0.05),DG区两者均无显著变化(P>0.05)。结论 CRS能够导致小鼠认知功能障碍,海马CA1、CA3区AS的活化可能是其机制之一。
  
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  人结肠癌原位移植瘤裸小鼠模型的活体成像观察

  赵永江, 朱淼鑫, 袁立新, 孙磊, 耿沁, 李静, 姚明, 闫明霞

  实验动物与比较医学. 2016, 36(3): 174-179. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2016.03.003

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  目的 建立人结肠癌原位移植瘤裸小鼠模型,探讨小动物活体成像系统在结肠癌原位移植瘤模型中的应用。方法 应用慢病毒转染的方法建立同时表达绿色荧光蛋白及荧光素酶(GFP/Luc)的人结肠癌细胞HCT-116,分别采用组织块法及培养细胞法建立裸小鼠结肠癌原位移植瘤模型,通过小动物活体成像系统动态观察肿瘤在肠原位的生长及转移情况。结果 成功建立了稳定表达GFP/Luc的人结肠癌细胞,并应用该细胞成功建立了结肠癌原位移植瘤动物模型。经连续7周动态观察表明,随着肿瘤移植时间的延长,腹部皮下触诊显示肿瘤逐渐增大,小动物活体成像显示荧光素表达面积和强度也逐渐增大。结论 小动物活体成像系统能够客观评价结肠癌的原位生长及转移情况,为体内深部肿瘤的观察和研究提供了有效的参考依据。
  
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  小动物断层扫描系统在小鼠爆发性肝损伤模型中的应用

  李大伟, 华相伟, 张江, 姚菊芳, 戴慧莉, 孔宪明

  实验动物与比较医学. 2016, 36(3): 180-185. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2016.03.004

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  目的 利用小动物断层扫描(MicroCT)系统观察内毒素联合D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN)所致小鼠爆发性肝损伤模型中的影像学表现和CT值变化,并分析影像学表现与小鼠肝损伤之间的关系及机制。方法 取5只雄性C57BL/6小鼠进行爆发性肝损伤造模(LPS 10 μg/kg+D-GalN 700 mg/kg,腹腔注射),分别于造模前,造模后3 h、6 h利用MicroCT行小鼠活体肝组织扫描,根据扫描图像所获得资料测量小鼠肝脏的平均CT值,分析比较各组肝损伤征象的显示率差异。同时,取20只小鼠分为4组,造影剂(ExiTron nano 6000)组,给予造影剂注射,检测造影剂对肝脏有无毒性; PBS组, 给予同造模组相同剂量的PBS注射; 造模3 h组,肝损伤造模后3 h取血和组织标本; 造模6 h组,造模后6 h取标本。然后比较MicroCT显像与小鼠血液及病理结果的相关性。结果 以ExiTron nano 6000 做为造影剂, MicroCT可清晰的显影肝脏和脾脏的二维和三维结构。LPS/D-GalN可以造成严重的肝脏损伤。给予LPS/D-GalN处理后3 h,小鼠肝脏的CT值明显升高,体外实验证明LPS可增强巨噬细胞吸收造影剂的能力。结论 MicroCT可通过无创方法在小鼠爆发性肝损伤早期反应肝脏损伤的变化,具有较高的应用前景。
  
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  电刺激迷走神经建立应激性心肌病家兔模型

  郭瑞威, 杨丽霞, 奚银艳, 匡陈伟

  实验动物与比较医学. 2016, 36(3): 186-189. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2016.03.005

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  目的 通过电刺激迷走神经后发射性引起交感神经的持续兴奋,建立一种新型应激性心肌病(SIC)家兔模型。方法 选用2月龄雌性新西兰白兔10只,随机分为对照组和实验组,实验组兔暴露迷走神经后利用电刺激法建立的SIC模型,并通过心电图、心脏解剖和心肌组织病理学观察进行评价,对照组只暴露迷走神经,不进行电刺激。结果 成功暴露兔迷走神经并电刺激后,与对照组相比,实验组兔1 d后心电图观察显示心率增快; 1个月后心尖部心肌变薄(0.83±0.12 mm vs 1.55±0.11 mm,P<0.05); 心肌组织出现典型的SIC心肌改变。结论 利用电刺激迷走神经可以成功建立SIC兔模型。
  
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  面神经夹闭建立大鼠面瘫模型

  李瑶, 高小莉, 陈健康, 王四旺, 谢艳华

  实验动物与比较医学. 2016, 36(3): 190-194. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2016.03.006

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  目的 建立操作简便、发病率高、死亡率低的大鼠面瘫模型制作方法。方法 SD大鼠50只,雌雄各半,随机分为5组,每组10只,分别用蚊式钳闭合三齿夹闭大鼠右侧耳后面神经主干6 min、8 min、10 min、12 min、14 min,记录各组大鼠面神经复合动作电位(CMAP)波幅变化情况,观察大鼠的一般行为学指标。结果 造模6 min、8 min与造模之前比较,面神经CMAP波幅无差异,造模10 min、12 min、14 min与造模之前相比较,大鼠面神经CMAP波幅明显减小并趋于0; 行为学评分结果表明,造模6 min、8 min大鼠为不完全面瘫,造模10 min、12 min、14 min大鼠完全面瘫,造模12 min、14 min大鼠与造模10 min相比无显著差异。结论 用蚊式钳闭合三齿夹闭面神经主干10 min,面神经CMAP下降波幅和行为学评分均表明大鼠完全面瘫,故该方法可作为大鼠面瘫模型建立的优选方法。
  
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  雌激素灌胃法制备豚鼠子宫肌瘤模型

  张玥晗, 文静, 朱海桃, 赵光宗, 李晓愚

  实验动物与比较医学. 2016, 36(3): 195-199. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2016.03.007

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  目的 用雌激素灌胃法制备豚鼠子宫肌瘤模型, 探讨不同剂量及给药周期对子宫肌瘤形成的影响。方法 性成熟雌性豚鼠分为短周期组和长周期组,分别每周2次灌胃戊酸雌二醇(补佳乐)0.1 mg/100 g体质量6周和8周。空白对照组灌胃相同体积生理盐水。灌胃结束后,ELISA法测定血清中雌二醇及孕酮水平; 计算肌瘤形成率、子宫脏器系数; 子宫组织制作石蜡切片,检测子宫肌瘤模型是否成功建立。结果 短周期模型组成瘤率30%,长周期模型组成瘤率40%,总体成瘤率35%。血清学检测显示模型组动物血清雌激素水平明显增高,孕激素水平下降; 病理组织学检测证实造模成功。结论 雌激素灌胃法是一种简单有效的豚鼠子宫肌瘤模型造模方法。
  
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  山羊上颌窦及额窦黏膜厚度对比观察

  李岩峰, 韩奕诗, 任桓, 陆云龙, 董欣明, 刘乐, 胡品, 王宁

  实验动物与比较医学. 2016, 36(3): 200-203. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2016.03.008

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  目的 探讨山羊鼻窦(上颌窦及额窦)黏膜的厚度差异并分析其原因,为上颌窦提升术中涉及黏膜问题时提供理论依据和指导。方法 从获取的每块鼻窦黏膜(上颌窦顶、上颌窦底及额窦黏膜)上切取适当大小黏膜置于固定液中, 24 h后制成组织切片, 在带有刻度目镜的光学显微镜下观察, 镜下随机选取三处读数并记录。结果 山羊上颌窦顶黏膜厚度为410.03±65.97 μm, 窦底黏膜为461.33±91.37 μm,额窦黏膜为216.90±46.47 μm,上颌窦顶与额窦、上颌窦底与额窦、窦顶与窦底黏膜厚度均值之间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 上颌窦顶、底黏膜较额窦黏膜厚,上颌窦底黏膜较窦顶黏膜稍偏厚。
  
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  鹿瓜多肽关节腔注射治疗家兔类风湿性关节炎实验研究

  冯艳琴, 敖金波, 杨敏, 程建明, 陈德森

  实验动物与比较医学. 2016, 36(3): 204-207. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2016.03.009

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  目的 研究鹿瓜多肽治疗家兔类风湿性关节炎(RA)的机制。方法 用小牛软骨II型胶原+弗氏完全佐剂0.1 mL于家兔左膝关节腔内多点注射的方法制备RA模型,模型动物分为模型组及低、高剂量鹿瓜多肽(1 mg/d、2 mg/d)治疗组(A、B组),分别计算治疗后1 d、7 d、14 d、21 d足肿胀度,测定关节积液中透明质酸(HA)、白细胞介素-1β(IL-1β),基质金属蛋白酶(MMP-3)及骨形态发生蛋白(BMP)含量。结果 与模型组比较,鹿瓜多肽低、高剂量组14 d、21 d时动物足肿胀度、MMP-3、IL-1β含量明显降低,BMP、HA含量明显升高(P<0.05),低、高剂量组间无明显差异(P>0.05)。结论 鹿瓜多肽可提高家兔关节腔HA合成及BMP分泌,抑制MMP-3及IL-1β对关节滑膜的浸蚀而达到治疗RA的目的。
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  还原型谷胱甘肽对C57BL/6J小鼠体外受精的影响

  赵晨, 张双琴, 王利凤, 李薇

  实验动物与比较医学. 2016, 36(3): 208-211. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2016.03.010

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  目的 探讨受精液中添加还原型谷胱甘肽(GSH)对C57BL/6J小鼠体外受精的影响。方法 以体外受精液(HTF)作为对照, 在HTF液中添加不同浓度(0.25 mmol/L、0.50 mmol/L、0.75 mmol/L、1.00 mmol/L、1.25 mmol/L和1.50 mmol/L)的GSH,对C57BL/6J近交系小鼠进行体外受精实验,观察体外受精和早期胚胎发育情况。同时,用5种C57BL/6J小鼠背景的基因工程小鼠加以验证。结果 与对照组相比,实验组的体外受精率显著升高,浓度为0.50 mmol/L时,体外受精率提高显著(P<0.05),浓度在1.25 mmol/L时,体外受精率最高(P<0.01)。受精卵的体外囊胚发育率实验组与对照组无显著性差异(P>0.05)。C57BL/6J背景的基因工程小鼠的体外受精率和体外囊胚发育率与C57BL/6J近交系小鼠相似。结论 在HTF中添加一定浓度的GSH能够提高C57BL/6J小鼠及C57BL/6J背景的基因工程小鼠的体外受精效果。
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  偏苯三酸三辛酯对肝细胞的毒性作用及其机制

  陈献花, 方丽, 李雪来, 余陈欢, 应华忠

  实验动物与比较医学. 2016, 36(3): 212-215. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2016.03.011

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  目的 研究偏苯三酸三辛酯(TOTM)的肝细胞毒性作用及其毒性机制。方法 将TOTM 0.062 5~1.0 mg/mL分别与HepG2、LO2、Hep1-6肝细胞作用48 h。采用MTT法检测细胞存活率并计算半抑制浓度(IC₅₀)值; 倒置显微镜观察细胞形态变化; 采用试剂盒检测细胞培养液中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)含量; 采用流式细胞技术检测细胞凋亡情况。结果 TOTM对肝细胞增殖有明显的抑制作用,MTT检测显示TOTM对HepG2、LO2、Hep1-6肝细胞的IC₅₀分别为1.74 mg/mL、0.34 mg/mL和0.23 mg/mL。随着TOTM剂量的增加,TOTM能升高肝细胞上清中AST、ALT含量, 促进LDH释放和细胞凋亡。结论 TOTM对肝细胞具有一定的毒性作用。
  
经验交流
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  BALB/c小鼠不同体质量范围对重组人促红素注射液体内活性测定的影响

  邵宝珠, 唐其凤, 曹丽丽

  实验动物与比较医学. 2016, 36(3): 216-218. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2016.03.012

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  目的 以《中国药典》的促红素各论为基础,探讨在重组人促红素(rhEPO)体内活性测定时,6~8周龄SPF级BALB/c小鼠, 不同体质量对试验结果变异率的影响。方法 按小鼠体质量分为14~22 g、18~20 g、15~20 g和16~18 g组,测定不同体质量对rhEPO反应值稳定性、线性和重复性的影响。结果 使用体质量16~18 g、18~20 g小鼠测定的结果变异率低。结论 rhEPO体内活性测定应选用6~8周龄、体质量16~20 g的BALB/c小鼠。
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  动物实验信息化管理系统的开发和应用

  顾祖曦, 张超超, 蔡贞贞, 黄祯珍, 汤家铭

  实验动物与比较医学. 2016, 36(3): 219-225. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2016.03.013

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  介绍了本单位动物实验信息化系统开发的设计思路、主要内容和基本流程,包括课题负责人的确认、实验人员的资质审查及注册、预约登记、登记修改及确认、课题伦理审查及批准、实验经费结算等。它的初步应用给本单位的动物实验管理带来了先进思想和方法,提高了效率,促进了科学化、标准化进程,使动物实验管理工作规范有序,提升了整体工作水平,并为建设数字化管理打下了基础。
  
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  浙江省实验动物依法行政的现状及思考

  冯婵璟, 柯贤福, 吴立仁, 胡慧颖

  实验动物与比较医学. 2016, 36(3): 226-230. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2016.03.014

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  在回顾国家及浙江省实验动物法制化建设进程的基础上,对我省实验动物行政许可的现状进行数据统计并简要分析,介绍浙江省实验动物依法行政的主要做法,提出在新形势下我省实验动物行政许可存在的主要问题,并提出解决这些问题的对策。
  
综述
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  微波对实验动物生殖功能的影响

  耿德军, 吕朝辉, 李西平

  实验动物与比较医学. 2016, 36(3): 231-236. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2016.03.015

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  人们的生活越来越离不开电子产品,尤其是手机、Wi-Fi等。由此产生的微波辐射对人体是否有害备受争议。本文通过回顾近年来国内外发表的微波对实验动物生殖功能影响的文献,期望解答人们的一些疑惑。大多数研究结果表明,微波对雌性动物的卵巢、妊娠、胚胎或内分泌等有害,对雄性动物的睾丸形态、精子参数、凋亡等有负面作用。其危害是通过诱发氧化应激实现的。但少数研究结果却未见异常。因此,有待进一步实验予以证实。
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  实验动物行为与环境质量研究进展

  田立立, 魏晓锋, 高诚

  实验动物与比较医学. 2016, 36(3): 237-242. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2016.03.016

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  实验动物行为是其针对某种刺激的反应或因与其所在的环境相互作用形成的生活方式,包括本能行为和学习行为。这里的环境指动物直接生活的场所,包括实验动物设施和饲养笼盒。本文主要综述环境条件对实验动物的生活和行为造成的影响,并结合实验动物相关标准,探索动物生存环境的适宜条件和合理水平,为提高动物福利提供依据。