当期目录

2014年 第34卷 第1期    刊出日期：2014-02-25

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论著

精原干细胞中Pten基因敲除小鼠模型的建立及初步的表型分析

周炜, 张迪, 于卓, 查巍巍, 冯立新

2014, 34(1):  1-5.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.001

摘要 ( 152 )   PDF (509KB) ( 181 )  

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目的 建立稳定的精原干细胞中Pten基因敲除的小鼠模型,对表型进行初步观察,为研究Pten在精原干细胞中的作用及相关的机制奠定基础。方法 采用Cre/Loxp系统建立Pten在精原干细胞中条件性敲除的小鼠模型,以同窝正常雄鼠作为对照,通过解剖、HE染色等方法对小鼠的表型进行观察,并通过免疫荧光检测精原干细胞标记分子早幼粒细胞白血病锌指蛋白(Plzf)的表达并对免疫荧光染色中的阳性细胞进行统计。结果 与对照组相比,Pten敲除鼠在出生后出现发育迟缓现象,13 d左右个体死亡,睾丸大小未受影响,但进一步的细胞计数统计发现Pten敲除后Plzf阳性细胞数目和对照组相比明显减少(P<0.01)。结论 成功建立精原干细胞中Pten基因敲除的小鼠模型,并且Pten可能通过下调Plzf的表达影响精原干细胞的发育,这为进一步探讨精原干细胞复杂的调控网络提供了一定的实验依据和思路。



大鼠两种脊髓半切模型制备方法的改良及比较

赵富生, 张晓莉, 武庚, 陈斌, 李月珍, 金秀东, 张际绯

2014, 34(1):  6-11.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.002

摘要 ( 180 )   PDF (692KB) ( 171 )  

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目的 比较两种大鼠脊髓半切模型制作方法的各自特点及其应用,为临床脊髓损伤研究提供适宜的动物模型。方法 60只SD大鼠随机分为脊髓半横切组(A 组,n = 20)、脊髓楔型块状半切组(B 组,n = 20)和正常对照组(C组,n = 20)。术后采用BBB动功能评分、斜板实验、HE染色和MRI检测综合评价两种脊髓半切模型的稳定性。结果 术后A组和B组大鼠伤侧后肢BBB运动功能评分及斜板维持最大角度值显著低于C组 (P<0.05),而这些指标在A组和B组之间没有明显差异; 术后28 d HE和MRI检测示A组和B组间脊髓损伤区组织结构具有显著差异。结论 脊髓半横切与脊髓楔型半切法均可建立稳定、可靠的脊髓半切伤模型,而脊髓楔型半切模型更适于评价移植物治疗脊髓损伤的研究。



新橙皮苷二氢查尔酮对流感病毒诱导小鼠肺气血屏障损伤的保护作用

毛栋森, 陈勤, 余陈欢, 胡毅翔, 张才乔

2014, 34(1):  12-17.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.003

摘要 ( 188 )   PDF (621KB) ( 164 )  

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

目的 探讨新橙皮苷二氢查尔酮(NHDC)对流感病毒诱导小鼠肺气血屏障损伤的保护作用。方法 建立流感病毒感染小鼠肺炎模型,给予NHDC灌胃治疗。计算小鼠肺指数、湿干比值、肺组织切片HE染色观察其病理形态变化,ELISA法检测感染后第6天血清中IL-6、LTB₄和ICAM-1的含量。免疫组化法检测肺组织水通道蛋白5(AQP5)蛋白表达水平。结果 流感病毒感染小鼠肺指数和湿干比值明显升高、肺组织间质炎性细胞渗出,以中性粒细胞浸润为主,伴明显的肺泡充血、水肿,肺组织AQP5蛋白表达水平明显下降; 而NHDC可明显逆转上述病理症状。结论 NHDC对流感病毒诱导的小鼠肺组织气血屏障损伤有明显的保护作用,其可能是通过上调AQP5蛋白表达而发挥作用。



贯叶连翘提取物对Beagle犬长期毒性研究

谢家骏, 周光兴, 乔正东, 王建新

2014, 34(1):  18-24.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.004

摘要 ( 174 )   PDF (364KB) ( 168 )  

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目的 观察贯叶连翘提取物经口给药9个月对Beagle犬长期毒性反应。方法 选用Beagle犬28条,随机分为4组,每组6~8条,雌雄各半。以0.3、0.55、1.0 g/kg剂量的贯叶连翘提取物(胶囊)经口给药,每日1次,每周6次,连续38周,停药恢复期8周。在整个实验期间,每日观察受试动物的一般活动状况,每周称体质量1次,并于给药前、给药10、20、30、38周、停药8周时,作心电图(Ⅱ导联ECG)检查,前肢抽血作血液学和血清生化学检测,收集尿液作尿常规检验,给药20、38周、停药8周时,处死部分动物取主要脏器和组织称重,并作组织形态学检查。结果 在给药10、20、30、38周和停药恢复期8周时,各剂量组和对照组动物一般活动状况、心电图检查、血液学和尿常规检测均未见有明显的异常改变。但在给药20、30周时高剂量组动物ALP、给药38周时中、高剂量组TBIL升高(P<0.05或P<0.01),届时,高剂量组动物肝脏系数上升(P<0.05)。病理检查亦显示,给药20周时,高剂量组雌、雄各有1条动物肝细胞轻度颗粒变性,雌性有1条肾曲管轻度颗粒样变性; 给药38周时,仅高剂量组动物少量肝细胞或肾近曲小管有轻度颗粒样变性。其余各剂量组动物各时点的血液学和血清生化学指标、脏器系数、组织形态学变化与相应对照组比均无显著性差异(P>0.05)。结论 贯叶连翘提取物连续给药20、38周时,0.55、1.0 g/kg组Beagle犬肝、肾组织形态和功能呈现轻度的毒性反应,但停药后可随时间而逐步恢复正常,其毒性反应程度与给药剂量和服用持续时间呈正相关。贯叶连翘提取物经口给Beagle犬的安全剂量为0.3 g/kg,相当临床治疗抑郁症拟用剂量的40倍。



注射用灯盏花素大鼠和豚鼠免疫毒性差异性比较

骆永伟, 杨春雷, 王忠辉, 王永, 王蓉, 姜娟, 闫晗, 孙祖越

2014, 34(1):  25-28.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.005

摘要 ( 251 )   PDF (222KB) ( 207 )  

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目的 研究注射用灯盏花素在两种不同的动物种属及其反应体系上的免疫毒性差异。方法 按照《中药、天然药物免疫毒性(过敏性、光变态反应)研究的技术指导原则》的试验方法对注射用灯盏花素进行SD大鼠皮肤被动过敏试验和Hartley 豚鼠全身主动过敏试验,比较注射用灯盏花素在大鼠和豚鼠体内的免疫毒性差异。结果 注射用灯盏花素剂量为5 mg/kg、50 mg/kg及500 mg/kg时均未引起SD大鼠皮肤被动过敏反应阳性; 注射用灯盏花素剂量为5 mg/kg(豚鼠等效剂量)时引起50%动物弱阳性和50%动物阳性,50 mg/kg时豚鼠全身主动过敏反应阳性率为100%。结论 注射用灯盏花素在两种动物体内表现的过敏反应存在着明显的差异,豚鼠全身主动过敏反应相对于SD大鼠皮肤被动过敏反应更敏感,与临床过敏反应发生率更具有一致性。

三个封闭群实验兔线粒体DNA D-loop区多态性分析

申幸娇, 岳秉飞, 马丽颖

2014, 34(1):  29-34.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.006

摘要 ( 203 )   PDF (349KB) ( 168 )  

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目的 通过对三个封闭群实验兔线粒体DNA控制区序列进行分析,从分子水平探讨其群体的多样性和均一性。方法 利用特异引物对新西兰白兔、日本大耳白兔、青紫蓝兔三个封闭群共71份血液样品线粒体D-loop区部分序列进行扩增,纯化,测序,用Mega4.0和DNA SP软件对变异位点数、简约信息位点数、单倍型、单倍型多样度、核苷酸多样度等遗传信息进行分析。结果 在71份样品中,共检测出了 6个多态性位点,多为C→G突变,定义了9种单倍型,且三个种群分别有各自单倍型,互不重叠。三个种群D-loop区多态性及种群多样性均偏低。结论 本研究为兔线粒体D-Loop区序列特征和国内常用三个封闭群实验兔种群结构提供了更多数据,并为遗传育种提供指导。



小鼠腺病毒PCR检测方法的建立及初步应用

王吉, 付瑞, 卫礼, 李晓波, 冯育芳, 王淑菁, 巩薇, 岳秉飞, 贺争鸣

2014, 34(1):  35-41.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.007

摘要 ( 249 )   PDF (494KB) ( 172 )  

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目的 建立小鼠腺病毒(MAdV) PCR检测方法,应用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MAdV的检测。方法 根据已发表的小鼠腺病毒(MAdV) E1B基因序列,设计合成引物。建立RT-PCR方法,并对方法的特异性、敏感性、稳定性等进行验证。用建立的方法对65只长爪沙鼠、12只小鼠进行检测。结果 建立的MAdV PCR检测方法与小鼠微小病毒、多瘤病毒无交叉反应; 以MAdV DNA为模板,所能检测DNA最小模板浓度为1.67 pg/μl,可检测病毒最小滴度为10^-7/ml; MAdV DNA在-30℃冰箱放置12个月,仍能扩增出大小约606 bp的可见目条带。经PCR检测,65只沙鼠和12只小鼠均为阴性。结论 建立的小鼠腺病毒(MAdV) PCR检测方法特异、敏感、稳定,可用于小鼠、长爪沙鼠等实验动物MAdV的检测。



nm23-M1基因在小鼠粒单核细胞白血病中的表达

董征, 孙雪冬, 满秋红, 姚波, 李玉芳, 刘铁强, 黄珊, 刘广贤, 艾辉胜, 郭梅

2014, 34(1):  42-45.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.008

摘要 ( 142 )   PDF (284KB) ( 186 )  

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目的 探讨nm23-M1基因在小鼠粒单核细胞白血病中的表达。方法 给小鼠经尾静脉注射粒单核细胞白血病细胞株WEHI-3, 同时选取正常小鼠作为对照组,取发病小鼠以及正常小鼠的骨髓, 采取qRT-PCR的方法检测nm23-M1基因的表达情况,分析其与白血病发生及发展的关系。结果 粒单细胞白血病小鼠骨髓细胞中nm23-M1基因的相对表达量是正常对照组中的24倍, 两组之间有显著性差异(P<0.05)。结论 nm23-M1基因在小鼠粒单核细胞白血病中高表达, 并且与外周血白细胞数、骨髓原始细胞数以及脏器白血病侵袭情况相关,而与白血病小鼠的性别、年龄无关。



micro-CT法观测雌性小鼠股骨骨参数的分析

耿沁, 朱淼鑫, 孙磊, 崔永奇, 孔韩卫, 姚明, 刘蕾

2014, 34(1):  46-49.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.009

摘要 ( 405 )   PDF (306KB) ( 218 )  

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目的 利用小动物CT(micro-CT)收集正常雌性BALB/c-nu/nu小鼠与BALB/c小鼠股骨的影像学数据。方法 BALB/c-nu/nu小鼠与BALB/c小鼠各15只,雌性,10~12周龄,取股骨后用micro-CT进行扫描,将得到的数据进行系统分析。结果 成功收集了正常雌性BALB/c-nu/nu小鼠与BALB/c小鼠股骨的CT影像学数据。通过数据分析,发现两者在皮质骨相对骨体积上具有显著差异, 在骨小梁相对骨体积、骨表面积与组织体积比值和骨密度也有显著差异。结论 micro-CT可以对雌性小鼠股骨的各项参数进行定量分析。



经验交流

小鼠肝大部切除术的改进

张诚, 姚菊芳

2014, 34(1):  50-52.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.010

摘要 ( 232 )   PDF (389KB) ( 210 )  

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目的 改进小鼠肝大部切除模型的技术。方法 在小鼠部分肝切除之前,预先结扎小鼠肝脏左叶及中叶的Glisson系统,然后建立模型,比较术后结果。结果 经改进后的小鼠肝切除模型发生出血及胆漏等并发症的风险明显降低,提高了术后生存率。结论 预先结扎Glisson系统技术是一种更加理想的小鼠大部肝切除方法。



改良R18S3冷冻液对cre转基因小鼠精子冷冻效果探讨

陈瑜, 王芊芊, 张匀

2014, 34(1):  53-55.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.011

摘要 ( 137 )   PDF (182KB) ( 186 )  

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目的 比较改良精子冷冻液与传统冷冻液对cre转基因小鼠的精子冻存和体外受精率的影响,建立采用精子冷冻技术稳定保存两种cre转基因小鼠的方法。方法 以R18S3作为精子冷冻液和以R18S3作为基础液添加477 μmol/L 的硫代甘油(MTG)配成R18S3+MTG冷冻液,冻存Neurog3-cre和Itgax-cre雄鼠精子, 采用相同方法复苏精子。同时, 以两种cre小鼠的背景鼠C57BL/6J 作为对照组,另选用ICR和FVB小鼠用两种冷冻液冻存并复苏精子,进行体外受精,统计受精率来评价精子冷冻效果。结果 以R18S3冷冻并复苏的两种cre小鼠及野生型C57BL /6J的精子体外受精率分别为10.5%,11.6%和12.0%,无显著差异。以R18S3+MTG冷冻并复苏的精子体外受精率分别为66.4%,62.5%和67.6%,相对传统冷冻液有显著提高。ICR和FVB小鼠用改良精子冷冻液前后的体外受精率分别是34.1%,46.7%和65.7%和70.2%,后者都有所提高。结论 改良后的R18S3+MTG冷冻液能明显提高以C57BL/6J为背景的cre转基因小鼠冷冻后精子的体外受精率,对ICR和FVB品系的小鼠的体外受精率也有提高。

小鼠生物净化中的动情周期判定及超数排卵

刘青青, 牛玉娜, 周正宇, 王婧, 卢明康, 薛智谋

2014, 34(1):  56-58.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.012

摘要 ( 1784 )   PDF (370KB) ( 402 )  

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目的 准确判定小鼠动情周期的变化,并在动情周期的不同阶段诱导超数排卵,探索最佳的超排时间,以提高生物净化的成功率。方法 C57BL/6J小鼠每日08:00至13:00,取阴道脱落细胞进行涂片,观察脱落细胞中白细胞、有核细胞和角质化细胞的比例及变化的规律,确定小鼠的动情周期。据判定的动情周期的各阶段,腹腔注射外源激素分别诱导超数排卵后,于输卵管中取卵母细胞计数,并统计分析。结果 根据阴道涂片确定小鼠动情前期(包括过渡期)、动情期(I、II期)、动情后期和间情期。4~6周龄 C57BL/6J小鼠诱导超数排卵的最佳时期是动情前期,平均可获得23.20枚卵母细胞, 显著高于其他实验组(P<0.001)。结论 据阴道涂片观察, C57BL/6J小鼠单个动情周期持续4~10 d,动情周期内不同时间段超排效果也不同。



人工饲养喜马拉雅旱獭主要脏器重量及脏器系数的测定

范微, 刘巴睿, 刘海青, 张发荣, 徐小青, 加洛, 王忠东, 陶元清, 薛红梅

2014, 34(1):  59-61.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.013

摘要 ( 148 )   PDF (167KB) ( 241 )  

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目的 对人工饲养成年喜马拉雅旱獭的体质量和主要脏器重量、脏器系数进行测定。方法 选用成年喜马拉雅旱獭20只,雌雄各半,分别测定体质量和15个脏器重量,计算脏器系数。结果 性别间比较体质量无明显差异(P>0.05),脑重量雄性显著大于雌性旱獭(P<0.01); 雌雄个体间心脏、胸腺、褐色脂肪等器官组织重量雄性略大于雌性,但差异无统计学意义(P>0.05); 胆囊重量雄性略小于雌性,也无统计学意义(P>0.05); 其余各脏器重量差异均不显著(P>0.05)。喜马拉雅旱獭各脏器系数雌雄个体间差异均不显著(P>0.05)。结论 成年喜马拉雅旱獭雌雄间脑重量差异显著,而体质量、其他脏器重量及各脏器系数差异不显著。

绿色荧光裸小鼠主要脏器重量及脏器系数测定与比较

尤金炜, 张立波, 方天, 田小芸, 刘彪, 梁磊, 恽时锋

2014, 34(1):  62-64.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.014

摘要 ( 176 )   PDF (155KB) ( 167 )  

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目的 测定绿色荧光蛋白(GFP)转基因裸小鼠主要脏器重量及脏器系数。方法 选用6~8周龄GFP转基因裸小鼠及BALB/c裸小鼠雌雄各30只,用电子天平分别测定体质量和8个主要脏器重量,计算脏器系数,并进行性别间比较。结果 ①GFP转基因裸小鼠与BALB/c裸小鼠之间比较: 雄性肾上腺、胰腺的质量组间差异极显著(P<0.01),心、肺的质量差异显著(P<0.05),脏器系数中肾上腺、胰腺差异极显著(P<0.01); 雌性体质量、心、肾、肺、胰腺的重量组间差异极显著(P<0.01), 肝、肾上腺的质量差异显著(P<0.05), 脏器系数中肝、脑、胰腺差异极显著(P<0.01)。②GFP转基因裸小鼠雌雄组间比较,雄性鼠体质量明显大于雌性鼠(P<0.01); 心、肝、肾、胰的质量差异极显著(P<0.01); 雌雄间脏器系数比较,心、肾、肾上腺、脑间差异极显著(P<0.01) , 胰腺系数间比较差异显著(P<0.05)。结论 转基因GFP转基因裸小鼠的脏器重量、脏器系数在雄雌间有一定的差异,为相关的生物医学研究提供了基础数据。

不同性别BALB/c裸小鼠血液学及脏器系数观测

刘科, 刘盛来, 杨林, 邱毅文, 邝少松, 王刚

2014, 34(1):  65-67.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.015

摘要 ( 239 )   PDF (177KB) ( 272 )  

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目的 测定SPF级BALB/c裸小鼠血液学参数,脏器重量、脏器系数,并进行性别间比较。方法 选取10周龄SPF级BALB/c裸小鼠80只,雌雄各半。40只采集血液,运用血液分析仪测定血液常规指标;40只活体称重,采集血液,运用全自动生化分析仪测定血生化指标,并采集脏器测定脏器重量,计算脏器系数。结果 雌雄裸小鼠测定项目比较,①雄性白细胞数、平均血红蛋白量、血小板、淋巴细胞显著高于雌性、红细胞显著低于雌性(P<0.01),红细胞平均体积、血小板压积与雌性差异达到显著水平(P<0.05)。②雄性碱性磷酸酶、肌酸激酶、天门冬氨酸氨基转移酶显著高于雌性 (P<0.01),白蛋白显著高于雌性 (P<0.05)。③雄性体质量、肾、膀胱脏器重量显著高于雌性,差异达到极显著水平(P<0.01),肝脏器重量显著高于雌性,差异达到显著水平(P<0.05);雌雄裸小鼠脏器系数相比较,雄性裸鼠的心、脾脏器系数显著低于雌性,差异达极到显著水平(P<0.01),雄性肾的脏器系数显著高于雌性,肺、肾上腺的脏器系数显著低于雌性 (P<0.05)。结论 性别对SPF级BALB/c裸小鼠血液学参数、脏器重量和脏器系数有一定的影响。

大鼠不同部位采血血清肌酸激酶及其同工酶检测结果

李红, 施嘉琛, 杨奕, 丁晓静

2014, 34(1):  68-70.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.016

摘要 ( 222 )   PDF (161KB) ( 170 )  

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目的 比较大鼠不同部位血清肌酸激酶(CK)及其同工酶(CK-MB)检测结果是否存在差异。方法 用免疫抑制法检测大鼠不同部位采集的血清中CK和CK-MB活性,并进行比较。结果 大鼠不同部位采集的血液其血清CK和CK-MB检测结果均差异极显著。结论 毒理学动物实验前后采血部位应统一,在检测结果未达到互认时,使用各自动物模型的空白组和实验组数据进行分析比较。

实验室自检在实验动物质量控制中的作用

关升起, 肖春兰, 周正宇

2014, 34(1):  71-74.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.017

摘要 ( 134 )   PDF (216KB) ( 163 )  

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目的 对一年内在我校隔离检疫的不同来源的39批实验鼠进行病原体检测,分析各类疫病感染的规律,进一步完善隔离检疫系统。方法 依照国家标准GB14922.2-2011和GB14922.1-2011进行检测, 以细菌鉴定试剂盒法为补充。结果 整体合格率为79.49%, 其中来自国外动物检测合格率为100%(7批次来自美国,1批次来自日本); 来源为国内共31个批次合格率为74.19%,其中病毒检出率为9.68%,致病菌检出率为25.81%,寄生虫检出率25.81%。结论 国内来源动物背景复杂,质量有待提高。隔离检疫和实验自检室可有效阻止外来实验动物所携带病原微生物对动物设施可能带来的危害。

我国实验动物福利的现状和对策

田立立, 林金杏, 陈懿斐, 高诚, 魏晓锋

2014, 34(1):  75-78.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.018

摘要 ( 144 )   PDF (269KB) ( 387 )  

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实验动物是生命科学研究发展的基础, 随着生物医药产业的蓬勃发展和实验动物的广泛使用, 实验动物福利问题日益在世界范围内受到关注,这也是人类文明进步的标志。本文综述了我国实验动物福利的发展现状并提出可能的对策, 旨在为我国今后实验动物福利的发展提供一些思路。

综述

慢性过敏性哮喘大鼠模型的建立与评价

乔明, 刘兰英, 王和生

2014, 34(1):  79-82.  DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.019

摘要 ( 168 )   PDF (224KB) ( 196 )  

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为制备出接近人类慢性过敏性哮喘特征的大鼠模型提供研究基础。本文总结国内外近年来慢性过敏性哮喘大鼠模型的建立方法,从模型大鼠品系的选择、造模方法、模型评价等几个方面来综述。