夏敏杰, 成倩倩, 王玉柱, 田芳, 温成丽, 王晓东, 李卫华, 丁训诚
目的 采用uPA基因缺失(uPA-/-)小鼠构建肝纤维化动物模型,经α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)与金属基质蛋白酶-13(MMP13)的表达分析,评价其可行性。方法 选取成年雄性BL/6J野生型和uPA-/-基因缺失型小鼠, 分为4组: 对照组(Con-WT, Con-uPA-/-)和模型组(Mod-WT, Mod-uPA-/-),每组20只。模型组小鼠腹腔注射10% CCl4, 对照组小鼠腹腔注射橄榄油, 每周2次, 连续6周, 诱导小鼠肝纤维化。用Real-time PCR方法检测小鼠肝脏组织中α-SMA和MMP13的mRNA表达, Western blot及免疫组化分析α-SMA和MMP13的蛋白表达。结果 Real-time PCR结果显示, uPA-/-小鼠的肝脏中α-SMA、MMP13的mRNA表达量显著高于WT小鼠; Western blot结果显示, α-SMA蛋白和MMP13蛋白在对照组小鼠肝脏中几乎不表达, 在Mod-WT中有少量表达,在Mod-uPA-/-中表达明显增多; 免疫组化结果显示, Mod- uPA-/-的α-SMA和MMP13表达高于Mod-WT。结论 α-SMA的mRNA和蛋白表达在uPA-/-小鼠中均明显升高, uPA基因的缺失促进了肝星型细胞向肌成纤维细胞的转化,从而加速了细胞外基质蛋白在肝脏中的沉积; MMP13蛋白表达在肝纤维化模型小鼠中均有明显升高。uPA基因缺失(uPA-/-)小鼠是建立肝纤维化模型的易感品系。