2012年, 第32卷, 第2期　
刊出日期：2012-04-25

  

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第11届中南地区实验动物科技交流会优秀论文选刊
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  实验棉铃虫携带微生物的检测

  安学芳, 肖宇宙, 夏克详, 张帆, 朱幼玲

  实验动物与比较医学. 2012, 32(2): 89-93. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2012.02.001

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  目的 通过对本所长期室内人工饲育的不同季节不同龄期的棉铃虫(Heliothis armigera)进行体内外的微生物分离培养和鉴定,掌握棉铃虫体内外微生物携带情况。方法 利用普通培养基和真菌培养基分别对棉铃虫体内外进行微生物分离培养、纯化,通过菌落形态观察、革兰氏染色和显微镜观察进行初步鉴定,然后应用16SrRNA和18SrDNA分析技术对分离的细菌和真菌进行进一步的鉴定。同时,利用PCR技术对棉铃虫的高度致病病毒-核型多角体病毒(HaNPV)进行扩增检测。结果 分离培养得到4株芽孢杆菌(Bacillus): 分别为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis Cohn),地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)和芽孢杆菌(Bacillus)。4株真菌(fungi): 其中2株为酵母菌(Yeasts),1株为青霉菌(Aenicil lium Link),1株为曲霉菌(Aspergillus Micheli)。检测核型多角体病毒(HaNPV)为阴性。结论 室内人工饲养的棉铃虫生长状态良好,虫体健康,未携带致病微生物,为科研提供的实验昆虫质量稳定可靠。
  
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  正清风痛宁注射液安全性研究

  陈子渊, 李子珊, 田洪

  实验动物与比较医学. 2012, 32(2): 94-97. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2012.02.002

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  目的 为了考察正清风痛宁注射液的安全性和评价质量标准中安全性项目设置的合理性。方法 采用豚鼠用药的过敏试验、被动皮肤过敏试验、用猫进行降压物质检查及用兔进行肌肉刺激试验。结果 在12.5 mg/ml浓度下豚鼠无全身性过敏反应和被动皮肤过敏反应; 猫最大无降压浓度为0.125 mg/ml; 对家兔肌肉刺激反应小于2级。结论 本品各安全性项目检查符合规定,现行质量标准安全性项目设置基本合理。
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  复方苦瓜胶囊降血糖活性的初步观察

  黄超培, 马宇燕, 姚思宇, 覃辉艳, 赵鹏, 杨俊峰

  实验动物与比较医学. 2012, 32(2): 98-100. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2012.02.003

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  目的 观察复方苦瓜胶囊的降血糖作用。方法 给小鼠注射四氧嘧啶建立高血糖动物模型,然后随机分成3个实验组(225 mg/kg、450 mg/kg、900 mg/kg)和1个模型对照组,连续灌胃受试物30 d后比较实验组和对照组的空腹血糖、血糖下降百分率及糖耐量值,同时用正常小鼠进行降低空腹血糖实验。结果 高血糖模型小鼠的复方苦瓜胶囊900 mg/kg和450 mg/kg剂量组的空腹血糖明显低于模型对照组(P<0.01),血糖下降百分率明显大于模型对照组(P<0.01),高血糖模型小鼠的糖耐量值和正常小鼠的空腹血糖未见受到明显影响。结论 复方苦瓜胶囊具有降低小鼠空腹血糖的作用,而对糖耐量和正常小鼠的空腹血糖无明显影响。
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  复方降糖颗粒降血糖和滋阴补气作用的实验观察

  徐琳本, 肖梅英, 周娉, 杨瑛

  实验动物与比较医学. 2012, 32(2): 101-104. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2012.02.004

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  目的 观察复方降糖颗粒的降血糖作用和滋阴补气作用。方法 通过对正常动物和葡萄糖、四氧嘧啶、肾上腺素高血糖动物模型以及阴虚模型、气虚模型的实验。结果 1、对正常小鼠血糖没有明显降低作用,能明显改善小鼠糖耐量。2、对四氧嘧啶糖尿病大鼠具有明显的降血糖作用。3、对肾上腺素性高血糖小鼠具有明显的降血糖作用。4、能明显提高甲亢阴虚型小鼠的耐缺氧存活能力,具有明显的滋阴作用。5、能改善气虚模型大鼠血液流变学的作用。结论 复方降糖颗粒对糖尿病模型大、小鼠有一定的降血糖和滋阴补气作用。
论著
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  西藏小型猪骨髓间充质干细胞分离培养及慢病毒载体介导EGFP标记间充质干细胞

  唐华, 毕文浩, 艾威, 李德胜, 潘光辉, 史俊文, 刘薇, 黄威, 肖东, 顾为望

  实验动物与比较医学. 2012, 32(2): 105-110. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2012.02.005

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  目的 建立一种简便、有效的西藏小型猪骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外分离培养及纯化方法,并基于BMSCs建立慢病毒介导的外源基因EGFP体外投递系统。方法 密度梯度离心法分离西藏小型猪BMSCs,差速贴壁法不断纯化,流式细胞仪检测第3代BMSCs CD45、CD90和CD105表达; 此外,用携带EGFP基因的慢病毒转染BMSCs以获得EGFP标记的BMSCs,倒置荧光显微镜下观察感染情况及流式细胞术检测感染效率。结果 ① 密度梯度分离法结合差速贴壁法所获得的细胞经鉴定符合MSCs的特性。② 借助慢病毒高效率将EGFP导入BMSCs,感染效率为84.1%。结论 利用密度梯度分离法结合差速贴壁法可获得高纯度的BMSCs,基于BMSCs建立了慢病毒介导的外源基因体外投递系统。
  
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  pcDNA3.1/myc-His-DJ-1^M26I真核表达载体构建及其在NIH3T3细胞中表达

  张梅英, 王惟, 徐影琪, 赵越, 杨葳, 于萌, 郭晓冲, 秦英, 郑志红

  实验动物与比较医学. 2012, 32(2): 111-115. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2012.02.006

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  目的 构建pcDNA3.1/myc-his-DJ-1和pcDNA3.1/myc-his-DJ-1^M26I重组表达载体,为进一步研究DJ-1^M26I基因的功能及建立转基因动物模型奠定基础。方法 采用突变试剂盒将第26位氨基酸进行突变,分别构建pcDNA3.1/myc-his-DJ-1和pcDNA3.1/myc-his-DJ-1^M26I重组表达载体,采用脂质体转染的方法分别将pcDNA3.1/myc-his-DJ-1和pcDNA3.1/myc-his-DJ-1^M26I质粒转染NIH3T3细胞并用G418压力筛选稳定克隆,对获得的2种转染细胞在DNA水平、转录水平和蛋白质水平鉴定。结果 pcDNA3.1/myc-his-DJ-1和pcDNA3.1/myc-his-DJ-1^M26I质粒转染NIH3T3细胞经G418筛选后,经PCR检测分别获得1个和3个阳性细胞克隆,RT-PCR及western blot方法进行DJ-1-His基因表达检测,结果均证明外源插入基因的表达,MTT实验结果初步证明转染DJ-1^M26I基因的NIH3T3阳性细胞组增殖速率低于正常NIH3T3细胞组(P<0.05)。结论 成功构建pcDNA3.1/myc-his-DJ-1和pcDNA3.1/myc-his-DJ-1^M26I重组表达质载体。
  
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  DNA片段大小对制备转基因小鼠整合效率的影响

  池骏, 匡颖, 石吉晶, 龚慧, 毛积芳, 费俭, 王铸钢

  实验动物与比较医学. 2012, 32(2): 116-119. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2012.02.007

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  目的 通过对大量显微注射实践工作中相关数据的分析,寻求DNA片段长度与制备转基因小鼠整合效率的相关性的规律。方法 随机抽样29个制备转基因的项目的资料进行相关性分析。结果 制备转基因小鼠的整合效率随着DNA片段长度增加而降低。根据回归方程,如果片段长度能控制在6 000 bp以内基本上可以维持10%左右的整合阳性率(P<0.001)。结论 制备转基因小鼠的DNA片段长度与整合效率之间存在负相关。
  
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  血必净对内毒素致多脏器功能障碍综合征的防治作用

  史智勇, 罗晓红, 万东君, 陆璐, 王红义, 牛廷献

  实验动物与比较医学. 2012, 32(2): 120-124. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2012.02.008

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  目的 探讨血必净对内毒素(LPS)致多脏器功能障碍综合征(MODS)的防治作用。方法 将40只绵羊随机分为对照组(A组)、模型组(B组)、预防组(C组)和治疗组(D组),每组10只。动物全麻后,以6 μg/kg LPS于30 min内静脉泵入建立MODS模型。C组在静脉泵入LPS前1 h、D组在泵入LPS后1 h, 以2 ml/kg血必净(XUEBIJING)注射液静脉滴注, D组1次/d, 连续3 d。同时, A组静脉泵入同剂量的生理盐水。以不同时点测定各组的血气、血常规、血清生化指标的改变。结果 LPS静脉泵入后,C和D组绵羊体征表现较B组有所减轻; A、B、C和D组绵羊的死亡率分别为0%、60%、40%和50%; B、C和D三组3 h内氧合指数与0 h和A组相比明显降低(P<0.05或P<0.01),但组间相比均无统计学意义(P>0.05); 不同时点,B、C和D三组天门冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)和肌酐(CRE)的含量与0 h和A组相比明显升高(P<0.05或P<0.01); 而WBC数目3 ~6 h则明显下降(P<0.01),12 h时开始上升,24 h后骤然升高(P<0.01)。结论 血必净能改善LPS诱导的动物体征表现、降低死亡率,对肺脏、肝脏和肾脏等多脏器损伤具有一定的干预作用。
  
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  WHBE兔与日本大耳白兔不同生长阶段肠道免疫功能的比较研究

  王志远, 刘月环, 余陈欢, 应华忠, 蔡月琴, 张利棕

  实验动物与比较医学. 2012, 32(2): 125-128. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2012.02.009

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  目的 比较WHBE兔与日本大耳白(JW)兔不同生长阶段肠道免疫功能的差异。方法 分别选取离乳和2月龄WHBE兔、日本大耳白兔各8只,采用ELISA法,分别测定其血清及小肠匀浆液中分泌型IgA(SIgA)、P物质(SP)、IL-4、IFN-γ、生长抑素(SS)和血管活性肠肽(VIP)的含量水平。结果 成年WHBE兔血清及小肠组织sIgA分泌水平、SS、SP含量较离乳WHBE兔明显降低,IFN-γ/IL-4比值明显升高,特别是与成年JW兔在小肠组织IgA分泌水平,SS、 IFN-γ和IL-4含量方面具有显著性差异。结论 WHBE兔的肠道免疫功能明显低于JW兔,可作为肠易激综合症研究的实验动物。
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  几种高血脂症动物模型的比较

  沈龙海, 安泳潼, 张瑱, 严永高

  实验动物与比较医学. 2012, 32(2): 129-132. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2012.02.010

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  目的 对本实验室在降血脂药物研究中应用的各种高血脂动物模型进行归纳比较, 以便根据不同的实验目的选择适合的动物模型。方法 实验动物模型有大鼠、小鼠、鹌鹑, 用于造模的高脂饲料和脂肪乳剂的配方也各有差别, 实验周期不尽相同。结果 通过血液生化指标检测发现,大、小鼠高血脂模型更适用于降高胆固醇和降低密度脂蛋白的药物的筛选研究; 鹌鹑高血脂模型形成较快较明显, 比较适合降血脂药物的初筛, 但数据差异较大; 高脂饲料和脂肪乳剂用于高血脂造模各有优缺点。结论 不同造模动物、不同造模方法各有其特点, 可根据实验目的进行选用。
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  薏苡仁油注射液对人体肝癌SMMC-7721裸鼠异种移植模型的抑制作用

  尹蓓珮, 陆宏祺, 沈龙海, 李炳生

  实验动物与比较医学. 2012, 32(2): 133-136. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2012.02.011

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  目的 研究薏苡仁油注射液对裸鼠移植性人体肝癌SMMC-7721的抑制作用。方法 建立人体肝癌SMMC-7721裸鼠异种移植模型, 通过尾静脉注射不同剂量的薏苡仁油注射液, 观察和测量肿瘤大小及荷瘤鼠体重, 计算相对肿瘤增殖率及肿瘤抑制率, 并对裸鼠肿瘤组织和主要脏器的石蜡切片分别进行Ki-67指标的免疫组化染色和HE染色。结果 25 ml/kg、12.5 ml/kg及6.25 ml/kg的薏苡仁油注射液对移植于裸鼠的人体肝癌SMMC-7721的相对肿瘤增殖率分别为33.02%、35.78%和39.41%,抑瘤率为49.54%、46.86%、41.71%。给药组裸鼠肿瘤组织的Ki-67阳性率明显低于对照组,主要脏器的HE染色未见异常。结论 薏苡仁油注射液三个剂量组对移植于裸鼠的人体肝癌SMMC-7721模型都有一定的抑制作用,在体内均具有良好的抗肿瘤活性和安全性。
  
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  小型猪腹壁拉链模型的建立及其在外科教学中的应用研究

  汤球, 刘志学, 余琛琳, 崔淑芳

  实验动物与比较医学. 2012, 32(2): 137-141. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2012.02.012

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  目的 建立小型猪腹壁拉链模型,并在教学实践中开展应用性试验,研究小型猪在教学中的应用情况,并收集相关的研究数据,为小型猪腹壁拉链模型后期推广应用奠定基础。方法 选用健康、幼龄小型猪20只,分为两组,10只为常规手术组作对照,10只用于建立小型猪腹壁拉链模型。以小型猪为实验对象实施外科教学项目—肠吻合术和肠瘘管手术以及术后手术部位恢复情况动态观察实验。记录实验的耗时、麻醉药用量、小型猪的精神状况、饮食情况以及手术后的恢复情况。结果 小型猪腹壁拉链模型成熟、稳定,在外科教学中具有较强实用性。在肠吻合手术中实验中,小型猪腹壁拉链模型组的实验耗时,麻药使用量,以及动物的精神状况等均明显优于常规手术组,此外,模型自身的结构特点还可以方便实验人员手术后的动态观察。结论 本研究成功的建立了小型猪腹壁拉链模型,该模型外科教学实验中的应用情况较好,为今后相关科研工作的顺利开展提供了一种全新的动物模型。
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  一种以小鼠精子为主导的综合性保种体系

  李敦高, 蒋满喜, 陈学进, 李和平

  实验动物与比较医学. 2012, 32(2): 142-145. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2012.02.013

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  目的 利用活体保种、精子冷冻技术及辅助生殖技术建立一套安全的综合性保种体系。方法 以单侧睾丸摘除方法获得ICR、BDF1、C57BL/6J和GFP四种小鼠的附睾精子进行冷冻保存实验,术后恢复的公鼠继续用于自然繁育。如果无法自然繁育,则将冻融精子用于体外受精(IVF)。如果冻融精子仍无法受精获得后代, 则需要借助卵胞质内单精子注射技术(ICSI)进行胚胎构建, 胚胎移植, 直至获得后代。结果 单侧睾摘除的BDF1、C57BL/6J的公鼠可以继续繁育; 不育的ICR和GFP小鼠的冻融精子IVF后, 只有ICR小鼠可以得到正常的胚胎和子鼠; 而以C57BL/6J为遗传背景的GFP小鼠,其冻融精子只有采用ICSI技术,才可以得到子代。结论 精子冻融小鼠的遗传背景是影响IVF成功与否的关键性因素,同时还建立了一种以小鼠精子为主导的综合性保种体系,既可以达到品系保存的目的,同时又可以最大限度地利用小鼠品系。
  
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  益骨汤含药血清对新生大鼠成骨细胞增殖及分泌IL-6的影响

  陈芳, 朱以良, 杨李, 唐瑛

  实验动物与比较医学. 2012, 32(2): 146-148. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2012.02.014

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  目的 探讨益骨汤含药血清对新生大鼠成骨细胞增殖及分泌IL-6的影响。方法 采用酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞,然后以益骨汤含药血清作用于成骨细胞,用MTT法检测成骨细胞增殖,ELISA法测定培养上清中IL-6的含量。结果 益骨汤各剂量组 (A、B、C组)能促进成骨细胞的增殖,能使其分泌IL-6的能力下降,与空白对照组(E组)比较有显著性差异(P <0.05)。结论 益骨汤含药血清能够促进成骨细胞的增殖,同时抑制成骨细胞分泌IL-6。
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  上海地区实验大小鼠肺支原体感染情况调查

  冯洁, 谢建云, 丁聪, 王杰, 胡建华

  实验动物与比较医学. 2012, 32(2): 149-151. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2012.02.015

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  目的 了解上海地区清洁级和SPF级实验大、小鼠肺支原体(Mp)的感染情况。方法 采集动物血清、气管中段, 分别利用分离培养法、PCR法和ELISA法进行Mp检测。结果 仅SPF级实验大鼠培养法呈阴性,其它级别大、小鼠三种方法检测结果皆有阳性。培养法检测实验小鼠和大鼠阳性率分别为2.9%和20%,PCR法的阳性率分别为21.4%和27.2%, ELISA法的阳性率分别为6.0%和21.5%。结论 上海地区清洁级和SPF级大鼠和小鼠中存在着不同程度的肺支原体感染。
  
讲座
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  化学品鱼类急性毒性的决策树及替代试验

  程树军, 史光华

  实验动物与比较医学. 2012, 32(2): 152-155. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2012.02.016

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  化学品大量使用给人类健康和生态环境带来危害, 鱼类急性毒性试验是生态环境评价的基本方法。为适应3R原则和动物福利要求, 有必要建立化学品急性毒性的决策树判定程序, 运用细胞、组织和胚胎体外培养模型及数学模型, 或者应用多种体外系统的组合试验策略进行风险决策。体外方法是传统动物试验的有益补充和代替, 可用于化学品生态毒性筛查、评估和作用机制的研究。
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  “用于科学目的的动物保护欧共体条例(2010/63/EU)”对我们的启示

  贺争鸣, 李根平

  实验动物与比较医学. 2012, 32(2): 156-158. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2012.02.017

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国外动态
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  对涉及鱼类科学程序严重程度划分的指导原则

  P Hawkins召集人, N Dennison, G Goodman, S Hetherington, S Llywelyn-Jones, K Ryder, A J Smith

  实验动物与比较医学. 2012, 32(2): 159-164. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2012.02.018

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  对动物使用程序的严重程度分类是一个重要的工具,可帮助关注优化的执行并有助于报告3Rs原则(替代,减少和优化)的执行。最近修订的关于在欧盟管理动物研究和测试的指令规定欧盟成员国要按照欧盟委员会(EC)确立的标准确保所有的程序都归类为“不可恢复”、“轻度”、“中度”或“重度”。不过这些都偏重于陆生物种,与鱼类的相关性有限。挪威3R原则共识平台(Norecopa)组建了一个工作组,该工作组制定了涉及鱼类的科学程序的严重程度分类,包括“阈下”、“轻度”、“中度”、“重度”和“上阈限”的案例。该规定的目的是补充欧共体的指导原则,帮助确保鱼类痛苦能够得到有效预测并最小化。Norecopa已建立了一个网站(www.norecopa.no/categories),将提供更多有关使用鱼程序的严重程度分类的信息,包括田间研究。
综述
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  肠易激综合征动物模型的复制与评价

  刘艳霞, 赵莹, 刘蕾, 刘俊康

  实验动物与比较医学. 2012, 32(2): 165-169. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2012.02.019

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  本文对近年来常用的肠易激综合征动物模型复制方法与评价指标进行综述。动物模型复制方法中,相对温和的应激刺激与外周致敏法同时使用是相对较好的选择,既可提高造模的成功率,又兼顾到动物福利。动物模型的评价指标中,排便次数与性状是最直观、最经济的检测评价指标,但专属性较差。肠道敏感性是相对最具专属性的指标,应用较多,其敏感性取决于压力检测方法的敏感性,亦与临床研究存在相关性。
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  5-LO/FLAP与冠心病相关性的研究进展

  刘志华, 陈民利

  实验动物与比较医学. 2012, 32(2): 170-174. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2012.02.020

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  冠心病(CAD)是当今世界上严重威胁人类健康的心血管疾病之一。CAD的发病机制复杂,其中CAD是一种慢性炎症反应的观点已为广大学者所认同。白三烯(LTs)是重要的炎症介质,具有强烈的促炎作用。5-脂氧合酶(5-LO)是催化花生四烯酸(AA)生成LTs的关键酶,5-脂氧酶激活蛋白(FLAP)是5-LO氧化生成LTs过程中所必需的蛋白质。近年研究发现, 5-LO/FLAP级联, 在CAD的发病中具有重要作用。本文结合国内外文献,对5-LO/FLAP与冠心病的相关性研究做一综述。