2019年, 第39卷, 第5期　
刊出日期：2019-10-25

  

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  七甲川菁类化合物在肿瘤模型活体成像研究中的应用

  师长宏

  实验动物与比较医学. 2019, 39(5): 337-341. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2019.05.001

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  七甲川菁类化合物不仅具有近红外荧光(near-infrared fluorescence, NIRF)染料特征,而且具有肿瘤靶向性,不需要化学修饰,可直接被肿瘤细胞吸收,呈特异性聚集,从而可用于肿瘤模型活体成像。该染料在人体肿瘤细胞系移植(cell-derived xenograft, CDX)模型、临床人源肿瘤组织异种移植(patient-derived tumor xenograft, PDX)模型和犬自发肿瘤模型中均显示出良好的特异性。其肿瘤靶向性由特异性有机阴离子转运肽(organic anion transporting peptides, OATP)调控,并受到低氧条件控制,这些特性将会拓展NIRF染料在肿瘤成像研究中的应用。
  
论著
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  中国仓鼠口腔鳞癌miR-504的表达特征分析

  卫佳宁, 续国强, 高继萍, 王晓堂, 肖兰飞, 宋国华

  实验动物与比较医学. 2019, 39(5): 342-348. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2019.05.002

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  目的 构建中国仓鼠口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)动物模型,研究miR-504在中国仓鼠OSCC动物模型的癌组织和癌旁舌组织中的表达特征。方法 采用二甲基苯并蒽(DMBA)涂抹法诱导中国仓鼠OSCC模型, 对OSCC中miR-504的前体序列克隆分析; 提取癌组织颊囊和癌旁组织舌的总miRNA, qRT-PCR检测不同时间点(造模0周、6周、12周和18周)中国仓鼠颊囊和舌组织中miR-504的表达水平。结果 颊囊黏膜在造模6周时出现轻度的充血,12周时黏膜增厚,18周时局部有白斑样病变和糜烂。与正常对照组相比,在 6周、12周和18周时,miR-504在颊囊组织的表达水平分别增加约0.83、0.33,0.23倍(P<0.001); 而在舌组织的表达水平变化分别约为正常舌组织的0.92、0.84、0.27倍(0.001<P<0.01)。结论 DMBA涂抹仓鼠颊囊组织建立的OSCC模型,癌组织中miR-504的表达量显著增加,miR-504与OSCC的发生发展密切相关,可能调控其靶基因及其下游的信号通路。本结果有助于了解miR-504在中国仓鼠OSCC各个阶段的癌组织和癌旁组织的差异表达特征。
  
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  牛棒状杆菌环介导等温扩增快速检测方法的建立及初步应用

  冯洁, 张泉, 钱淼, 谢建云, 高诚

  实验动物与比较医学. 2019, 39(5): 349-355. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2019.05.003

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  目的 建立牛棒状杆菌(C.bovis)环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。方法 根据牛棒状杆菌16S rRNA基因保守区域设计一组特异性引物,对反应条件进行优化并对特异性和敏感性进行分析。结果 建立的LAMP扩增方法仅能检测出牛棒状杆菌,其他常见细菌未见特异性扩增,检出牛棒状杆菌的最低模板量为118 fg/μL。结论 建立的牛棒状杆菌LAMP检测方法操作简单、快速高效,结果易于观察,对仪器设备要求低,可用于牛棒状杆菌的快速检测。
  
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  短发夹RNA TRPV4基因对脊柱侧弯大鼠模型椎间盘退变的抑制作用

  李琰, 孔建军, 陈子奇, 祝聪聪

  实验动物与比较医学. 2019, 39(5): 356-363. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2019.05.004

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  目的 探究短发夹RNA(shRNA)瞬时感受器电位香草素4(transient receptor potential vanilloid, TRPV4)基因对抑制SD大鼠脊柱侧弯动物模型椎间盘退变的机制。方法 采用经典的双足大鼠脊柱侧弯模型构建动物模型,根据小干扰RNA(siRNA)干扰原理,构建短发夹RNA(shRNA)-TRPV4干扰载体,根据实验目的大鼠分为对照组、模型组和shRNA组。采用影像学摄片观察大鼠脊柱侧弯的程度和cobb角度; HE染色观察退变椎间盘组织; 免疫组织化学染色检测髓核组织中II型胶原和多聚蛋白多糖(Aggrecan)的表达; 实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blotting从基因和蛋白两个层面检测诱导型一氧化氮合成酶(iNOS); 炎症相关因子环氧合酶2(COX-2)和金属蛋白酶9 (MMP-9); 以及凋亡相关因子B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2),Bcl-2家族抗凋亡因子(Bad),Bcl-2家族相关X蛋白(Bax)以及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3), Caspase-6和Caspase-9的表达水平。结果 0.011 μL shRNA-TRPV4慢病毒量转染效率较高,为90.3%; 对照组SD大鼠未发生侧弯; 模型组SD大鼠脊柱向左侧弯,cobb角为35.22°±2.18°; shRNA组SD大鼠脊柱向左侧弯,cobb角为24.07°±3.09°; RT-PCR结果显示, 模型组髓核组织中iNOS, COX-2,MMP-9,Bad,Bax和凋亡相关因子Caspase-3,Caspase-6,Caspase-9的mRNA表达水平均高于对照组(P<0.05); 而抗凋亡因子Bcl-2的表达水平要低于对照组(P<0.05）; Western blotting结果显示, 模型组髓核组织中iNOS和MMP-9的蛋白表达水平均高于对照组(P<0.05); 而低于shRNA组(P<0.05); 免疫组织化学染色结果显示, shRNA组髓核组织中II型胶原蛋白和多聚蛋白多糖(Aggrecan)蛋白的蛋白表达水平均低于对照组(P<0.05); 而高于模型组(P<0.05)。结论 shRNA-TRPV4可以抑制脊柱侧弯鼠模型中髓核细胞的凋亡, 降低髓核组织中iNOS以及炎性因子COX-2和MMP-9的表达, 对髓核组织的退变起到保护作用。
  
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  山羊胎肝内人脐带间充质干细胞的存活与分化研究

  鄢东海, 黄小昆, 向雪萍, 卿德科, 方伟, 李自安, 王强, 王金祥, 庞荣清

  实验动物与比较医学. 2019, 39(5): 364-370. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2019.05.005

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  目的 观察人脐带间充质干细胞(hUCMSC)在胎羊肝脏内的存活与分化。方法 妊娠2个月时在胎羊肝脏实质区注射绿色荧光蛋白(GFP)转染标记的hUCMSC(GFP-hUCMSC),出生1月龄时取羔羊肝脏组织,制作切片后在荧光显微镜下观察GFP阳性细胞的分布,采用PCR方法检测人雄性性别决定基因(SRY)的存在; RT-PCR方法检测人肝细胞特异基因的表达; 免疫组织化学染色检测人肝细胞特异蛋白的表达。注射同体积生理盐水的同月龄羔羊为对照。结果 在注射了GFP-hUCMSC的1月龄羔羊肝脏组织中可观察到绿色荧光的规则或散在分布,并可检测到人SRY基因的存在。RT-PCR方法可检测到人肝细胞核因子4α(HNF4α)、肝细胞核因子3β(HNF3)和白蛋白(ALB)基因的阳性表达;免疫组织化学染色可检测到人ALB和HNF4α蛋白的阳性表达,而对照羔羊肝脏检测不到绿色荧光阳性细胞和人SRY基因以及人肝细胞特异基因和蛋白的表达。结论 hUCMSC可以在胎羊肝脏内存活并分化为人肝细胞样细胞,并可在胎羊出生后至少持续一个月。
  
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  乙酰胆碱合并氯化钙静脉注射致兔和大鼠房颤模型的比较

  冯凯, 杨蕾熙, 成祎琳, 尉延春, 陶如, 周童心, 汤依群

  实验动物与比较医学. 2019, 39(5): 371-376. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2019.05.006

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  目的 通过条件优选,采用静脉注射乙酰胆碱合并氯化钙(Ach -CaCl₂)混合溶液制备兔房颤 (AF)模型。方法 静脉注射Ach (66 μg/mL)-CaCl₂(10 mg/mL)混合溶液诱发兔AF,单因素实验筛选混合溶液最佳的注射体积和注射速度以及最适的麻醉药种类; 连续10 d尾静脉注射Ach (66 μg/mL)-CaCl₂(10 mg/mL)混合溶液建立大鼠AF模型。心电图记录AF持续时间,Masson染色和HE染色观察AF兔心房组织病理学改变,并与大鼠AF模型进行比较。结果 体积分数0.5%戊巴比妥钠麻醉兔的效果较好。相对于大鼠模型,混合溶液诱发的兔AF持续时间较长,连续10 d造模,兔AF持续时间波动较大,代偿性拮抗作用明显,延长造模时间,AF持续时间趋于平稳。造模28 d,AF持续时间可达80 s,且心房组织纤维化更加明显。结论 Ach -CaCl₂静脉注射,可制备兔AF模型,与大鼠AF模型相比,兔AF持续时间较长,房颤发作时f波和心室波混杂出现,与临床心电图表现相近。
  
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  舒郁胶囊及其主要组份对经前期综合征肝气郁证大鼠海马中Cav1.2介导的CaM/CaMKⅡ信号通路的影响

  徐凯勇, 王杰琼, 李芳, 耿燕楠, 夏小雯, 宋春红

  实验动物与比较医学. 2019, 39(5): 377-382. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2019.05.007

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  目的 探讨L型钙通道(Cav1.2)下游信号通路中钙调蛋白/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaM/ CaMKⅡ)与经前期综合征(PMS)肝气郁证的关系以及舒郁胶囊的干预机制。方法 用舒郁胶囊、柴胡提取物、白芍提取物和阳性对照氟西汀+尼莫地平对慢性束缚应激法制备的PMS肝气郁证大鼠进行干预,免疫印迹技术检测各组海马中CaM,CaMKⅡ的磷酸化水平及脑源性营养因子(BDNF)蛋白表达。结果 慢性束缚应激可以成功复制PMS肝气郁证大鼠模型。蛋白表达结果显示,模型组大鼠海马中CaM蛋白的表达量升高(P<0.05),CaMKⅡ磷酸化水平显著升高, BDNF蛋白的表达量显著下降(P<0.01)。与模型组相比,氟西汀+尼莫地平组大鼠海马CaM蛋白表达量显著降低(P<0.05),各给药组海马中CaMKⅡ磷酸化水平显著下降(P<0.01),BDNF的蛋白表达量均显著升高(P<0.01, P<0.05)。结论 海马脑区Cav1.2下游信号通路中CaM/ CaMKⅡ的激活与PMS肝气郁证的发生有关,舒郁胶囊及其有效组分可能是通过抑制CaMKⅡ信号通路的激活发挥其治疗作用。
  
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  原花青素对大鼠放射性心脏损伤心肌组织IL-1、TGF-β1、NF-κB蛋白表达的影响

  徐兴军, 吴菲, 宋金熠, 高世乐

  实验动物与比较医学. 2019, 39(5): 383-389. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2019.05.008

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  目的 观察原花青素(OPC)对大鼠放射性心脏损伤(RIHD)心肌组织白细胞介素-1(IL-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和核因子-κB(NF-κB)蛋白表达的影响,探讨OPC在大鼠RIHD中的可能作用及作用机制。方法 60只雄性SD大鼠,随机分为6组,每组10只,分别为正常对照组,单纯照射组OPC小剂量（50 mg/kg）组、中剂量(100 mg/kg)组、大剂量(150 mg/kg)组、蓝莓(200 mg/kg)组。除正常对照组外,其余各组大鼠给予6 MV X线单次照射心脏,剂量为20 Gy。OPC组和蓝莓组大鼠给予对应药物灌胃。苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织病理变化,免疫组织化学(IHC)和免疫蛋白印迹(WB)法检测大鼠心肌组织IL-1、TGF-β1、NF-κB蛋白表达。结果 大鼠心肌组织免疫组织学化结果显示,与正常对照组相比,IL-1、TGF-β1、NF-κB蛋白吸光度值升高(P<0.05或P<0.01); 与单纯照射组比较,IL-1、TGF-β1、NF-κB蛋白吸光度值降低(P<0.05)。大鼠心肌组织Western blotting表达变化,与正常对照组相比,IL-1、TGF-β1、NF-κB蛋白表达升高(P<0.05); 与单纯照射组比较, IL-1、TGF-β1、NF-κB蛋白表达下降(P<0.05)。结论 OPC可降低RIHD大鼠心肌组织IL-1、TGF-β1、NF-κB蛋白表达水平,防治放疗引起的RIHD,且疗效优于蓝莓。
  
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  天竺葵对脓毒症小鼠肾功能保护作用观察

  陈美玲, 陈烨, 程玉梅, 朱春玲

  实验动物与比较医学. 2019, 39(5): 390-393. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2019.05.009

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  目的 探讨天竺葵在脓毒症小鼠模型中对于肾脏功能的保护作用,并阐明其潜在机制。方法 盲肠结扎穿孔(CLP)手术制作小鼠脓毒症模型,通过评估脓毒症小鼠模型中肾损伤、组织炎症和氧化应激指标,判断天竺葵对于脓毒症小鼠肾功能的保护作用。结果 与模型组比较,天竺葵治疗后脓毒症小鼠血尿素氮(BUN)、血肌酐、尿蛋白、乳酸脱氢酶(LDH)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、视黄醇结合蛋白(RBP)及N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(NAG)水平显著降低。天竺葵还降低了白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)在小鼠血浆的水平,降低了CLP诱导的脓毒症引起的致死率,提高了血清脂质过氧化酶水平,并通过恢复超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶活性(CAT)水平显著增强了抗氧化防御系统能力,使肾功能在脓毒症发作期间得以保护。结论 天竺葵可以有效保护脓毒症小鼠的肾功能。
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  不同年龄SD大鼠脾脏组织显微结构观察

  黄静, 郭洋, 项涛, 吴大鹏, 陈丹, 杨正伟, 李阳友

  实验动物与比较医学. 2019, 39(5): 394-397. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2019.05.010

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  目的 观察不同年龄SD大鼠脾脏组织显微结构特点。方法 从同群正常雄性SD大鼠在不同生长阶段(1日龄、1月龄、2月龄、3月龄、6月龄、12月龄、24月龄和36月龄)随机抽选7只。取完整的脾脏,切取组织块制作甲基丙烯酸树脂包埋切片,经过碘酸-席夫试剂和苏木精染色后光学显微镜下观察脾脏组织显微结构。结果 1日龄没有明显结构,脾脏由密集细胞构成,有脾索和动脉周围淋巴鞘; 1月龄血窦普遍存在,但与脾索界限不明显,边缘区清楚,巨核细胞数量多; 2月龄出现脾小结,主要结构发育完全,被膜增厚; 3月龄至12月龄,红白髓结构比例相对稳定; 24月龄至36月龄,各种结构之间的界限模糊。结论 大鼠脾脏结构发育是一个不断建立、完善和消退的过程,在2月龄前迅速发育完全。
  
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  洗洁精对鸡胚绒毛尿囊膜血管的刺激性评价

  陈梓灵, 徐颖愉, 刘香梅, 刘冬虹, 庞增雄

  实验动物与比较医学. 2019, 39(5): 398-401. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2019.05.011

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  目的 探讨鸡胚尿囊膜试验(Het-Cam)在洗洁精刺激性评价中应用的可行性。方法 将5款洗洁精样品配制成1.5%的水溶液,取100 μL滴加在SPF级鸡胚尿囊膜上,参照出入境检验检疫行业标准SN/T 2329-2009《化妆品眼刺激性/腐蚀性的鸡胚尿囊膜试验》的标准刺激评分(IS)法,对样品的刺激性进行评分。结果 样品C和B刺激性评分较高,分别为10.07和8.84,而样品A和D刺激性评分较低,分别为5.69,6.75。上述4个样品相应的总活性物含量也分别为28.21%、15.34%和16.37%、17.14%。结论 洗洁精刺激性与洗洁精中总活性物含量具有一定的相关性。Het-Cam在洗洁精刺激性评价方面既具有可行性。
  
经验交流
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  一例SD大鼠自发性心脏海绵状血管瘤的病理学观察

  邱波, 王艳, 胡建廷

  实验动物与比较医学. 2019, 39(5): 402-404. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2019.05.012

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  在试验周期为26周的SD大鼠灌胃重复给药毒性试验结束后,溶媒对照组(0.9%生理盐水)中出现一例心脏海绵状血管瘤病例。肉眼形态学观察,该动物心脏肿大,剖检可见病变位于室间隔,与心壁间界限不清晰,呈海绵样结构,颜色为灰黄暗褐色,大小约1.5 cm×0.8 cm×0.5 cm,切面呈蜂窝状。HE染色显示,心肌间由边界不清、扩张、充血、不规则形的血窦构成,血管腔大小不等,管壁常较薄,内衬扁平的内皮细胞,血管腔内有许多红细胞。免疫组织化学染色显示,血管内皮细胞上CD31分子标记物为阳性。结果表明其符合心脏海绵状血管瘤的诊断特征。
  
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  一例小鼠自发性成熟型畸胎瘤

  高亚奇, 陈伟盛, 梁宁, 詹纯列, 张修彦

  实验动物与比较医学. 2019, 39(5): 405-407. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2019.05.013

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  在饲养群中发现一例小鼠腹部自发性肿瘤,通过Micro-CT扫描观测肿瘤CT特征并取患病小鼠肿瘤进行病理检查。肿瘤大小为1.7 cm×1.1 cm×0.7 cm,重1.079 g。扫描结果显示肿瘤密度不均匀,多发结节状,条状高密度骨化影,初步判断为畸胎瘤。肿瘤病理学检查显示肿瘤内部有神经组织、肌组织、上皮组织及软骨组织,判断为畸胎瘤。CT和病理学观测表明,在饲养中发现的是一例小鼠成熟型畸胎瘤。
  
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  头灯下经口直视的大鼠非暴露式气管滴注法的建立

  龙隆, 谭红, 杨鸿波

  实验动物与比较医学. 2019, 39(5): 408-410. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2019.05.014

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  目的 探索建立一种操作便捷而高效的大鼠非暴露式气管滴注方法。方法 选用自制一次性静脉留置针在头灯的照射下行气管插管,用1 mL注射器吸取0.1 mL生理盐水对10只SD雄性大鼠(体质量200~350 g)以2日1次的频率重复操作。结果 共完成40次气管滴注的操作,每只动物的操作耗时约3 min,整个实验操作安全顺利,并未给动物造成创伤,实验过程中及实验结束3 d后动物均无异常反应。结论 该气管滴注方法具有快捷、安全和高效的特点,可广泛应用于大鼠呼吸道给药相关实验研究。
  
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  脉动真空灭菌器对鼠维持饲料灭菌效果和部分营养成分损失率的影响

  薛来恩, 党源, 温福利, 张诗兰, 郑和平

  实验动物与比较医学. 2019, 39(5): 411-414. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2019.05.015

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  目的 研究脉动真空灭菌器对鼠维持饲料灭菌效果和饲料中主要营养成分、维生素和氨基酸损失率的影响,寻找适合屏障系统中维持饲料的脉动真空灭菌方法。方法 采用灭菌参数(121 ℃、110 kPa、20 min)和(132 ℃、193 kPa、7 min)对鼠维持饲料样品进行灭菌。通过比较各组饲料营养成分、维生素和氨基酸的损失率及灭菌效果,综合评价两种灭菌参数的差别,探究脉动真空灭菌器对维持饲料的灭菌方法。结果 两种灭菌参数的灭菌效果确实,除132 ℃、193 kPa、7 min组的维生素A低于国家标准,其余组别的各营养指标都符合国家标准;灭菌后的常规营养指标、维生素、氨基酸都有不同程度的损失,除粗脂肪、天冬氨酸、丝氨酸和赖氨酸外,121 ℃、110 kPa、20 min组鼠维持饲料中营养成分、维生素和氨基酸的损失率均低于132 ℃、193 kPa、7 min组。结论 屏障系统中脉动真空灭菌器灭菌参数121 ℃、110 kPa、20 min较为适合鼠维持饲料的灭菌。
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  不同抗凝剂对大鼠血液生化指标测定结果的影响

  刘颖, 王铁山, 刘珍清

  实验动物与比较医学. 2019, 39(5): 415-417. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2019.05.016

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  目的 观察大鼠血样处理过程中不同抗凝剂对其生化指标的影响。方法 取21 只SD 大鼠,腹主动脉采血并分离得到血清、乙二胺四乙酸(EDTA)-K2抗凝血浆、肝素钠抗凝血浆和柠檬酸钠抗凝血浆,采用全自动生化分析仪分别对血清及3种血浆样品进行12 项生化指标的测定,并进行统计学分析和比较。结果 与血清生化检测值比较,肝素钠抗凝血浆的肌酐(Cre)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(Alb)均明显降低(P<0.05)、乳酸脱氢酶(LDH)明显升高(P<0.05),EDTA-K2抗凝血浆的AST、LDH、碱性磷酸酶(ALP)均明显降低(P<0.05)、Alb明显升高(P<0.05),柠檬酸钠抗凝血浆的总胆固醇(CHO)、尿素氮(UREA)、Cre、AST、肌酸激酶(CK)、LDH、ALP、总蛋白(TP)、Alb均明显降低(P<0.05)。3种抗凝血浆的生化检测值,部分指标间存在差异。结论 药物临床前研究中,不同抗凝剂对其生化指标的影响较大。只有部分生化指标的测定可采用肝素钠抗凝血浆和EDTA抗凝血浆代替血清。
综述
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  实验动物职业过敏症的研究进展

  郑茂恩, 杨春红, 王可洲, 刘涛, 赵元东

  实验动物与比较医学. 2019, 39(5): 418-422. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2019.05.017

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  实验动物过敏症(LAA)是实验动物行业面临的一种新的职业健康危机,已经影响到实验动物从业人员的职业健康安全。本文从国内外对实验动物从业人员过敏症状,研究方法,影响因素和防护措施等方面进行简要综述。