2014年, 第34卷, 第2期　
刊出日期：2014-04-25

  

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论著
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  人源性前列腺癌动物模型的初步建立

  张振华, 沈增丽, 侯传玲, 宋春娇, 孙爱静

  实验动物与比较医学. 2014, 34(2): 83-88. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2014.02.001

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  目的 建立中国人同一起源肿瘤不同恶性潜能前列腺癌动物模型,为研究前列腺癌转移进展机制及激素抵抗的发生机制提供理想的动物模型。方法 采用组织块外科原位移植法将人前列腺癌组织分别移植到虚拟去势组及去势组雄性裸小鼠前列腺部,成瘤后进行鼠间传代移植,选取虚拟去势组原位移植瘤、移植淋巴结转移瘤、去势组第4代淋巴结转移瘤体外培养建立细胞系,应用Boyden Chamber细胞运动实验检测细胞迁徙转移能力,描绘细胞生长曲线分析细胞增殖及激素依赖性,裸小鼠皮下异种移植瘤模型检测成瘤率、肿瘤湿重及浸润范围验证不同代移植瘤细胞在裸小鼠异种移植的生长状态。结果 第1代虚拟去势组成瘤率30%,无淋巴结转移,取移植瘤反复原位传代移植第3代成瘤率50%,盆腔淋巴结转移率40%。去势组原代移植以及来自虚拟去势组的原位移植瘤反复原位移植均未见移植瘤,源自虚拟去势组淋巴结转移瘤组织反复原位传代移植至第4代,成瘤率33%,其中一只可见盆腔淋巴结转移。三种细胞系细胞生长、迁徙以及体外裸小鼠成瘤率均有显著差别(P<0.05)。结论 裸小鼠前列腺癌原位移植反复传代可增强肿瘤成瘤率、转移力等恶性指标。以裸小鼠淋巴结转移瘤接种去势裸小鼠可筛选出激素非依赖性异种移植瘤及转移瘤。
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  养形与养神不同运动训练对SHR/SP大鼠血管性痴呆模型认知能力及血压的影响

  曾贵刚, 张申, 李峻, 彭海东, 姜虹旭, 魏品康

  实验动物与比较医学. 2014, 34(2): 89-92. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2014.02.002

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  目的 观察养形与养神不同运动训练对自发性高血压脑卒中倾向大鼠(SHR/SP)血管性痴呆模型认知能力及血压的影响。方法 选用雄性SHR/SP大鼠采用双侧颈总动脉永久性结扎(2-VO) 法制作血管性痴呆(VD)模型,然后随机分为4组,分别为模型组,养形组,养神组和形神共养组,每组各10只,养形组采用跑台训练,养神组采用丰富环境饲养,形神共养组采用跑台训练结合丰富环境干预,模型组造模后正常环境饲养不做干预。8周后采用Morris水迷宫检测大鼠认知功能,同时尾套法检测血压干预前后的变化。结果 在定位航行训练中,形神共养组大鼠的潜伏期明显少于其他各组,养形组和养神组大鼠的潜伏期明显短于模型组,但养形组大鼠的潜伏期与养神组大鼠比无统计学差异(P>0.05); 在空间探索实验中,形神共养组大鼠跨越原平台次数、目标象限探索时间百分比均明显多于其他各组,养形组和养神组大鼠跨越原平台次数、目标象限探索时间百分比均明显多于模型组,但养形组大鼠与养神组大鼠比无统计学差异(P>0.05); 形神共养组大鼠的血压明显低于其他各组,养形组大鼠的血压明显低于模型组和养神组,养神组大鼠的血压较模型组有降低的趋势,但差异没有统计学意义(P>0.05)。结论 形神共养理论指导下的训练可有效改善SHR\SP大鼠VD模型认知能力,同时有效降低高血压危险因素在VD发病中的作用。
  
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  慢性束缚应激诱导自发性高血压大鼠出现抑郁焦虑样行为

  曹爽, 丁建伟, 李炳, 袁丽粉, 杜勤

  实验动物与比较医学. 2014, 34(2): 93-97. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2014.02.003

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  目的 探讨自发性高血压大鼠(SHR)在慢性束缚应激(Chronic Restraint Stress, CRS)时抑郁焦虑样行为学改变。方法 雄性SHR大鼠16只,随机分为对照组(CON, n=8)和慢性束缚应激组(CRS, n=8)。通过旷场试验(Open Field test, OFT)、强迫游泳实验(Forced Swimming test, FST)、高架十字迷宫试验(Elevated Plus Maze, EPM)评价其抑郁焦虑样行为,同时比较SHR血压变化及血清ACTH水平。结果 束缚4周后,与对照组相比,CRS组的SHR在OFT中直立次数及总位移均显著降低(P<0.05),FST中不动时间显著延长(P<0.05),EPM中开臂滞留时间百分比显著下降(P<0.05)。结论 慢性束缚应激可诱导SHR出现抑郁焦虑样行为。
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  复方甘草酸苷对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织NF-κB p65及COX-2表达的影响

  卢光新, 吕飞, 杜勇, 杨艳果, 周春芳, 金灵莉, 杨建业

  实验动物与比较医学. 2014, 34(2): 98-101. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2014.02.004

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  目的 观察复方甘草酸苷对溃疡性结肠炎大鼠核因子-κB p65(NF-κB p65)及环氧合酶 2(COX-2)的影响并探讨其作用机制。方法 成年SD大鼠40只, 随机分成4组, 即正常对照组、模型组、复方甘草酸苷治疗组及柳氮磺胺吡啶(SASP)治疗组。正常对照组不做任何处理,其余3组用2.5%三硝基苯磺酸钠/乙醇溶液灌肠制备溃疡性结肠炎模型,模型组用生理盐水灌肠3 d后处死,复方甘草酸苷治疗组每日用复方甘草酸苷溶液(40 mg/kg⁾连续灌肠7 d后处死; SASP治疗组每日用SASP溶液(0.5 g/kg)连续灌肠7 d后处死。经不同处理和治疗后,运用免疫组化染色(SABC法)检测NF-κB p65 及 COX-2表达。结果 与正常对照组相比,模型组、复方甘草酸苷治疗组及SASP治疗组的NF-κB p65表达水平明显上升(P<0.01); COX-2的表达水平亦明显上升(P<0.01);与模型组相比,复方甘草酸苷组及SASP治疗组的NF-κB p65、COX-2的表达水平均明显下降(P<0.01)。结论 复方甘草酸苷对大鼠溃疡性结肠炎有良好的治疗作用,其作用机制可能与降低大鼠结肠组织中NF-κB p65 及 COX-2的表达有关。
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  ZDF(fa/fa)大鼠的糖脂代谢特点与胰岛素抵抗特性

  奚赛飞, 斯徐伟, 朱科燕, 陈小真, 杨涛涛, 陈民利

  实验动物与比较医学. 2014, 34(2): 102-106. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2014.02.005

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  目的 观察ZDF(fa/fa)大鼠高脂饲喂后的糖脂代谢特点和胰岛素抵抗特性。方法 取ZDF(fa/fa)大鼠6只(ZDF模型组), 每日饲喂高脂饲料, 另取ZDF(fa/+)大鼠6只(ZDF对照组), 饲喂普通饲料, 连续饲喂6周; 每周称重, 隔周检测GLU、TG、CHOL、TC、HDL-C、LDL-C, 计算TC/HDL-C和AI,于第6周检测空腹胰岛素,并进行糖耐量与胰岛素耐量试验,计算HOMA-IR和HOMA-β。结果 ZDF(fa/fa)大鼠高脂饲喂后空腹血糖、血脂水平迅速升高(P<0.01),TC/HDL-C和AI显著升高(P<0.01),饲喂第4周后趋于稳定; 第6周的空腹胰岛素和HOMA-IR显著升高(P<0.01),而HOMA-β则显著降低(P<0.01)。结论 ZDF(fa/fa)大鼠饲喂高脂饲料后出现高血糖伴高脂血症、糖耐量异常和高胰岛素血症,同时出现胰岛素耐量增加和胰岛素敏感性降低,较适合于胰岛素抵抗引起的2型糖尿病和代谢综合症的研究。
  
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  热休克蛋白70在兔非酒精性脂肪肝纤维化过程中的作用

  邓丽丽, 臧家娜, 应华忠, 余陈欢, 俞冰

  实验动物与比较医学. 2014, 34(2): 107-112. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2014.02.006

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  目的 探讨热休克蛋白70(HPS70)在兔非酒精性脂肪肝(NAFLD)纤维化形成过程中的作用。方法 40 只雄性日本大耳兔随机分为正常对照组和NAFLD模型组,其中对照组取8周为时相点,模型组取4周、6周、8周3个时相点,每个时相点各10只。模型组分别皮下注射花生油4周、6周、8周,2 次/周,每次1.2 ml/kg,建立日本大耳兔NAFLD模型。按时间点处死各组动物,测定兔血清中ALT、AST、TC、TG、FFA、空腹血糖(FBG)、HSP47、HSP70、HA、PCⅢ、CⅣ、LN的含量和空腹胰岛素(FINS)的水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR); MASSON染色观察肝组织病理形态改变; 免疫组化观察HSP47和HSP70的表达情况。结果 与对照组相比,模型组肝功能、脂质代谢和肝纤维化相关指标水平升高,造模4周时出现肝功能损伤,脂质代谢紊乱、胰岛素抵抗,随着NAFLD肝纤维化进程的发展,HSP70表达量逐渐增加。结论 HSP70的表达与NAFLD肝纤维化程度呈正相关,可能与NAFLD肝纤维化发生发展密切相关。
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  一种新型长效重组绒毛膜促性腺激素的表达、活性和药代动力学研究

  黄虎, 杨凡, 吴茂柏, 张玉杰, 钟翎, 侯永敏

  实验动物与比较医学. 2014, 34(2): 113-119. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2014.02.007

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  目的 构建含有Fc片段的绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin, hCG)新型长效重组hCG-Fc融合蛋白,可显著延长其在血液中的半衰期,有利于提高患者用药依从性。方法 首次将Fc DNA片段有序连接到hCG基因3'端,构建hCG-Fc表达载体并将其稳定表达在哺乳动物细胞,通过无血清悬浮细胞培养和基于亲和层析的蛋白纯化,制备了新型重组hCG-Fc融合蛋白。检测其分子量、ELISA免疫活性和体内生物活性,并测定其在大鼠体内血循环半衰期。结果 重组融合蛋白分子量与理论推断值相当,ELISA活性为2 965 IU/mg,体内生物活性为2 288 IU/mg,消除半衰期为174 h。结论 hCG-Fc融合蛋白构建表达成功,且具有显著的体内外活性,药代动力学分析显示hCG-Fc重组融合蛋白半衰期是重组hCG的近6倍。这种新型长效融合蛋白在临床上可大大减少注射次数,提高患者用药依从性,具有显著的社会和经济效益。
  
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  氟浓度对体外培养大鼠软骨细胞糖胺多糖和II型胶原分泌的影响

  范玉兰, 王宁, 施志冲, 郑卫东, 卢伟, 肖萍

  实验动物与比较医学. 2014, 34(2): 120-125. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2014.02.008

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  目的 探讨氟浓度对体外培养软骨细胞糖胺多糖(GAG)和II型胶原分泌的影响。方法 取2月龄雌性SD大鼠下肢髋关节及膝关节软骨,分离、培养出软骨细胞后,接种于细胞培养瓶,经鉴定后, 分为空白对照组和NaF受试组(6.25 μmol/ml、12.50 μmol/ml、25.00 μmol/ml、50.00 μmol/ml和100.00 μmol/ml),孵育6 d后,分别进行GAG含量测定、阿利新蓝染色和II型胶原免疫组化染色。结果 NaF受试6 d后,大鼠软骨细胞培养液GAG含量各组无显著性差异(P>0.05); 阿利新蓝染色显示, 大鼠软骨细胞内的糖原异染颗粒亦无明显差异; II型胶原免疫组化染色则显示,不同剂量NaF可引起对软骨细胞外II型胶原染色积分随剂量的升高逐渐上升(P<0.05)。结论 NaF对大鼠软骨细胞GAG分泌可能无影响,但可能影响Ⅱ型胶原的分泌。
  
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  血脂对大鼠离体动脉环张力的影响

  张怡, 詹维伟, 吴永杰, 周吴刚, 陈栋睿, 蒋为民, 郑琳

  实验动物与比较医学. 2014, 34(2): 126-130. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2014.02.009

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  目的 观察高脂血症大鼠及动脉粥样硬化大鼠腹主动脉环张力的变化。方法 SD大鼠随机分为4组(T1组,n=10,高胆固醇喂养4周; T2组, n=10,高胆固醇喂养12周; C1组,n=10,正常饮食4周; C2组,n=10,正常饮食12周),各组动物均测定血清血脂浓度及腹主动脉环对苯肾上腺素, 高钾溶液及乙酰胆碱的反应, 并均行病理切片, 再光镜检查以评估主动脉粥样硬化的程度。结果 T1组的最大收缩张力值及最大舒张百分比显著低于C1组(P<0.01; P=0.001)。T2组的最大收缩张力值显著高于C2组(P<0.05),最大舒张百分比显著低于C2组(P<0.001)。T2组的最大收缩张力值显著高于T1(P<0.05)。相关性分析结果显示: 最大收缩张力值与甘油三酯呈显著正相关(r=0.435, P<0.05)。最大舒张百分比与收缩压、总胆固醇及低密度脂蛋白呈显著负相关(r=-0.318, P=0.046; r=-0.449, P=0.004; r=-0.411, P=0.008), 与高密度脂蛋白呈显著正相关(r=0.324,P=0.041)。结论 高脂饮食使大鼠主动脉早期收缩与舒张能力均降低,动脉环最大舒张百分比随着总胆固醇及低密度脂蛋白水平的增高而减小。
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  猕猴微卫星标记的遗传分析

  杨娜, 刘晓帅, 周亮, 曾代文

  实验动物与比较医学. 2014, 34(2): 131-135. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2014.02.010

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  目的 人工繁育猕猴所面临的最大问题是繁殖群体过小所导致的近亲交配, 为了防止近亲交配带来的不利影响,采用微卫星分子标记建立猕猴人工繁殖种群的准确系谱非常重要。方法 本研究采用荧光标记引物PCR和毛细管电泳分型的方法将筛选出的14个微卫星位点应用于64只猕猴人工繁育种群,并通过个体鉴别、亲子鉴定以及群体遗传结构分析的方法对其进行评价。结果 这些位点在猕猴中均属于高度多态位点,其中7个位点的期望杂合度(H_e)和多态信息含量(PIC)值均在0.8以上,14个位点的累计个体鉴别率(CPI)为1.21×10^-18,单亲已知时累积排除率(CPE2)和双亲未知时累积排除率(CPE1)可达0.9999和0.9985。结论 这些位点能够对猕猴种群进行准确的个体鉴别、亲子鉴定和群体遗传学参数计算,是可靠、高效的分子标记,或可应用于猕猴人工饲养种群的遗传学管理。
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  PCR技术在小鼠CAR杆菌检测中的初步应用

  冯育芳, 邢进, 岳秉飞

  实验动物与比较医学. 2014, 34(2): 136-139. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2014.02.011

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  目的 建立有效的CAR杆菌(Cilia-associated respiratory bacillus)PCR检测方法,并进行初步应用。方法 针对NCBI公布的CAR杆菌序列,选取大小合适的序列,合成质粒,并设计特异性引物,对实际样品进行检测,扩增出的阳性片段进行测序,验证该方法的可靠性。结果 成功建立了CAR杆菌的PCR检测方法,初步应用验证了该方法的可靠性。结论 该方法的建立为实验动物CAR杆菌的检测奠定基础。
  
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  体外受精-胚胎移植技术在APP/PS1双转基因小鼠繁育中的应用

  吕相川, 张婀娜, 周生来, 王惟, 于洋, 郑志红

  实验动物与比较医学. 2014, 34(2): 140-144. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2014.02.012

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  目的 研究体外受精-胚胎移植(IVF-ET)技术在APP/PS1双转基因小鼠繁育中的应用。方法 分别应用自然交配与体外受精方法进行APP/PS1双转基因繁育,比较受精率及产仔数量; 腹腔注射PMSG-HCG超排雌性C57BL/6小鼠,分别与12周龄、24周龄、36周龄、52周龄、72周龄的成年雄性APP/PS1双转基因小鼠进行体外受精,将获得的2-细胞胚胎移植到假孕雌鼠的输卵管,通过PCR方法对仔代小鼠进行鉴定。结果 6只雄性转基因小鼠与18只野生型雌性小鼠自然方式交配,实验周期为21 d,获得胚胎的受精率为73.3%。应用体外受精的方法用1只雄性转基因小鼠的精子与18只雌性野生型小鼠的胚胎进行体外受精, 受精率达到95%, 实验周期为4 d。两种繁育方式产仔数量阳性小鼠数量有显著差异(P<0.05), 阳性率无显著性差异(P>0.05)。12周龄、24周龄、36周龄的APP/PS1转基因雄性小鼠的体外受精结果显示,三种不同周龄的雄性APP/PS1转基因小鼠受精率、产仔数量及阳性率均无显著性差异（P>0.05）。对应用常规繁育方法难以获得后代的老龄APP/PS1双转基因雄性小鼠(52周龄、72周龄)体外受精率分别为85.6%、84.1%,获得阳性后代18只和14只。结论 APP/PS1双转基因小鼠可以采用IVF-ET技术进行繁育,为APP/PS1双转基因小鼠快速扩大繁育提供一种新方式。
  
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  一种改良的小鼠附睾尾常温运输方法

  王美珊, 孔彭成, 朱燕, 朱莲, 陈学进, 李和平, 蒋满喜

  实验动物与比较医学. 2014, 34(2): 145-148. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2014.02.013

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  目的 探索常温条件下附睾尾运输的最佳条件,并消除培养液对常温运输可能存在的影响。方法 对附睾尾的运输方法进行了改良,同时比较了常温或4~8℃条件下,在20 μl或0 μl培养液M2中,运输后精子的活力、受精能力及其胚胎发育能力。结果 结果表明,常温运输不加培养液的条件下,运输的附睾尾精子活动率和活力,均优于20 μl培养液中运输的附睾尾,但是稍差于4~8℃条件下20 μl M2 培养液中运输的附睾尾。结论 无液体运输的方式更加适合于附睾尾的常温运输,同时该方法还可消除培养液对附睾精子可能存在的不良影响; 常温附睾尾的运输对于小鼠资源库或者研究机构间珍贵小鼠品系的运输具有重要的应用价值。
  
经验交流
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  不同品系小鼠骨密度数据库的初步建立

  赵丽亚, 赵莹, 邢正弘, 陈国强, 缪建成, 刘磊

  实验动物与比较医学. 2014, 34(2): 149-152. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2014.02.014

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  目的 采用FX Pro小动物活体成像系统,以活体小鼠股骨、椎骨为检测对象,收集11个品系、不同周龄小鼠的骨密度值构建数据库。方法 11个不同小鼠品系,分别选择4、8、12、16、48周龄,每个周龄每个品系雌雄各5只,采用10 g/L的戊巴比妥钠腹腔麻醉,动物麻醉后固定于特制的检测台上,其中股骨以左后肢为被检测对象,椎骨以尾椎为被检测对象,采用FX Pro小动物活体成像系统进行X-射线拍摄。结果 构建了11个品系小鼠的股骨密度、椎骨密度数据库。结论 不同品系的股骨、椎骨骨密度有差异,初步建立了不同品系小鼠骨密度数据库。
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  小鼠侧脑室埋管给药方法的优化

  赵勇, 张璐, 蔡丽萍, 徐晨

  实验动物与比较医学. 2014, 34(2): 153-155. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2014.02.015

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  目的 优化小鼠侧脑室埋管给药方法。方法 通过两种不同埋管方法比较其成功率,通过不同注射剂量组死亡率观察探索给药剂量范围。结果 实时纠偏埋管法成功率可达100%,侧脑室注射剂量为5~10 μl时死亡率较低。结论 实时纠偏埋管法成功率高于传统埋管法,侧脑室注射剂量建议范围为0~10 μl。
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  我校屏障环境动物实验室管理初探

  王志昇, 陈健茂, 李红兵, 冉林武, 杨文

  实验动物与比较医学. 2014, 34(2): 156-158. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2014.02.016

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  针对医学院校屏障环境动物实验室管理和运行中存在的问题,分析了目前动物实验室管理工作的困境,结合自身实际情况,对动物实验室管理模式进行了探讨,以期对动物实验室建设与管理提供有益的借鉴。
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  南通大学实验动物中心开放式比较医学实验室建设探讨

  宋鸿雁, 邵义祥

  实验动物与比较医学. 2014, 34(2): 159-161. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2014.02.017

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  通过阐述生物医学发展中比较医学与实验动物科学的密切关系,分析了南通大学实验动物中心比较医学实验室现状及目前存在的主要问题和不足,提出为了加强实验动物中心比较医学实验室的建设与管理工作, 应采取一系列相应的对策与措施,使实验室管理与运行与国际接轨。
综述
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  环介导等温扩增技术及其应用

  赵丽娟, 周洁, 高诚

  实验动物与比较医学. 2014, 34(2): 162-166. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2014.02.018

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  环介导等温扩增法(LAMP)是一种新的核酸扩增法。该方法在一定温度下一步即可完成扩增反应。由于其扩增效率极高、反应简单快速、高特异性和反应结果只需肉眼观察的特点,LAMP法已广泛应用于病毒、细菌等的定性定量检测和临床疾病的诊断。本文介绍了LAMP方法的原理及其在微生物分子检测方面的应用。
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  小鼠诺瓦克病毒研究现状

  刘芹, 魏晓锋, 高诚

  实验动物与比较医学. 2014, 34(2): 167-170. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2014.02.019

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  诺瓦克病毒(Norwalk virus, NV), 也称为诺如病毒(norovirus, NV),是引起人类非细菌性胃肠炎的主要病原体,此外,在牛、猪和小鼠也发现了诺瓦克病毒的存在。该病毒可分5个基因型(GI~V),鼠诺瓦克病毒(Murine norovirus, MNV)属于GV,是一种新发现的感染实验小鼠的病毒,并且被认为是目前小鼠中最流行的一种病毒。MNV是诺瓦克病毒中在细胞内有效复制的病毒,被作为研究诺瓦克病毒复制分子机制的模型,同时 MNV与人诺瓦克病毒(Human noroviruses,HuNV)有许多相似的分子生物学特点,也被认为是研究人诺瓦克病毒的理想病毒模型。