2010年, 第30卷, 第5期　
刊出日期：2010-05-31

  

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  小鼠肝炎病毒N蛋白基因在杆状病毒中的表达

  周洁1，宋宇2，姜浩3，胡建华1，高诚1

  实验动物与比较医学. 2010, 30(5): 317-317.

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  目的 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠肝炎病毒N基因。 方法 根据GenBank发表的小鼠肝炎病毒A59株N基因序列（AY700211），设计一对特异性引物，利用RT-PCR方法扩增出N基因的ORF，将目的 片段克隆入pFastBacHTa中，构建重组转移载体pFastBHa-N.将重组质粒转化DH10Bac感受态细菌，与Bacmid发生位点特异性转座作用，获得重组穿梭载体Bacmid-N.通过脂质体将其转染昆虫细胞Sf9. 结果 获得了重组杆状病毒rBN，并通过Westernblot和IFA分析表明证实N蛋白在昆虫细胞中获得正确表达，且表达产物具有抗原性。 结论 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功表达了小鼠肝炎病毒N蛋白，为进一步进行建立诊断学方法的研究奠定了基础。
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  人肺腺癌转移相关基因的初步筛选及验证

  刘蕾，王晓敏，荚德水，李静，闫明霞，孔韩卫，姚明

  实验动物与比较医学. 2010, 30(5): 318-321.

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  目的 利用建立的人肺癌高转移细胞系筛选转移基因，为研究肺癌转移的分子标志奠定基础。 方法 人肺癌细胞系SPC-A-1和相应的高转移细胞系SPC-A-1sci常规培养后提取总RNA，采用cDNA芯片技术检测两种细胞中差异表达基因，对部分有差异表达的基因进行蛋白免疫印迹（Western blot）分析验证。 结果 通过基因芯片技术筛选出了7 649个可能与肺癌转移相关的基因，其中上调基因3 891个，下调基因3 758个，功能涉及细胞黏附、凋亡、转录、信号传导、细胞周期和代谢等。经过Western分析，CD44与CDC42EP3在SPC-A-1sci中的表达明显高于SPC-A-1，而FNI的结果则相反。这与基因芯片的结果相一致。 结论 基因芯片高通量筛选提示7600余条基因可能与人肺癌转移相关，为进一步研究肺癌的转移机制和发现新的转移相关基因提供了较为有价值的线索。
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  ^TAFA2基因剔除小鼠模型的建立

  孙莲花1，陈燕1，麻孙恺2，迟俊2，匡颖2，顾鸣敏1，王铸钢3

  实验动物与比较医学. 2010, 30(5): 322-328.

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  目的 建立TAFA2基因剔除小鼠模型，为在体研究TAFA2基因的生物学功能及其与中枢神经系统发生、发育的关系创造条件。 方法 运用生物信息学手段确定小鼠TAFA2基因组的序列，设计基因剔除策略，构建基因剔除载体pBR322-MK-MCS-TAFA2，以电穿孔方法将基因剔除载体导入ES细胞，用G418和Ganciclovoir进行正负筛选，获得双抗性克隆，PCR鉴定出正确同源重组的ES细胞克隆。 结果 同源重组的ES细胞注入小鼠囊胚后获得嵌合体小鼠，嵌合体小鼠与C57BL/6J小鼠交配后获得Aguoti（野生型）毛色的小鼠41只，其中14只为TAFA2基因剔除杂合子小鼠，阳性率为34.1%。在雌、雄杂合子小鼠交配的后代中获得纯合子小鼠，初步的表型观察未发现TAFA2基因剔除小鼠出现异常改变。 结论 已成功建立了TAFA2基因剔除小鼠模型，其中纯合子小鼠未出现胚胎致死现象。
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  新西兰兔心衰模型心肌损伤改变及其与NO关系的探讨

  王萧1，王宁1，林传权1，许庆文2，付云1，刘金元3

  实验动物与比较医学. 2010, 30(5): 329-324.

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  目的 研究导管术致超容量负荷型实验性心衰兔模型随时间推移的损伤变化及其与NO的关系。 方法 运用导管术造成兔的超容量负荷型心衰模型，然后分别于造模后24 h和造模后7 d处死动物，取心脏组织做光镜检查；NO试剂盒检测血清NO含量、通过流式细胞仪检测心肌细胞凋亡情况、Western blot法检测Caspase-3蛋白水平的表达。 结果 ①光镜观察：正常组心肌细胞无损伤表现，造模24h组及7d组均有心肌细胞损伤表现，造模7 d组损伤更为广泛且严重：②NO试剂盒检测：造模24 h组NO含量（3.33±1.30 μmol/L）和造模7 d组含量（2.81±0.77/μmol/L）高于正常组（2.09±0.22 μmol/L），且造模24 h高于造模7 d；③AnnexinV联合PI染色：正常组凋亡率较低（3.72%±1.92%），随着时间推移，凋亡细胞所占比例呈上升趋势，造模7 d（10.73%±2.26%）明显高于造模24 h（7.62%±1.70%），④Western Blot检测：正常组基本检测不到激活的Caspase-3蛋白酶，在造模后24 h和造模后7 d Caspase-3蛋白酶均有明显表达，但造模7 d有所下降。 结论 超容量负荷型心衰兔模型心肌随时间推移，凋亡率增加、心肌损伤加重；NO在本心衰模型的主要作用以抗心肌细胞凋亡效应作用为主。
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  不同剂量链脲佐菌素诱发长爪沙鼠高血糖模型的初步观察

  刘锋华1，郭红刚2，楼琦2，戴方伟2，卢领群2，萨晓婴2，周光兴1

  实验动物与比较医学. 2010, 30(5): 335-339.

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  目的 探讨链脲佐菌素（STZ）诱发长爪沙鼠高血糖模型的建立及其合适药物剂量。 方法 40只成年长爪沙鼠，按照正常对照组、150 mg/kg，200 mg/Kg、250 mg/Kg、400 mg/kg和600 mg/kg的剂量组，随机分为A、B、C、D、E、F6个组。按照设定的时间点监测60d内各组沙鼠的血糖、体重及24 h尿量变化。 结果 C、D组沙鼠注射STZ 24 h后，血糖值均数升高16.65 mmol/L以上，72 h后临时性降低，但仍高于16.65 mmol/L，之后的4 d血糖值波动性升高至25 mmol/L左右，7 d后的血糖值均数持续稳定在该水平，注射STZ 7 d后动物成模率100%，且在实验周期2个月内动物死亡率较低，无自发性缓解率，出现典型的“三多一少”体征（多饮、多食、多尿、消瘦）。B组沙鼠注射STZ 7 d后，动物成模率62.5%（5/8），死亡率O，两个月内高血糖维持率25%（2/8）。E、F组沙鼠注射STZ 7d后，死亡率分别为83.30%（5/6）、100%。 结论 一次性大剂量注射链脲佐菌素能诱发长爪沙鼠持续性血糖升高，并可建立稳定的长爪沙鼠高血糖模型，沙鼠高血糖标准为空腹或非空腹血糖≥16.65 mmol/L，STZ的合适剂量为200～250 mg/kg。
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  猪高致病性蓝耳病病毒诱发病毒性肺损伤动物模型初探

  李吉达，徐守振，王建琳，尹燕博

  实验动物与比较医学. 2010, 30(5): 340-343.

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  目的 观察人工感染猪高致病性蓝耳病病毒发病猪肺组织的病理学变化，探讨猪高致病性蓝耳病用作SARS病毒性肺损伤动物模型的可行性。 方法 用高致病性蓝耳病毒株NVDC-JXA1 株人工感染试验猪10头，制备、观察肺组织病理切片，并与报道的SARS病毒引起的肺损伤进行比较分析。 结果 人工感染高致病性蓝耳病病毒后试验猪全部发病死亡，肺脏均呈现典型的间质性肺炎变化，比较高致病性蓝耳病与SARS病毒所引起的肺损伤发现两者具有极高的相似性。 结论 猪高致病性蓝耳病或可用作SARS病毒性肺损伤的动物模型，对于研究SARS病毒致病机理具有一定意义。
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  三聚氰胺致大鼠泌尿系统组织损伤的实验观察

  杨华1，刘芳1，秦波音1，周文江2

  实验动物与比较医学. 2010, 30(5): 344-348.

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  目的 为三聚氰胺泌尿系统组织损伤的研究建立动物模型。 方法 60日龄SPF级SD大鼠分为4组，3组分别给予三聚氰胺1.0、0.5、0.25 g/kg，连续灌胃6周；空白对照组每天灌胃10 g/L甲基纤维素溶液。于6周末处死动物，采用肉眼和体视显微镜观察大鼠肾脏、输尿管和膀胱形态改变，计算各脏器系数，同时检测大鼠血液生化指标，并利用小动物活体Micro CT对大鼠肾脏进行扫描，观察肾脏形态改变。 结果 给药6周末各组大鼠膀胱结石发生率为66.6%（20/30），肾脏结石发生率为56.6%（17/30）。给药6周各组大鼠肾脏均肿大呈灰黄色，肾内均出现条索状黄色沉淀物，融合成片状或颗粒状，并在皮质和髓质之间形成黄色弧形光环，给药6周各组肾脏质量和脏器指数均显著性升高，血清CREA、BUN、磷、镁含量升高（P＜0.01）。 结论 使用0.5～1.0 g/kg三聚氰胺连续灌胃给药6周，可诱发部分SD大鼠产生不同程度的泌尿系统结石。
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  两种方法建立2型糖尿病肾病大鼠模型肾损伤相关指标的对比分析

  温航远1，陈红艳2，杨新波2，黄正明3

  实验动物与比较医学. 2010, 30(5): 349-353.

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  目的 对两种2型糖尿病肾病大鼠模型的建立方法及肾损伤相关检测指标进行对比研究和分析。 方法 利用三联法（切除左侧肾脏+高糖高脂饲料喂养+腹腔注射链脲佐菌素）和二联法（高糖高脂饲料喂养+腹腔注射链脲佐菌素）建立两种2型糖尿病肾病大鼠模型，并检测大鼠模型空腹血糖、胰岛素敏感指数、n-乙酰-β-d-氨基葡萄糖苷酶、非酶糖基化、肌酐、尿素氮、尿微量白蛋白、肾重比，病理学观察大鼠肾脏组织学变化。 结果 ①与正常对照组大鼠对比，三联法组和二联法组大鼠空腹血糖、n-乙酰-β-d-氨基葡萄糖苷酶、非酶糖基化、肌酐、尿素氮、尿微量白蛋白、肾重比明显增加，而胰岛素敏感指数明显降低，肾组织学显示明显的损伤改变，其中三联法组大鼠死亡一只.②与三联法组大鼠对比，二联法组大鼠空腹血糖、胰岛素敏感指数、n-乙酰-β-d-氨基葡萄糖苷酶、非酶糖基化、肌酐、尿素氮、肾重比没有明显差异。 结论 三联法和二联法均可以建立2型糖尿病肾病模型，这两种方法结果之间没有明显差异。从模型成功率、成活率，以及实验操作方便性方面考虑，二联法优于三联法。
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  全军第十一届实验动物学术会议在沈阳召开

  实验动物与比较医学. 2010, 30(5): 353-353.

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  生物遥测法监测清醒状态下Beagle犬的心电生理特性

  李娜，王文誉，奚剑飞，徐皓，丁爽爽，张周

  实验动物与比较医学. 2010, 30(5): 354-358.

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  目的 在Beagle犬侧腹部肌肉组织上埋置传感器，采用生物遥测法监测清醒状态下动物的心率、体温、血流动力学及心电图各项指标。 方法 手术埋置传感器，恢复两周后，采用Dataquest A.R.T.2.3系统连续监测24 h内的心率、体温、血流动力学和心电图指标，并于次周重复一次。 结果 在整个实验过程中，该方法所监测指标基本维持正常水平，但上午10：00部分指标升至最高，心率值达到95.58±15.89次/分钟，收缩压、平均动脉压及舒张压也分别升至最高达152.37±10.67 mmHg，109.37±5.90 mmHg和87.73±5.01 mmHg，且两次实验结果间比较也没有明显差异（P＞0.05）。 结论 体内埋置传感器方法可以更加准确的监测清醒状态下Beagle犬的各项心血管指标，且动物在饮食过程中呈现出较高兴奋的状态。
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  长途运输应激对两种品系五指山小型猪自主神经功能的影响

  杨玉伟，陈民利，潘永明，陈亮，何欢，王德军

  实验动物与比较医学. 2010, 30(5): 359-364.

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  目的 观察长途运输应激对两种品系五指山小型猪自主神经功能的影响。 方法 基于无创遥测技术，监测清醒自由活动状态下经21 h长途运输应激后和2个月恢复后，两种品系五指山小型猪心电图（ECG）和活动的改变，并用HRV分析评价其自主神经功能状况。 结果 （1）小型猪对照组具有明显的昼夜节律变化，白天以交感神经活动为主，晚上以副交感神经活动为主，且Black品系RRI、RMSSD、STV、VLF、LF和LF/HF比值均显著低于white品系（P＜0.05，P＜0.01），而HR、LTv、TP和HF均显著高于White品系（P＜0.05，P＜0.01）；（2）与对照组比，长途运输应激后。小型猪RRI、SDNN、RMSSD、STV、LTV、TP、vLF、LF和LF/HF比值均明显降低（P＜0.01），HR和HF增加（P＜0.05，P＜0.01），且Black品系LTS组RRI、RMSSD、STV、VLF、LF和LF/HF比值均显著低于white品系LTS组（P＜0.05，P＜0.01），而HR、LIV、TP和HF均显著高于White品系LTS组（P＜0.05，P＜0.01）；（3）长途运输应激小型猪的活动、心率及其HRV时域和频域指标均具有显著的相关性（P＜0.05，P＜0.01）。 结论 长途运输应激能使不同品系五指山小型猪的自主神经活动产生明显的差异，且Black品系五指山小型猪更易受长途运输应激的损害；另外，交感神经活动的降低可能是导致运输应激致小型猪生物学功能发生改变的主要原因之一。
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  1.25(OH)₂D₃对NOD小鼠心肌超微结构的影响

  周正宇，周慧英，李新寅，王禹斌，薛智谋

  实验动物与比较医学. 2010, 30(5): 365-367.

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  目的 观察NOD小鼠在1，25（OH）2D3治疗前后心肌超微结构的改变，以探讨1.25（OH）2D3对心脏的保护作用。 方法 NOD小鼠（19只）用环磷酰胺诱发建立糖尿病模型后，随机分为1.25（OH）2D3治疗组及糖尿病模型组，每组6只。观察用药前及用药4周后糖尿病小鼠血糖及心肌超微结构的变化。 结果 模型组小鼠心肌纤维稀疏，肌丝扭曲部分断裂，z线增宽，M线、H带模糊不清。线粒体肿胀变形，嵴稀疏，排列紊乱，基底膜增厚，间质胶原纤维增生.1.25（OH）2D3治疗组小鼠心肌细胞中，肌丝排列整齐，结构清晰，肌纤维无明显断裂，线粒体肿胀较未治疗组明显减轻，心肌内微血管基底膜较模型组薄。 结论 1.25（OH）2D3可减轻实验性Ⅰ型糖尿病小鼠心肌超微结构的病变，对心肌有一定的保护作用。
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  ELISA方法检测抗体中两种显色系统的比较研究

  王吉，卫礼，岳秉飞，贺争鸣

  实验动物与比较医学. 2010, 30(5): 368-371.

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  目的 用TMB（3，3，5，5-四甲基联苯胺）替代OPD（邻苯二胺）作为ELISA实验中的显色剂，以减少OPD对实验操作人员的危害及对环境的污染。 方法 依据国家标准ELISA法进行操作，对小鼠肝炎病毒（MHV）抗体ELISA法的OPD和TMB两种显色系统的稳定性、特异性、敏感性及重复性进行比较。 结果 TMB系统较OPD系统：TMB比OPD稳定，相对偏差（15.3%）小于OPD（17.7%）；TMB系统特异抗原孔P/N值高于OPD特异抗原孔P/N值，差异显著（P＜0.05）；酶的使用浓度TMB是OPD的0.25倍，检测灵敏度是OPD的2倍；使用TMB，正常抗原和特异抗原孔批内和批间变异系数分别为3.9%、4.7%和13.0%、11.3%：而OPD分别为2.7%、4.5%和11.2%、9.5%。 结论 TMB较OPD稳定性、重复性好，敏感性、特异性强，可以替代OPD作为MHV抗体ELISA法的显色剂。
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  国衡颈通部分药效学作用研究

  沈龙海1，安泳潼1，孟庆涛2，曹愚2，严永高1

  实验动物与比较医学. 2010, 30(5): 372-376.

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  目的 观察国衡颈通浸膏不同剂量抗炎、镇痛、活血化瘀及抗软组织损伤的作用。 方法 采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀，角叉菜胶致大鼠足跖肿胀、醋酸致小鼠扭体疼痛、大鼠皮肤创伤性瘀斑及软组织急性损伤模型，观察药物作用。 结果 国衡颈通能抑制由二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀和角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀，减轻醋酸所致的小鼠扭体疼痛，治疗大鼠皮肤创伤性瘀斑和软组织损伤。 结论 国衡颈通具有抗炎、镇痛、活血化瘀及抗软组织损伤作用。
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  不同体重雌性食蟹猴月经周期血清雌二醇、孕酮水平的比较

  马南花1，黎宗强2，覃坚1，郑丽萍1，朱旭1，黄胜贤1，谢莉萍3

  实验动物与比较医学. 2010, 30(5): 377-378.

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  目的 观察比较不同体重的雌性食蟹猴月经周期血清雌二醇（E2）、孕酮（P）含量。 方法 4～6岁健康性成熟雌性食蟹猴20只，分为低、中、高3个体重组，每日定时采集血液（历时31-51），采用微粒子酶免疫分析技术测定血清E2、P的含量，观察其在整个月经周期中的平均水平并加以比较。 结果 组间体重比较均P＜0.05.高、低体重组雌性食蟹猴的E2、P水平均明显低于中等体重组。均（P＜0.05）。 结论 雌性食蟹猴体重偏低或偏高，均存在E2、P水平偏低的现象。
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  新西兰白兔血液流变学特性动态变化

  恽时锋，张立波，董敏，赵志刚，许龙详，陈莉，刘彪，吴正林，田小芸，周森妹，郭联庆

  实验动物与比较医学. 2010, 30(5): 379-380.

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  目的 分析我院自繁培育的封闭群新西兰白兔的血液流变学特性和动态变化。 方法 采集不同年龄、不同性别新西兰白兔的血液样品，分别检测其、WBV（高、中、低切变率）、HCT、ESR等15项血液流变学指标，并对其动态变化进行分析。 结果 检测获得了新西兰白兔15项血液流变学的正常值和动态变化，不同年龄、不同性别新西兰白兔血液学流变学特性均无显著差异（P＞0.05）。 结论 我院自繁培育的封闭群新西兰白兔血液流变学特性非常稳定。
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  树鼩驯养中环境条件初步探讨

  刘汝文，角建林，陈丽玲，何保丽，李玛琳

  实验动物与比较医学. 2010, 30(5): 381-383.

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  目的 通过实验室饲养树鼩，探讨更科学、更符合实际需要的普通级实验树鼩饲养环境条件。 方法 检测环境指数包括温度、光照、噪音、换气次数，落菌数，分析总结最适宜树鼩生长的环境参数。 结果 光照是所有因子中最重要的因子，光照时间12～14h，强度100～220 lx，比较有利于树鼩的四季繁殖。 结论 适宜普通级环境中饲养树鼩控制指标：温度18～29℃，相对湿度40%～66%；光照时间12～14h，强度100～220 lx；噪音50-60 dB；换气次数15～22次/h；落菌数10～40个/皿。
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  2010年上海实验动物机构管理和伦理国际共享研讨会

  实验动物与比较医学. 2010, 30(5): 383-383.

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  屏障系统回风口布置方式对气流组织的模拟分析

  杨五强，潘杰，李勋

  实验动物与比较医学. 2010, 30(5): 384-387.

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  采用雷诺应力模型（RSM），通过对两种下回风形式的气流组织的数值模拟，对比了屏障系统回风口布置方式对室内气流组织的影响，结果表明，与四角回风相比，双侧下回风的气流组织较好。并结合模拟结果，提出相关建议。
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  实验动物伦理审查监管问题初探

  杨汉林

  实验动物与比较医学. 2010, 30(5): 388-389.

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  随着我国实验动物伦理委员会的建立和发展，伦理委员会的监管体系完善和规范化建设已被提到议事日程。只有提高伦理审查委员会的审查质量，保证伦理原则落到实处，才能真正实现动物福利。本文就这一问题做初步的分析和思考。
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  浙江省实验动物工作调研与分析

  周文伟，吕宇，施伟文，施张奎

  实验动物与比较医学. 2010, 30(5): 390-392.

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  回顾我省实验动物发展历程，并对我省目前实验动物状况进行调研。近年来，我省实验动物工作取得一定成绩，但存在一些问题，许可证申领率不高、实验动物供应量存在一定缺口、实验动物品种比较单一。为更好服务于生物、医药等行业，需加强实验动物管理，整合资源，建立共享服务平台。
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  实验动物的兽医保健

  周艳，王建飞

  实验动物与比较医学. 2010, 30(5): 393-393.

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  随着实验动物在生物医学各领域中的广泛应用，实验动物饲养管理和使用，尤其是动物福利越来越受人们的关注。在整个实验动物饲养管理和使用计划中，兽医保健已经逐渐成为一个必不可少的重要组成部分。许多国家或一些非政府机构相继建立了针对兽医保健的指导性文件。本文旨在介绍实验动物饲养管理和使用计划中的兽医保健这个组成部分，以及中国在实验动物医学方面存在的不足和解决之道。