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2009年 第29卷 第4期    刊出日期：2009-04-30

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论文

超声引导下宫内移植制备人/山羊干细胞嵌合体的方法建立

许淼1，黄文英1，胡伟1，熊灿1，盛敏2，曾凡一3，黄淑帧1

2009, 29(4):  211-214. 

摘要 ( 833 )   PDF (303KB) ( 523 )  

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目的 建立超声引导下的干细胞山羊宫内移植的方法。方法 首先获得胎羊腹部横断面的超声图像，然后在超声引导下将7号穿刺针快速刺入妊娠45～55 d的胎羊腹腔内，将外源干细胞注射入胎羊腹腔中，并定期观察受体胎羊在移植后的生长发育和流产情况以及出生后外源细胞的嵌合比例。结果 通过超声引导能准确安全地进行外源干细胞的宫内移植，在移植的49头胎羊中，有36头胎羊顺利出生，其余13头流产（流产率26.5%，13/49），与非移植组流产率相当，明显低与剖腹手术移植组（流产率6%）。结论 超声引导下的干细胞宫内移植是一种简便和安全的方法，能有效避免剖腹手术方法带来的高流产率，非常适用于宫内移植嵌合体模型的制备，从而为研究干细胞在体内生物学特征和干细胞宫内移植的临床应用提供了技术手段。

兔轮状病毒VP7基因在重组杆状病毒中的表达

周洁1，王娱2，胡建华1，高诚1

2009, 29(4):  215-219. 

摘要 ( 929 )   PDF (403KB) ( 549 )  

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目的 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达兔轮状病毒VP7基因。方法 根据GenBank发表的LaRV 308/01 VP7基因序列（AF5028201），设计一对特异性引物，RT-PCR扩增获得VP7基因，将目的 片段克隆入pFastBacHTa中，构建重组转移载体6pFastBHa-VP7.将重组转移载体转化DH10Bac感受态细菌，与Bacmid发生位点特异性转座作用，获得重组穿梭载体Bacmid-VP7，通过脂质体将其转染昆虫细胞Sf9.结果 获得了重组杆状病毒Bacmid-VP7，Westernblot和IFA分析表明VP7蛋白在昆虫细胞中获得正确表达且表达产物具有抗原性。结论 本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功表达兔轮状病毒VP7蛋白，为进一步建立诊断学方法奠定了实验基础。

狂犬病病毒NP基因的克隆及真核表达

李敏，袁菊芳，丁璐静，杨丽萍，张广州，邵军石，马兰芝，曾林

2009, 29(4):  220-222. 

摘要 ( 960 )   PDF (284KB) ( 493 )  

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目的 检测狂犬病毒NP蛋白的免疫原性。方法 利用RT-PCR扩增狂犬病毒核蛋白（NP）基因，测序后将其克隆到PVAX1真核表达载体上；将PVAX1-NP转染Vero细胞，进行SDS-PAGE及Western-blot分析；以重组质粒PVAX1-NP对小鼠进行免疫试验。结果 经酶切分析、鉴定和测序验证，得到重组表达质粒PVAX1-NP，NP蛋白在Vero细胞中获得了表达，且表达产物具有免疫学活性；免疫小鼠抗体水平显著升高。结论 狂犬病毒NP蛋白具有免疫原性。

妊娠期L-NAME干预对子代大鼠学习认知能力的影响

朱蔚敏1，王春芳1，李笑天1，周光兴2，任芸芸1，潘华2

2009, 29(4):  223-227. 

摘要 ( 1035 )   PDF (261KB) ( 523 )  

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目的 探讨妊娠期亚硝基左旋精氨酸甲酯（L-NAME）干预对子代大鼠学习认知能力的影响。方法 通过给妊娠13 d大鼠连续7 d皮下注射L.NAME的方法建立妊娠期高血压疾病的大鼠模型，并根据剂量不同分为高剂量组（每天125 mg/kg）及低剂量组（每天75 mg/kg），对照组予生理盐水1 ml皮下注射。待自然分娩后，子代大鼠喂养至8周龄进行Morris水迷宫实验，分为定向导航试验研究智力和学习能力，空间探索试验研究记忆和空间定位能力。结果 在妊娠期高血压疾病模型中，水迷宫定向导航试验第1天，高剂量组和低剂量组的逃避潜伏期（72.45±26.98 s，71.25±27.61 s）均明显长于对照组（56.07±20.30 s）（P＜0.05）；训练第4天，高剂量组逃避潜伏期（31.91±24.96 s）显著高于对照组（21.17±19.47 s）（P＜0.05）。在空间探索试验中，低剂量组子代大鼠在站台所在的IV象限路程百分组（26.65%±10.63%）显著低于对照组（33.73%±13.98%）（P＜0.05）。结论 妊娠期L.NAME干预导致子代大鼠的智力受损，学习能力无明显差异。记忆和空间定位能力也有所降。

大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的建立与评价

周学武，廖自福，陈菁，刘良明

2009, 29(4):  228-232. 

摘要 ( 849 )   PDF (297KB) ( 719 )  

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目的 采用左冠状动脉结扎法，建立和评价大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。方法 麻醉大鼠21只，开胸，穿线结扎左冠状动脉造成缺血45 min、松解造成再灌注180 min；记录标准Ⅱ导联心电图、MAP和心肌收缩功能、心肌缺血/坏死面积以及大鼠存活时间变化。结果 左冠状动脉结扎后，QRS波增宽、增高，ST段上移，T波增高，与缺血前有非常显著差别（P＜0.01）；再灌注后，QRS波宽和波高、ST段和T波非常显著下降（P＜0.01），但仍高于缺血前水平。与缺血前比较，缺血后MAP、HR、LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax非常显著下降（Pl<0.01），LVEDP非常显著升高（P＜0.01），再灌注后变化趋势相同.180 min后，缺血区/左室、坏死区/缺血区的的平均面积比分别为34.3%、49.6%，存活率为52.4%。结论 采用左冠状动脉结扎法，复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型，心电图、MAP和心肌收缩功能、心肌缺血/坏死变化明显，成功率较高，是一种较好的建模方法。

袖带胃减容术大鼠模型的建立

王一龙1，蔡景理2，徐鲁白2，王继生2，许家镕2，柯重伟3，郑成竹3

2009, 29(4):  233-236. 

摘要 ( 982 )   PDF (460KB) ( 532 )  

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目的 通过在SD大鼠建立动物模型为袖带胃减容手术基础研究提供平台。方法 实验组sD大鼠20只进行袖带胃减容手术，对照组SD大鼠10只进行剖腹探查，术前、术后第一天及术后16周内每隔两周进行体重测量。结果 对照组10只大鼠均存活，实验组大鼠存活13只。对照组大鼠在术后体重增长明显，实验组大鼠体重在术后2周恢复术前水平，体重增长明显但较对照组慢（P＜0.01）。实验组术后胃扩张明显术后长径（2.02±0.20 cm vs 3.02±0.52 cm，P＜0.01；术后短径0.91±0.10 cm vs 1.58±0.35 cm，P＜0.01）。结论 在SD大鼠建立袖带胃减容手术模型是可行的，可通过该模型进一步研究袖带胃减容手术的减重机制及体重反弹等相关机制。

四种实验用小型猪mtDNA控制区5'端序列的比较研究

李洪涛1，吴清洪2，肖东2，袁进2，王万山2，张嘉宁2，顾为望2

2009, 29(4):  237-240. 

摘要 ( 1037 )   PDF (180KB) ( 497 )  

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目的 测定西藏小型猪以及巴马小型猪、贵州香猪和五指山猪的mtDNA控制区5'端序列，比较研究其遗传变异和与国内家猪的亲缘关系。方法 扩增四种小型猪的mtDNA控制区5'端，测序并进行所测序列多重比对，确定变异位点、单倍型，并建立亲缘关系树。结果 与荣昌猪相比，西藏小型猪mtDNA控制区5-端侧翼区704bp，有20个变异位点，由此归纳出26个单倍型；其中有两种主体单倍型，三个转换位点（305，500，691）的碱基分别为t，a，a和c，g，g.巴马小型猪、贵州香猪和五指山猪mtDiNA控制区5'端变异位点较少，分别只有4、4、3种单倍型。亲缘关系树的分析表明，西藏小型猪与其它三种小型猪有较近的亲缘关系。结论 西藏小型猪群体存在遗传分化，与巴马小型猪、贵州香猪和五指山猪亲缘关系较近；巴马小型猪、贵州香猪和五指山猪遗传均一性较高，可能与长期的人工选择有关。

IL-2基因修饰的树突状细胞诱导抗胰腺癌免疫效应的实验研究

乔伟伟1，顾坚忠2，杜卫东3

2009, 29(4):  241-243. 

摘要 ( 940 )   PDF (214KB) ( 586 )  

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目的 将白细胞介素2（IL-2）基因修饰树突状细胞（DC），观察其和对胰腺癌荷瘤裸鼠的治疗作用。方法 将IL-2基因转染单个核细胞来源的DC后，用于激发自体细胞毒性T淋巴细胞（CTL），检测其对CTL的增殖和人胰腺癌PC3细胞杀伤性的影响；检测CTL对荷人胰腺癌PC3细胞肿瘤裸鼠肿瘤生长情况影响和对肿瘤细胞分裂指数和端粒酶活性的影响。结果 IL-2基因修饰的DC细胞所激发的CTL对胰腺癌PC-3细胞有较强的抑制作用，并能抑制荷瘤裸鼠肿瘤细胞的分裂指数和端粒酶活性。结论 IL-2基因修饰DC细胞激活的CTL抗PC-3肿瘤免疫作用明显增强，能明显抑制人胰腺癌PC3细胞种植瘤的生长。

三种垫料丙酮提取物对小鼠肿瘤细胞株毒性作用观察

孟金萍，孙淑华，杨旭，王艳蓉，刘云波

2009, 29(4):  244-247. 

摘要 ( 902 )   PDF (223KB) ( 515 )  

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目的 探讨实验动物垫料对小鼠细胞生长活性的影响及其可能的细胞毒性。方法 体外培养的小鼠肝癌细胞Hepa1-6（mouse hepatoma cell line Hepa1-6，Hepa1-6）、小鼠肺癌细胞（LewisLung carcinoma，LLC）和小鼠黑色素瘤细胞B16（Melanoma，B16）培养液中分别加入不同浓度的3种实验动物常用垫料（玉米芯、松木、杨木）丙酮提取物，采用MTT方法测定细胞生长活性，并比较3种垫料对细胞的生长毒性。结果 小鼠Hepa1-6细胞生长活性与3种垫料之间的线性相关系数分别为：玉米芯-0.875，松木-0.747，杨木-0.826；LLC细胞分别为：玉米芯-0.527，松木-0.812，杨木-0.865；B16细胞分别为：玉米芯-0.727，松木-0.860，杨木-0.888.松木、杨木、玉米芯垫料对小鼠Hepa1-6细胞的半致死量（IC50）分别为：8.86，19.10，91.37 mg/ml；对LLC细胞的IC50分别为：4.42，7.72，24.65 mg/ml；对B16细胞的ICso分别为：8.86，19.10，91.37 mg/ml.结论 3种垫料与小鼠细胞Hepa1-6、LLC、B16的生长活性之间具有显著负相关性（P＜0.001），其抑制细胞生长作用依次为：松木>杨木>玉米芯。

C57BL/6J-Tg(A1b1HBV)44Bri/J转基因小鼠不同繁育方式的比较及鉴定

沈艳1，徐春华2，李祥瑞3，费俭4，周文江5

2009, 29(4):  248-253. 

摘要 ( 1053 )   PDF (549KB) ( 479 )  

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目的 研究C57BL/6J-HBV转基因小鼠的繁育规律，并从DNA、RNA、蛋白质、病毒学角度对该品系转基因小鼠进行综合分析。方法 C57BL/6J-HBV转基因小鼠以两种不同的交配方式进行繁殖，利用PCR法对每一世代仔鼠检测其阳性率。利用RT-PCR和real-time PCR对转基因小鼠肝组织中的HBV DNA进行定性和半定量检测并对HBV基因在转基因小鼠中的转录特征进行分析。利用血清ELISA和Western Blotting方法，分析HBV病毒抗原在转基因小鼠中的表达和分泌特征。结果 两种交配方式窝产仔数和离乳数存在显著性差异（P＜0.05），互交后代小鼠的阳性率高于回交后代.4只乙型肝炎病毒转基因小鼠分别与正常C57BL/6J鼠杂交进行传代，其阳性率始终保持在40%～50%，表明C57BL/6J.Tg（A1b1HBV）44Bri/J型HBV已稳定整合表达，并能可靠地遗传给下一代。转基因小鼠的肝组织可稳定表达的病毒抗原并可分泌入血。结论 该转基因小鼠可长期稳定高表达HBV病毒抗原，可应用于乙型肝炎病毒相关研究。

ALK3/α-MHC基因敲除小鼠部分生物学特性的观测

陈锡文，陈通克，王一龙，管敏强，林蓓蓓

2009, 29(4):  254-256. 

摘要 ( 1139 )   PDF (155KB) ( 666 )  

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目的 测定ALK3/α-MHC和C57BL/6小鼠的生理生化正常值及其脏器重量等。方法 采用全自动生化分析仪及血细胞分析仪分别8～9周龄C57BL/6、ALK3雌、雄小鼠的常用血液学指标及生化指标值进行检测；并测定了各小鼠的脏器。结果 C57BL/6和ALK3/α-MHC小鼠血液的PIT、HGB差异显著（P＜0.05）。C57BL/6和ALK3/α.MHC雌、雄之间小鼠丙氨酸转氨酶（ALT）、肌酸激酶（CK）差异显著；乳酸脱氢酶（LDH）差异极显著。脏器系数无显著差异。结论 ALK3/α-MHC血常规、血清生化指标和脏器指标的测定数据，将为从事生物医药研究等的科研人员提供参考。

无外源因子清洁级仓鼠种群的建立

王键，王富生，屈霞琴，陈蕾，吕藜，秦洁，张建光

2009, 29(4):  257-258. 

摘要 ( 886 )   PDF (182KB) ( 733 )  

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目的 建立无外源病毒因子的清洁级仓鼠群以保证生物制品质量。方法 通过子代选择法，结合剖宫取胎，对毒种和细胞进行外源因子的检测。结果 本所清洁级仓鼠各项指标符合实验动物国家标准，但在制备原代仓鼠肾细胞过程中，外源病毒因子检测时有阳性。不符合2005版规定。结论 在本所清洁级仓鼠群的基础上，进一步建立了无外源病毒因子的清洁级仓鼠群。

雌性SD大鼠主要脏器重量及其脏器系数观测

陈文文，毛栋森，戴方伟，施张奎，萨晓婴

2009, 29(4):  259-261. 

摘要 ( 1659 )   PDF (175KB) ( 739 )  

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目的 测定雌性SD大鼠主要脏器重量及其脏器系数的变化。方法 选用15、25、40，60和150日龄的雌性SD大鼠各30只，分别测定体重，安乐处死后取脑、颌下腺、心、肺、肝、脾、肾、肾上腺、胸腺、卵巢和子宫11个脏器称重，并计算脏器系数。结果 各主要脏器及性器官重量随着体重的增加而增加，各脏器重量在不同日龄段大部分都有显著性差异（P＜0.05或P＜0.01）。随着日龄的增加，脑、肺、肾、心等器官的脏器系数则逐步下降，子宫和卵巢的脏器系数在40日龄内呈增长趋势，并达到高峰，随之下降。结论 雌性SD大鼠在15～150日龄内机体处于快速生长阶段，以体重增加最为显著，雌性SD大鼠体重和脏器重量除个别外差异均比较显著，而脏器系数则表现不一，性器官的增长速度明显大于体重的增长。

兔精液液态冷藏效果观察

杨博1，刘丽均2，高娟3，贾青3，郁丽丽2，靳亚平4，施恩2

2009, 29(4):  262-263. 

摘要 ( 906 )   PDF (122KB) ( 579 )  

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目的 探讨兔精液在4℃条件下的液态冷藏保存方法。方法 将采集的新鲜兔精液分成三份，一份不稀释，另外两份用Ⅰ、Ⅱ稀释液分别进行稀释，在4℃条件下保存，每隔12 h取部分精液在37℃平衡5 min，进行活力检测，比较分析各组精子存活率的差异性。结果 72 h后，兔精液原液中的精子存活率为58.2%，显著高于稀释组。结论 将精液原液通过，陵速降温保存在4℃条件下，可以有效延长兔精子在离体状态下的存活时间，可以用来进行兔精液的液态保存。

食蟹猴肾移植术后并发血栓的分析

李纲1，赵源2，尚玉璞2，马兰芝2，黄斌2，侯知源2

2009, 29(4):  264-265. 

摘要 ( 862 )   PDF (122KB) ( 505 )  

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WHBE兔主要脏器重量及脏器系数的测定

徐剑钦，陈民利，张利棕，陈亮，潘永明，徐孝平

2009, 29(4):  266-268. 

摘要 ( 1362 )   PDF (203KB) ( 767 )  

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目的 测定WHBE兔主要脏器重量并计算脏器系数。方法 实验选用成年啪E兔，测定体重和主要脏器重量，计算脏器系数，并对雌、雄WHBE兔脏器重量、脏器系数进行比较。结果 雌雄WHBE兔甲状腺差异有显著性（P＜0.01），其他脏器系数，雌雄WHBE兔均无显著性差异（P＞0.05）。结论 wHBE兔脏器重量、脏器系数、消化道长度测定结果，为相关研究提供参考。

不同年龄的WHBE兔血气电解质分析

周卫民，徐剑钦，潘永明，王德军，张利棕，陈民利

2009, 29(4):  269-272. 

摘要 ( 925 )   PDF (204KB) ( 493 )  

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目的 观察不同性别、不同年龄的WHBE兔血气、电解质及能量代谢的变化。方法 取幼年、青年、老年WHBE兔经耳中动脉取肝素抗凝血，在NOVA气电解质分析仪上测定血气、电解质指标。结果 （1）幼年雄性WHBE兔血糖（Glu）明显低于雌性（P＜0.05），青年雄性WHBE兔SO2、Hb和K+均显著高于雌性（P＜0.05），老年WHBE兔性别问无明显差异（P＞0.05）；（2）青年WHBE兔PCO2、BE-ECF、BE-B、SBC、HCO3-、TCO2、a/A均明显高于幼年（P＜0.05，P＜0.01），而PO2、SO2、O2Ct、A和PO2/FI均明显低于幼年（P＜0.05，P＜0.01）；老年WHBE兔血液pH、PCO2、BE-ECF、BE-B、SBC、HCO3-、TCO2、a/A和Osm均明显高于幼青年（P＜0.05，P＜0.01），而PO2、SO2、Hct、Hb、O2Ct、A和PO2/FI均明显低于幼青年（P＜0.05，P＜0.01）。结论 性别因素对幼年WHBE兔Glu、青年WHBE兔SO2、Hb和K+有影响，而年龄对WHBE兔的血气、电解质和能量代谢影响随年龄增长而变化，与WHBE兔的生理生长密切相关。

脾虚型IBS模型WHBE兔的抗氧化活性研究

张利棕，徐剑钦，潘永明，王德军，陈亮，彭定国，应华忠，陈民利

2009, 29(4):  273-276. 

摘要 ( 927 )   PDF (238KB) ( 518 )  

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目的 观察脾虚型肠易激综合征（IBS）模型dWHBE兔的抗氧化活性的变化。方法 取WHBE兔和日本大耳白兔各12只，分别分成正常对照组6只、模型组6只，模型组采用湿热应激加灌服番泻叶煎剂的方法造成脾虚证肠易激综合征模型，造模结束后正常饲养10 d进行自然恢复，观察实验兔血清中的SOD、MDA、GSH-Px、NO和NOS活性水平的变化。结果 与正常对照组比较，模型组造模后WHBE兔和日本大耳白兔的血清SOD、GSH-Px活性水平显著降低（P＜0.05，P＜0.011：而血清MDA含量、NO和NOS活性水平均显著性升高CP＜0.05，P＜0.01）；自然恢复10 d后，WHBE兔血清GSH-Px活性水平仍显著降低（P＜0.05），MDA含量和NOS活性水平仍显著高于正常对照组（P＜0.05）；日本大耳白兔除NOS活性水平仍显著高于正常对照组（P＜0.05）外，其它各项抗氧化指标均无显著差异（P＞0.05）。结论 脾虚型肠易激综合征模型WHBE兔的抗氧化活性明显降低，且恢复较为缓慢，其症状与人的临床表现近似，因 WHBE兔可能适合用于人脾虚型肠易激综合征的研究。

支气管哮喘动物模型现状

崔菲菲，辛德莉

2009, 29(4):  277-277. 

摘要 ( 821 )   PDF (390KB) ( 701 )  

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近年来支气管哮喘发病率有逐年增长的趋势，所以对于支气管哮喘病因、病机及治疗方面的研究很必要。但支气管哮喘在人体研究具有局限性，使动物模型在哮喘研究中起了无可替代的作用。近年来越来越多的哮喘动物模型被应用于进一步阐明哮喘的病理生理、免疫学机制，同时动物研究可提供人体研究难得的结果，甚至在研制新药方面也可提供在人身上无法实行的实验性治疗。本文就目前已经成型的动物模型及相关致敏物质做一综述。

《常用实验动物解剖病理取材图谱》

2009, 29(4):  282-282. 

摘要 ( 483 )   PDF (52KB) ( 509 )  

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