实验动物与比较医学 ›› 2012, Vol. 32 ›› Issue (2): 111-115.DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2012.02.006
张梅英1, 王惟1, 徐影琪1, 赵越1, 杨葳1, 于萌1, 郭晓冲1, 秦英1, 郑志红1,2
ZHANG Mei-ying1, XU Ying-qi1, WANG Wei1, ZHAO Yue1, YANG Wei1, YU Meng1, GUO Xiao-chong1, QIN Ying1, ZHENG Zhi-hong1,2
摘要: 目的 构建pcDNA3.1/myc-his-DJ-1和pcDNA3.1/myc-his-DJ-1M26I重组表达载体,为进一步研究DJ-1M26I基因的功能及建立转基因动物模型奠定基础。方法 采用突变试剂盒将第26位氨基酸进行突变,分别构建pcDNA3.1/myc-his-DJ-1和pcDNA3.1/myc-his-DJ-1M26I重组表达载体,采用脂质体转染的方法分别将pcDNA3.1/myc-his-DJ-1和pcDNA3.1/myc-his-DJ-1M26I质粒转染NIH3T3细胞并用G418压力筛选稳定克隆,对获得的2种转染细胞在DNA水平、转录水平和蛋白质水平鉴定。结果 pcDNA3.1/myc-his-DJ-1和pcDNA3.1/myc-his-DJ-1M26I质粒转染NIH3T3细胞经G418筛选后,经PCR检测分别获得1个和3个阳性细胞克隆,RT-PCR及western blot方法进行DJ-1-His基因表达检测,结果均证明外源插入基因的表达,MTT实验结果初步证明转染DJ-1M26I基因的NIH3T3阳性细胞组增殖速率低于正常NIH3T3细胞组(P<0.05)。结论 成功构建pcDNA3.1/myc-his-DJ-1和pcDNA3.1/myc-his-DJ-1M26I重组表达质载体。
中图分类号: