周光斌1, 3, 侯云鹏1, 杨中强1, 杨其恩1, 李秀伟1, 朱士恩1, 2
实验动物与比较医学. 2006, 26(1): 23-27.
目的 为实验动物、家畜和人类胚胎的冷冻保存探索简易、高效的玻璃化冷冻程序。方法以小鼠8-细胞胚胎为材料,在25℃室温和37℃恒温台条件下,利用玻璃化冷冻溶液EDFS30,对小鼠8-细胞胚胎进行玻璃化冷冻保存,解冻后培养60h后的囊胚发育率为其体外发育能力的考核指标,同时对解冻后培养1~3h的胚胎进行移植以判定其体内发育潜力。OPS(Open-pulledstraw)两步法冷冻保存,即胚胎首先移入预处理液(10%EG+10%DMSO)中平衡30s,再移入玻璃化溶液中吸入OPS平衡15、25、35、45和60s连同胚胎直接投入液氮中冷冻保存。结果小鼠胚胎8-细胞冷冻后囊胚发育率最佳组高达95.6%,与对照组(96.8%)差异无统计学意义(P>0.05)。利用最佳冷冻组获得的165枚胚胎移植于11只假孕63~67h的受体母鼠,结果有4只妊娠,产仔23只,妊娠产仔率为28.3%(23/60),与对照组37.9%(22/58)差异无统计学意义(P>0.05)。结论EDFS30为玻璃化冷冻液,OPS两步法能有效地冷冻保存小鼠8-细胞胚胎。