实验动物与比较医学 ›› 2015, Vol. 35 ›› Issue (4): 283-287.DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2015.04.004
董婉维, 张婀娜, 郭晓冲, 魏政立, 杨葳, 周生来, 赵文, 郑志红
DONG Wan-wei, ZHANG A-nuo, GUO Xiao-chong, WEI Zheng-li, YANG Wei, ZHAO Wen, SHEN Wei, ZHENG Zhi-hong
摘要: 目的 构建金黄仓鼠载脂蛋白A5(Apoa5)基因表达载体以及在不同组织中的表达差异分 析,为深入研究Apoa5基因在金黄仓鼠不同组织中功能奠定基础。方法 提取金黄仓鼠肝脏组织总RNA,采用RT-PCR方法对金黄仓鼠 Apoa5基因的cDNA进行克隆,构建Apoa5基因表达载 体并将其转染293T细胞,分别采用RT-PCR和Western blot方法检测mRNA及蛋白质表达水平。采用荧光定量PCR检测并分析 Apoa5 mRNA在8个组织中的表达量。结果 经PCR检测鉴定, Apoa5基因表达载体构建成功, 经测序分析金黄仓鼠Apoa5基因cDNA全长1 243 bp, 编码366个氨基酸,与人、大鼠、小鼠等物种比对,核苷酸和氨基酸序列均具有较高的同源性,金黄仓鼠与 人、大鼠、小鼠的氨基酸同源性分别为75%、84%、84%。转染293T细胞48 h后,RT-PCR和Western blot结果表明,Apoa5基因在mRNA和蛋白质水平都有表达。荧光定量PCR结果显示, Apoa5 mRNA在肝脏表达量最高,在脑和睾丸中中度表达,在心、脾脏、肺、肾、卵巢组织中低 度表达。结论 成功构建Apoa5基因表达载体并分析其在不同组织中的表达差异,为制备Apoa5 转基因金黄仓鼠动物模型以及研究Apoa5基因在金黄仓鼠脂类代谢中的功能奠定基础。
中图分类号: