2013年, 第33卷, 第6期　
刊出日期：2013-12-25

  

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专家述评
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  实验动物“地鼠”应正名为仓鼠

  陈安国

  实验动物与比较医学. 2013, 33(6): 415-417. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2013.06.001

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  金黄仓鼠、中国仓鼠是常用的重要实验动物,它们都是仓鼠科(Cricetidae)仓鼠亚科(Cricetinae)动物,但在我国实验动物领域长期被称作“地鼠”。鉴于国际通行的动物分类系统中,鼠科(Muridae)已有地鼠属(Nesokia Gray,1842),且中国就实际分布有印度地鼠Nesokia indica,它是新疆南部与东部的农牧业害鼠,为避免造成分类学上的混乱和实际工作上的困惑,应该将实验动物称“地鼠”的一律正名为仓鼠。金黄仓鼠学名是Mesocricetus auratus,中国仓鼠学名则应是Cricetulus barabensis griseus,乃是黑线仓鼠Cricetulus barabensis的一个亚种。
  
论著
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  Trp53基因剔除小鼠的制备及其在药物致癌性评价中的应用

  林丹, 郑晋华, 庄华, 石吉晶, 林玥琳, 王铸钢, 匡颖

  实验动物与比较医学. 2013, 33(6): 418-424. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2013.06.002

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  目的 建立Trp53基因剔除小鼠模型。方法 本研究拟通过基因工程技术建立Trp53基因剔除小鼠模型,通过RT-PCR、Western-blot等技术检测野生型、杂合子、纯合子小鼠中Trp53基因的表达; 观察三种基因型小鼠自发肿瘤情况并进行病理分析; 以N-甲基亚硝基脲(MNU)为致癌剂,探索该模型用于药物致癌性评价的可行性。结果 DNA、RNA及蛋白水平的研究证实,已成功获得Trp53基因剔除小鼠模型。初步的表型分析显示: Trp53基因纯合缺失小鼠自出生13周起陆续发生肿瘤,至36周时所有观察纯合小鼠均死于肿瘤,以恶性胸腺淋巴瘤为主(60%)。与野生型小鼠相比,基因杂合缺失小鼠对致癌剂的敏感性显著提升,杂合小鼠经75 mg/kg体重的N-甲基亚硝基脲(MNU)诱导,90%的小鼠发生肿瘤,其中86%为恶性胸腺淋巴瘤,而野生小鼠经药物诱导后只有60%发生肿瘤。腹腔注射枸橼酸缓冲液的80只对照组小鼠均未观察到肿瘤的发生。结论 这一模型的建立为Trp53基因功能研究和药物致癌性评价提供了理想的动物模型。
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  Sumf2条件性基因剔除小鼠模型的建立及初步表型分析

  匡昉哲, 庄华, 周涛, 匡颖, 王铸钢

  实验动物与比较医学. 2013, 33(6): 425-432. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2013.06.003

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  目的 建立Sumf2条件性基因剔除小鼠模型,为整体水平研究Sumf2基因的生物学功能创造条件。方法 运用生物信息学,采用ET克隆、同源重组、显微注射等技术成功建立Sumf2条件性基因剔除小鼠模型,并通过该模型与EIIa-cre转基因小鼠交配,获得Sumf2基因剔除小鼠模型,通过PCR、RT-PCR、Western Blot等方法在不同水平验证Sumf2基因的表达; 对该小鼠模型进行初步的表型分析。结果 经胚胎干细胞打靶,获得19个正确同源重组的克隆, 重组效率为20%; 阳性克隆经囊胚注射, 获得2只嵌合体雄鼠; 嵌合雄鼠与C57BL/6J小鼠交配, 获得28只灰鼠, 经PCR鉴定16只为杂合子小鼠,阳性率为57%; 与EIIa-cre转基因小鼠交配, 获得了Sumf2基因剔除小鼠模型,DNA、RNA及蛋白水平证明该基因已成功剔除; 初步的表型观察未发现Sumf2基因剔除小鼠生长发育、血常规及血生化指标等出现异常改变。结论 成功建立Sumf2条件性基因剔除小鼠模型,该基因纯合缺失未发现明显的生长发育异常,为进一步的基因功能研究奠定了基础。
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  兔免疫球蛋白液相芯片的制备及其检测方法的建立

  蔡月琴, 徐剑钦, 徐孝平, 王德军, 黄宇, 吴蔚, 陈民利

  实验动物与比较医学. 2013, 33(6): 433-438. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2013.06.004

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  目的 制备实验兔的免疫球蛋白液相芯片, 建立液相芯片技术(xMAP)检测方法。方法 分别将兔IgG、IgM和IgA亲和纯化的捕获抗体耦联至荧光编码微球,对蛋白耦联量进行优化,制备兔IgG、IgM和IgA液相芯片,同步检测白毛黑眼兔(WHBE兔)和日本大耳白兔(JW兔)血清中IgG、IgM和IgA相对含量,建立可应用于实验兔免疫球蛋白半定量检测的xMAP方法,并对其结果用ELISA方法进行验证。结果 (1)IgG、IgM和IgA的最佳蛋白耦联量分别为10、20和15 μg。(2)xMAP检测结果显示,WHBE兔血清中IgG、IgM蛋白含量显著低于JW兔(P<0.05),IgA蛋白含量显著高于JW兔(P<0.01); ELISA检测结果表明,WHBE兔血清中IgG、IgM蛋白含量显著低于JW兔(P<0.05,P<0.01),其中IgM蛋白含量变化达到极显著水平,IgA蛋白含量显著高于JW兔(P<0.01)。结论 应用制备的兔IgG、IgM和IgA液相芯片建立的xMAP方法,对实验兔血清进行检测,检测结果与ELISA结果一致,提示该方法可应用于实验兔血清的IgG、IgM和IgA半定量检测。
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  复合型AD大鼠模型脑组织、血清及牙周组织中部分炎症因子的表达

  尹秀华, 姜珍, 刘天云, 潘平, 秦婷, 夏春林, 孙茂民

  实验动物与比较医学. 2013, 33(6): 439-443. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2013.06.005

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  目的 初步探讨β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)及D-半乳糖(D-gal)联合构建的复合型阿尔茨海默病(AD)模型中枢神经、血清及牙周组织的炎症因子的表达。方法 采用24只2月龄雄性SD大鼠,共分2组,腹腔注射及侧脑室注射生理盐水的对照组,腹腔注射D-gal联合侧脑室注射A42建立的复合型AD模型组。Morris水迷宫实验检测大鼠的学习记忆能力,HE染色观察神经元数量和形态变化,ELISA方法检测脑组织各部分(皮质、海马)、血清及牙周组织中炎症因子(CRP,IL-1,IL-6,TNF-〈)。结果 与对照组相比,复合型AD模型组大鼠海马、皮质中神经元形态皱缩,数量减少; CRP,IL-1,IL-6,TNF-〈表达水平升高, 血清和牙周组织中的CRP,IL-1,IL-6,TNF-〈表达水平也升高<0.01)。结论 建立复合型AD模型,可较全面地模拟中枢神经炎症; 牙周炎症可能参与了AD的发病进程。
  
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  异种动物代乳用于剖宫产长爪沙鼠种群净化

  韦永芳, 梁成结, 刘寒英, 冯媛瑜

  实验动物与比较医学. 2013, 33(6): 444-447. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2013.06.006

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  目的 探讨长爪沙鼠剖宫产净化种群的代乳方法。方法 在超净工作台对妊娠长爪沙鼠进行剖宫取胎,选择有1~2胎哺乳经验的SPF级NIH、SD母鼠代乳,统计沙鼠的胎间隔、胎鼠成活率和离乳率,绘制代乳胎鼠1~4周的生长曲线,并取净化后2月龄的沙鼠按小鼠微生物学和寄生虫学质量控制国家标准进行检测。结果 长爪沙鼠的平均胎间隔为30.14±4.40 (22~38) d,代乳成活率和离乳率均超过50%,代乳鼠与非代乳鼠的生长曲线在后期无明显差异,微生物学和寄生虫学检测均符合清洁级小鼠的国家标准。结论 NIH、SD母鼠代乳剖宫取胎的长爪沙鼠可以净化种群。
  
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  IVC设备笼内小环境部分指标检测

  汤家铭, 吴文斌, 孙晓琴, 张超超, 米金霞

  实验动物与比较医学. 2013, 33(6): 448-451. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2013.06.007

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  目的 研究在独立通气笼盒设备(IVC)饲养大、小鼠时笼内小环境指标的变化,为制定IVC国家标准提供依据。方法 在IVC笼内饲养小鼠、大鼠时,连续观察笼内温度、湿度和氨浓度指标,探讨换气次数和笼内温度、湿度及氨浓度之间的关系。结果 饲养小鼠的IVC在更换垫料后当日、第2、3日笼内温度要比笼外(室内)温度高1.5~2.2℃,相对湿度高10%~15%,氨浓度则在更换垫料后逐日升高,到第3日测量时氨浓度就高于国家标准。而饲养大鼠的IVC在更换垫料后笼内温湿度逐日升高,换气次数20次/h时更换垫料第3日的笼内温度要高于笼外温度近3℃,相对湿度高于20%; 而氨浓度则在更换垫料后逐日升高,到第3日测量时氨浓度显著超出国家标准。增加换气次数能小幅降低笼内温湿度和大幅减低笼内氨浓度。结论 IVC笼内小环境温度、湿度和氨浓度极易受动物饲养数量、体型大小和换垫料间隔时间的影响而发生改变,从而影响动物实验的结果。为有效降低笼内氨浓度,大鼠IVC笼内的换气次数应在60次/h以上。为保证在IVC笼内饲养动物的安全,有必要对IVC笼内氨浓度进行定期监控。
经验交流
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  斑马鱼饲养管理操作与动物福利

  常嘉, 潘学营, 陆亮, 常艳, 马璟

  实验动物与比较医学. 2013, 33(6): 452-457. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2013.06.008

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  斑马鱼作为一种理想的模式动物广泛的应用于科学试验。近年来,随着对其研究与应用的增加,斑马鱼的使用数量与日俱增。但是对斑马鱼的饲养管理、试验操作和这一系列过程中的动物福利却较少有文献报道,更没有统一的标准。针对此问题,本文综述了相关法规、指导原则及文献,分别对斑马鱼的饲养管理(运输、环境条件、设备维护)、试验操作(繁育、识别标记、麻醉和安死术)和这些过程中的动物福利进行了讨论。旨在为从事斑马鱼相关研究的人员提供参考,保护斑马鱼的福利。
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  浅谈实验动物机构“动物福利伦理关键评价指标”审查制度的建立

  陆嘉琦, 高诚, 林金杏, 王建飞

  实验动物与比较医学. 2013, 33(6): 458-460. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2013.06.009

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  近年来,随着国内实验动物科学的快速发展,以及国内外合作交流的日益频繁,越来越多的实验动物机构认识到动物福利伦理的重要性。“实验动物福利伦理”作为一个健全的实验动物饲养管理和使用计划的必要组成部分,也是一个实验动物机构是否能够得到AAALAC(国际实验动物评估和认证协会)认证的重要评估项目。因此,实验动物机构有必要建立一套完善而有效的“动物福利伦理关键评价指标”审查制度,作为机构自身衡量是否达到国际标准的动物福利伦理水平的重要工具,最终促进国内实验动物管理水平的国际化、标准化、现代化。
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  浅析动物外科教学中存在的伦理学问题

  董敏, 陈莉, 赵志刚, 尤金炜, 田小芸, 杨国斌

  实验动物与比较医学. 2013, 33(6): 461-464. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2013.06.010

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  动物外科教学是医学生临床技能培训的重要内容,其主要是通过动物实验不仅培养医学生的外科基本操作技能、无菌观念、团结协作精神,而且帮助他们树立爱伤观念、尊重爱护动物等伦理学理念。然而,在当前的教学实践中,却普遍存在注重操作技能训练、而忽视对医学生医学伦理(动物实验伦理)思想培养的问题。本文通过对动物外科教学术前、术中、术后三阶段各个细节进行分析,重点探讨各环节中带教老师需要关注的伦理学问题,进一步提高临床医务人员伦理素养。
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  湖南省实验动物管理现状与对策

  周娉, 徐琳本

  实验动物与比较医学. 2013, 33(6): 465-468. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2013.06.011

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  通过对湖南省实验动物管理现状的阐述,分析了湖南省实验动物工作中出现的问题,从提高对实验动物工作重要性的认识、加强动物实验条件平台的建设、加大实验动物科技专项经费投入、实验动物人才保障体系建设、完善实验动物质量保障和监管体系建设,五个方面提出对策,为湖南省实验动物科学事业健康发展提供参考依据。
裸鼹鼠硏究专题
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  裸鼹鼠血液生理生化及尿常规值的测定

  赵善民, 孙伟, 汤球, 余琛琳, 徐晨, 林丽芳, 袁子彦, 张璐, 蔡丽萍, 肖邦, 孙智远, 崔淑芳

  实验动物与比较医学. 2013, 33(6): 469-472. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2013.06.012

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  目的 对裸鼹鼠进行血液生理指标、生化指标和尿常规值测定。方法 采用全自动血细胞分析仪、生化测定仪及尿液分析仪对不同月龄、不同性别裸鼹鼠的血液学指标、生化指标值及尿常规值进行测定。结果 得到了3月龄、6月龄和9周龄以及不同性别裸鼹鼠血液生理生化值与尿常规值; 部分血液生理指标受性别及月龄影响较大。结论 明确了裸鼹鼠部分血液生理生化及尿常规正常范围值,为今后裸鼹鼠研究奠定了基础。
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  裸鼹鼠生长发育指标及主要脏器系数正常参考值测定

  张璐, 袁子彦, 赵善民, 林丽芳, 汤球, 孙伟, 余琛琳, 蔡丽萍, 徐晨, 孙智远, 崔淑芳

  实验动物与比较医学. 2013, 33(6): 473-476. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2013.06.013

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  目的 测定不同周龄裸鼹鼠的生长发育指标及脏器系数正常参考值。方法 以本中心近3年来饲养繁殖的裸鼹鼠为数据来源,测量其生长发育指标及脏器系数。结果 裸鼹鼠生长发育过程中雌雄差异不明显。结论 裸鼹鼠生长发育各项指标及脏器系数参考范围的确定为其实验动物标准化及实验应用提供重要参考数据。
  
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  裸鼹鼠生化位点的初步研究

  林丽芳, 王洪, 赵善民, 肖邦, 孙智远, 张璐, 袁子彦, 于琛琳, 蔡丽萍, 徐晨, 汤球, 孙伟, 崔淑芳

  实验动物与比较医学. 2013, 33(6): 477-480. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2013.06.014

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  目的 研究裸鼹鼠(NMR)的生化位点特征,初步建立裸鼹鼠生化位点的检测方法。方法 以小鼠近交系的生化位点为参照,应用小鼠的检测方法,检测裸鼹鼠的11种同工酶的活性。结果 裸鼹鼠的酯酶-1、转铁蛋白为慢带; 葡萄糖磷酸异构酶-1、苹果酸酶-1、异柠檬酸脱氢酶-1为中间带; 血红蛋白β链、肽酶-3、碱性磷酸酶-1、磷酸葡萄糖变位酶-1、 酯酶-3、过氧化氢酶-2为快带。结论 7只裸鼹鼠的11个生化位点为一致的条带,无多态性,表现为纯合型。
  
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  裸鼹鼠成纤维细胞原代培养方法的建立

  林丽芳, 赵善民, 肖邦, 汤球, 张璐, 袁子彦, 孙智远, 于琛琳, 蔡丽萍, 徐晨, 孙伟, 崔淑芳

  实验动物与比较医学. 2013, 33(6): 481-486. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2013.06.015

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  目的 建立裸鼹鼠成纤维细胞的原代培养方法,研究裸鼹鼠成纤维细胞的生长特性。方法 结合传统的消化培养法和组织培养法进行裸鼹鼠和小鼠成纤维细胞原代培养,CCK-8(cell counting kit)细胞计数比较研究两种物种成纤维细胞的生长速率和细胞周期。以不同浓度接种裸鼹鼠肝脏成纤维细胞,CCK-8计数细胞24 h、72 h、96 h、144 h细胞密度。结果 结合消化培养法和组织培养法两种细胞原代培养方法,裸鼹鼠及小鼠成纤维细胞的生长状态良好。裸鼹鼠成纤维细胞的增殖速率显著高于小鼠成纤维细胞,处于对数生长期的细胞比例与小鼠比较,显著较高。以1.5×10⁴/ml 以上的浓度接种裸鼹鼠成纤维细胞能使细胞在两天内进入细胞生长对数期。结论 结合消化培养法和组织培养法的原代培养方法能提高细胞原代培养的效率,裸鼹鼠成纤维细胞的增殖能力显著高于小鼠。
  
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  裸鼹鼠与C57BL/6J小鼠骨骼肌结构与摄氧能力比较

  袁子彦, 汤球, 孙伟, 张璐, 赵善民, 林丽芳, 余琛琳, 蔡丽萍, 徐晨, 孙智远, 崔淑芳

  实验动物与比较医学. 2013, 33(6): 487-492. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2013.06.016

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  目的 分析比较裸鼹鼠与C57BL/6J小鼠的骨骼肌结构和摄氧能力。方法 采集裸鼹鼠与小鼠的腓肠肌经石蜡切片苏木精-伊红染色,以及经冰冻超薄切片和染色后,然后用光学显微镜和投射电镜观察两个物种骨骼肌的形态结构; 同时对骨骼肌组织进行CD34免疫组化染色,将骨骼肌匀浆后取上清用分光光度法对肌红蛋白的含量进行测定,观察两个分析两个物种摄氧能力的高低。结果 裸鼹鼠骨骼肌肌原纤维比C57BL/6J小鼠粗大,而且肌块、肌束甚至肌原纤维外围都有较多结缔组织; 肌细胞中线粒体数目明显大于C57BL/6J小鼠,而体积则较小,其线粒体的表面积大于C57BL/6J小鼠; 骨骼肌组织中微血管密度明显大于C57BL/6J小鼠;骨骼肌中肌红蛋白的含量是C57BL/6J小鼠的1.5倍。结论 裸鼹鼠骨骼肌比C57BL/6J小鼠发达和粗壮,结缔组织较C57BL/6J小鼠丰富,肌肉更为柔软和灵活; 线粒体总表面积、微血管密度和肌红蛋白含量都较C57BL/6J小鼠高,其摄氧能力比后者更为强大。
  
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  裸鼹鼠骨骼标本的制作及其形态学观察

  赵善民, 肖邦, 余琛琳, 林丽芳, 蔡丽萍, 张璐, 袁子彦, 孙智远, 孙伟, 汤球, 崔淑芳

  实验动物与比较医学. 2013, 33(6): 493-498. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2013.06.017

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  目的 采用传统方法制备裸鼹鼠骨骼标本,对其骨骼系统进行形态学观察。方法 利用水煮法制作裸鼹鼠骨架,与C57BL/6J小鼠骨骼标本比较研究裸鼹鼠骨骼特点,并观察裸鼹鼠股骨三维结构。结果 所制作的裸鼹鼠骨架完整洁净, 没有骨质损伤,裸鼹鼠头骨、椎骨、肋骨、四肢骨均具有适应于穴居习性的特征。结论 裸鼹鼠的骨骼具有典型的适应掘穴生活的特征。