鸡胚胎干细胞饲养层培养体系的建立

›› 2000, Vol. 20 ›› Issue (4): 206-209.

鸡胚胎干细胞饲养层培养体系的建立

解放军第458医院解放军传染病防治中心，广州 510602

收稿日期:2000-08-21 出版日期:2000-01-25 发布日期:2013-03-19

Establishment of the Feeder Layer Optimal Culture System for Chicken Embryonic Stem Cells

Prevention and Therapy Center for Infectious Disease of PLA,The 458 Hospital of PLA, Guangzhou 510602，China

Received:2000-08-21 Online:2000-01-25 Published:2013-03-19

摘要/Abstract

摘要： 采用孵化8～12d鸡胚，用胰酶消化，以含10%NBS的DMEM溶液为培养液，分离获得鸡胚成纤维细胞（CEF），建立了培养鸡ES细胞的饲养层细胞。经过CEF酶活力法筛选，建立了ES细胞的条件培养基，其组成配方为10%NBS、5%FBS、2.5%的鸡胚提取物，1×10⁶/LmLIF，10μg/L人bFGF，40μg/L伴白蛋白，0.14mmolβ-ME的高糖DMEM。鸡类ES细胞（AKP阳性细胞，因未经遗传学和免疫组织化学鉴定，故称类ES细胞）在经丝裂霉素-C处理的饲养层细胞上和条件培养基中可传至9代仍保持良好的增殖能力和未分化状态。

关键词: 鸡, 饲养层, 鸡胚成纤维细胞, 胚胎干细胞

Abstract: The chicken embryos incubated for 8?12 days were trypsinized to dissociate the chicken embryonic fibroblasts （CEF）. CEF were maintained in DMEM containing 4.5 g/L glucose，10% newborn calf serum（NBS） as the feeder layer for culturing chick-en ES cells after treated with 10 mg/L Mitomycin C. In order to define the growth re-quirement for proliferation of ES cells,the sera and the chicken embryonic extract were screened by the methods of testing CEF’s dehydrogenase activity, and the chicken ES cell’s optimal culturing system which composed of DMEM （high glucose） containing 10%NCS，5%FBS，2.5% chicken embryo extract, 10μg/L human bFGF，1×10⁶/L mLIF，40μg/L Conalbumin，and 0.14mmol β-Mercaptoethanol （β-ME） were estab-lished.The alkaline-phosphatase-positive （chicken ES ） cells growing well and main-tained undifferentiated until 9 passages in the feeder layers of the optimal culturing sys-tem.

Key words: Chicken, Feeder layer, Chicken embryonic fibroblast, Embryonic stem cell

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