2015年, 第35卷, 第6期　
刊出日期：2015-12-25

  

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论著
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  西藏小型猪慢性肺动脉高压动物模型的建立

  刘蓉, 侯梦, 廖海星, 张新凤, 赵瑾, 刘宝骅, 钱元新, 吴清洪, 莫自耀, 廖东江, 李洪涛, 顾为望

  实验动物与比较医学. 2015, 35(6): 431-435. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2015.06.001

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  目的 采用野百合碱(MCT)诱导方法建立幼龄西藏小型猪慢性肺动脉高压(PH)动物模型, 并通过右心导管术和肺脏结构形态进行评价。方法 2月龄西藏小型猪12头, 体质量5.0~6.0 kg。随机均分为实验组(MCT组)和对照组,分别腹腔注射给予MCT 12.0 mg/kg和同样剂量的溶剂(体积分数75%乙醇); 6周后采用右心导管术测定小型猪肺动脉压; 观察小型猪右心肥大指数和肺组织病理改变。 结果 与对照组相比,MCT组西藏小型猪平均肺动脉压显著增加(24.62±1. 38 mmHg vs 15.10±0.76 mmHg,P<0.01)。肺组织有明显血管堵塞、血管腔消失,也可见肺小 血管重构,有肺小动脉闭塞、向心性内膜增厚(丛状血管)的改变。实验组小型猪右心肥大指数增 加明显(0.36±0.16 vs 0.28±0.13, P<0.01)。 结论 通过腹腔注射MCT 6 周后,可以建立西藏小型猪慢性PH动物模型,其病理特征与人类PH临床指标相似。
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  肺不张后复张小型猪肺泡表面活性物质A的表达及CT比较

  涂军伟, 王赛斌, 盛怡俊, 陈慧君, 田江华, 盛琳, 应明亮, 胡斌, 何忠平

  实验动物与比较医学. 2015, 35(6): 436-514. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2015.06.002

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  目的 探讨肺不张后复张过程中小型猪肺泡表面活性物质A(SPA)的表达及多层螺旋计算 机断层扫描(CT)影像学变化。方法 采用18只中国实验用小型猪I系为实验动物,在支气管镜下置入封堵器造成肺不张模型,分别在肺不张后3 d、1周及2周取出封堵器,运用CT观察各组肺复张情况,在取出封堵器后2周取实验肺组织,采用免疫组织化学检测SPA的表达。 结果 SPA在肺不张2周组表达下降,与3 d组、1周组比较存在统计学差异(P<0.05)。CT下比较3组单侧 肺不张面积无统计学差异(P>0.05),而在复张过程中,3 d组残留肺不张面积最少,与1周组、2周组比较存在统计学差异( P<0.05)。取出封堵器后,肺不张1周、2周组之间CT弧度值无明显差 异(P>0.05),但均高于3 d组(P<0.05)。 结论 肺复张后SPA表达随肺不张时间延长而减少;肺不张后肺复张CT影像学改善取决于发生肺不张时间,此时间在一周内为佳。
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  高脂膳食和跑台运动对雄性大鼠腓肠肌腺苷酸活化蛋白激酶 /乙酰辅酶A羧化酶信号通路和膜蛋白脂肪酸转位酶蛋白含量的影响

  张云丽, 娄淑杰

  实验动物与比较医学. 2015, 35(6): 441-447. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2015.06.003

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  目的 探讨高脂膳食和8周有氧耐力运动对大鼠腓肠肌腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/乙酰 辅酶A羧化酶(ACC)信号通路和膜蛋白脂肪酸转位酶CD36含量的影响。方法 建立营养性肥胖大鼠模型,并随机分为肥胖安静组(OC组)和肥胖运动组(OE组),另设普通饲料安静组(NC组)和 普通饲料运动组(NE组)。运动干预结束后检测腓肠肌AMPKa 、p-AMPKa、ACC、p-ACC和膜蛋白CD36的蛋白水平。 结果 1) NE组与NC、OE及OC组相比,p-AMPKa的蛋白水平显著升高( P<0.01); OC组p-AMPKa的蛋白水平显著低于NC组(P<0.01)。2) OC组p-ACC蛋白水平显著低于NC组(P<0.01); OE组p-ACC的蛋白水平显著高于OC组(P<0.01)。3) NE组与NC、OE及OC组相比,OC组与NC组相比,膜蛋白CD36含量均无显著性变化( P>0.05)。 结论 1) 运动可改善高脂膳食引起的AMPK/ACC信号通路障碍。2) 运动对体质量不同大鼠p-ACC蛋白水平的影响存在差异。3) 腓肠肌膜蛋白CD36的含量并没有伴随AMPK/ACC信号通路的激活或抑制而发 生显著变化。
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  子痫前期大鼠模型建立及相关指标监测

  周晶, 严国锋, 罗章源, 陈东宝, 陈学进, 李垚

  实验动物与比较医学. 2015, 35(6): 448-452. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2015.06.004

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  目的 使用SD大鼠构建子痫前期动物模型,并采用遥测法监测模型大鼠的动脉血压,分 析掌握模型动物在自由活动状态下的血压及其他各项生理生化指标。方法 将16只SD大鼠分为4组, 遥测模型组A: 大鼠植入遥测子并构建子痫前期模型。模型组B: 仅构建子痫前期模型。遥测对照组C: 植入遥测子并制作模型假手术。对照组D: 仅制作子痫前期假手术。A、C组在遥测子植入后连续监测血压数据。各组收集妊娠13.5 d、20.5 d尿液检测尿总蛋白、尿肌酐。妊娠21.5 d临产前将母鼠安乐死,取肝、肾、胎盘组织进行HE染色。 结果 模型组A制模2 d后平均动脉压、收缩压、舒张压较对照组C显著上升(P <0.01),妊娠21.5 d时平均动脉压、收缩压、舒张压较对照组C显著降低(P <0.01)。模型组A、B尿总蛋白/肌酐比值显著高于对照组C、D (P<0.01),同时A、B两组肝、肾、胎盘组织结构也出现了改变,并且出现70.49%胎鼠发育停止。 结论 成功构建子痫前期大鼠模型,获得大鼠在自由活动状态下的动脉压、尿生化、胎盘胎鼠发育情况, 掌握了模型动物在妊娠期真实的、连续的血压变化周期。该模型或可成为子痫前期疾病研究的理 想动物模型。
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  孕中期限饲法建立胎儿宫内生长受限小鼠模型

  刘学旭, 杨文, 丁运萍

  实验动物与比较医学. 2015, 35(6): 453-457. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2015.06.005

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  目的 研究孕中期限饲法建立胎儿宫内生长受限(FGR)模型的可行性。方法 将90只(雌性60只,雄性30只)3月龄KM小鼠随机分为对照组,模型I、II、III和IV组,每组雌12只、雄 6只,雌雄2∶1合笼。所有孕鼠在妊娠10 d前自由采食, 从妊娠10 d, 模型I、II、III和IV组分别给予对照组相对应孕期80%、70%、60%和50%的日粮, 对照组自由采食。 结果 对照组、模型I、II、III和IV组: 妊娠15 d孕鼠体质量分别平均增长26.03 g、21.31 g、19.09 g、16.96 g和13.19 g, 模型组孕鼠体质量增长均低于对照组(模型II组P<0.05、模型III组和IV组 P<0.01); 平均窝重分别是21.12 g、19.20 g、18.95 g、15.59 g和12.99 g, 模型组胎仔平均窝重低于对照组(模型 III组P<0.05、IV组P<0.01); 模型I、II、III和IV组FGR发生率分别为42.97%、66.17%、66.38% 和54.26%, 与对照组(4.76%)比较显著增高(P<0.01); 模型组新生胎儿脏器平均质量除脑组织、模型IV组的心脏、肝脏外均明显低于对照组( P<0.05)。 结论 孕中期限饲法建立胎儿宫内生长受限动物模型是可行的,其中给予正常孕鼠同期60%~70%的日粮建立FGR模型效果较佳。
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  1,25-二羟基维生素D3对链脲佐菌素致胰岛素瘤细胞损伤的保护与修复作用

  何大伟, 倪程佩, 王禹斌, 王婧, 周正宇

  实验动物与比较医学. 2015, 35(6): 458-461. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2015.06.006

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  目的 初步探讨1,25-二羟基维生素D3(1,25-(OH)₂D3)对链脲佐菌素(STZ)所致大鼠胰岛素 瘤(INS-1)细胞损伤的保护与修复作用。方法 将INS-1细胞接种于培养板中,置于CO₂培养箱 中进行培养,药物干预后,应用细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞增殖活力,ELISA法分别检测培 养液中的胰岛素浓度、丙二醛(MDA)浓度和总抗氧化能力(T-AOC)。 结果 1,25-(OH)₂D3可以促进INS-1细胞的活力和胰岛素的分泌( P<0.01)。STZ所致模型组的细胞活力降低(P<0.001),胰岛 素分泌量减少(P<0.01),MDA含量明显升高(P <0.01),T-AOC能力下降(P<0.01)。与STZ组比较, 1, 25-(OH)₂D3保护组与修复组在不同程度上改善了上述指标( P<0.01)。 结论 1,25-(OH)₂D3可以促进INS-1细胞分泌胰岛素,对STZ损伤的胰岛细胞具有一定的保护与修复作用。
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  植入式迷走神经刺激器对红藻氨酸诱导兔癫痫模型的影响

  殷音, 周慧英, 肖春兰, 张新国, 周正宇, 王婧

  实验动物与比较医学. 2015, 35(6): 462-466. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2015.06.007

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  目的 研究植入式迷走神经刺激器(VNS)对实验兔癫痫模型的影响。方法 实验兔大脑皮层下注射红藻氨酸,诱导癫痫模型。将螺旋电极安装在实验兔迷走神经上,VNS植入左侧背部 皮下。将18只实验兔随机分为3组,A组(n=6)仅造模,假手术不植入VNS; B组(n=6)和C组(n=6)在安装VNS 1周后进行如下操作: B组在造模前2 h开启迷走神经刺激; C组造模后立即开启刺激。分别观察以上3组兔临床反应及脑电波,最后病理学观察VNS与相邻肌肉的生物相容性。 结果 癫痫模型诱导成功,癫痫临床表现明显; VNS植入后实验兔存活率100%, 未见明显异常。B组癫痫波减少,脑电图逐渐平稳,癫痫临床表现缓解; 而C组癫痫症状有一定改善,病理学观察未见VNS相邻的肌肉组织异常。 结论 植入式VNS对实验兔癫痫模型具有一定的干预效果,且提前开启 迷走神经刺激效果较好,植入式VNS生物相容性良好。
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  猴巨细胞病毒巢式PCR检测方法的建立与初步应用

  王莎莎, 贺争鸣

  实验动物与比较医学. 2015, 35(6): 467-472. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2015.06.008

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  目的 建立猴巨细胞病毒(SCMV)特异的巢式PCR检测方法并研究实验猴群和猴源性生 物制品中SCMV感染或污染情况。方法 比对分析多株SCMV序列,设计SCMV特异引物,优化巢式PCR实验条件,建立的巢式PCR方法经验证后检测实验猴群和猴源性生物制品。 结果 经特异度和灵敏度鉴定,在设计的4对引物中确定一对最佳引物,可以区分SCMV和人巨细胞病毒 (HCMV)、小鼠巨细胞病毒(MCMV)、单纯疱疹病毒(HSV)以及犬疱疹病毒(CHV),且可以检测到的 最小DNA量为18 pg/mL。PCR方法检测实验猴群和相关生物制品,发现SCMV在实验猴群中广 泛存在,在相关生物制品中有感染的风险。 结论 经测序验证,PCR检测方法具有很好准确性,初步应用表明我国实验猴群中SCMV高度流行,应加强实验猴群及相关生物制品中SCMV的监测, 避免人类感染SCMV的潜在风险。
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  长爪沙鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒抗体ELISA检测方法的建立与应用

  王吉, 卫礼, 付瑞, 李晓波, 王淑菁, 邢进, 冯育芳, 巩薇, 岳秉飞, 贺争鸣

  实验动物与比较医学. 2015, 35(6): 473-477. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2015.06.009

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  目的 建立长爪沙鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)抗体ELISA检测方法, 应用于长爪沙鼠携带LCMV的检测。方法 培养Vero细胞,接种LCMV毒种,制备Vero正常抗原和LCMV特异抗原,滴定酶结合物、正常抗原及特异抗原最佳工作浓度,并进行方法的特异度、灵敏度、 精密性、稳定性实验。 结果 正常抗原、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为0.4 mg/mL、10 mg/mL和1∶5 000; 正常抗原、特异抗原批内变异系数分别为6.8%和8.9%,批间平均变异系 数分别为9.3%和8.4%; 检测灵敏度达到1∶1 280; 与小鼠仙台病毒(SV)、小鼠呼肠孤病毒3型(Reo3)均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于25%。 结论 建立的ELISA方法特异度、灵敏度强,重复性、稳定性好,可用于长爪沙鼠LCMV抗体的检测。
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  染色体替换系的方案构建及评价

  赵莹, 赵丽亚, 晁天柱, 张蓉, 邢正弘, 陈国强, 肖君华

  实验动物与比较医学. 2015, 35(6): 478-483. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2015.06.010

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  目的 为缩短复杂性状相关基因精细定位时间,构建染色体替换系(CSSs),并对构建方 案进行评价。方法 以供体小鼠作为母本、受体C57BL/6小鼠作为父本进行杂交, 获得N1代小鼠。将N1代雄性小鼠与C57BL/6雌性小鼠杂交, 获得N2代小鼠。选择N2代1号染色体非重组的雄性小鼠与C57BL/6雌性小鼠回交, 获得N3代回交小鼠; 通过短串联重复序列(STR)与单核苷酸多态性(SNP)对每代一定数量的子代进行遗传分析, 依次回交10代, 选择N10代1号染色体未重组的样本, 雌雄交配, 挑选1号染色体为纯合且来自供体品系的子代小鼠, 用于繁殖纯合后代。通过基因芯片扫描鉴定替换系的纯合度,并与期望值比较。 结果 根据构建的CSSs方案, 得到2个不同的CSSs, 通过基因芯片扫描得到的替换系纯合度与期望值接近。 结论 构建的CSSs方案可完成(部分)近交系小鼠品系目标染色体替换, 供体品系背景基因组中99.59%以上已被受体C57BL/6小鼠替换,证明构建的CSSs方案可行。
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  拉布拉多犬X/Y 精子分选及性别控制冷冻精液制备实验研究

  高一龙, 秦海斌, 温海, 强京宁, 贺星亮, 张汇东, 马大君, 朱骞, 李刚

  实验动物与比较医学. 2015, 35(6): 484-489. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2015.06.011

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  目的 探讨流式细胞分选技术在分离拉布拉多犬X、Y 精子方面的应用,并研究拉布拉多犬性别控制(性控)冷冻精液的制备方法。方法 人工按摩刺激法采集8只拉布拉多种公犬精液, 利用SX_MOFLO流式细胞仪展开X、Y 精子分离实验,并对分离后的X/Y精子冷冻、解冻后进行精液重分析和品质鉴定。 结果 流式细胞仪分选的X/Y精子纯度达到89%以上(89%~91%),X精子平均分离速度(4 260 个/s) 极显著高于Y 精子分离速度(3 930个/s)(P<0.01); 常规冷冻精液和X、Y 型冷冻精液性别比差异显著(P<0.05); 冻融后活率则无明显差异(P>0.05) ; 常规冷冻精液与X、Y 型冷冻精液解冻后1 h存活指数差异明显(P<0.05) ,分别为0.251±0.006、0.054±0.007 和0.048±0.006; 冻融后顶体完整率差异显著(P<0.05), 分别为77.00%±0.98%、84.66%±1.22%和84.01%±1.23%。 结论 用流式细胞分选技术可以获得高纯度的拉布拉多犬X/Y冷冻精液, 性别比和精液品质达到低剂量人工授精的要求。
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  生物遥测技术监测清醒状态下普通棉耳狨猴的心电生理特性

  李娜, 王文誉, 何巍, 丁爽爽, 奚剑飞, 徐皓, 张周

  实验动物与比较医学. 2015, 35(6): 490-494. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2015.06.012

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  目的 采用生物遥测法监测清醒状态下狨猴心率、体温、血压及心电图各项指标。方法 在普通棉耳狨猴体内埋置生物传感器, 恢复两周后, 采用Dataquest A.R.T. 4.3系统连续监测24 h的心率、体温、血压和心电图指标, 并于第二周、第三周各重复一次。 结果 在整个实验过程中,该方法所监测指标基本维持正常水平,心率为(148.12±15.94)~(256.85±25.67) 次/min,体温为(35.60±0.23)~(38.67±0.75) ℃,平均动脉压为(67.45±8.96)~(94.95±11.62) mmHg,白天的各项心电指标高于夜间,且三次实验及平均值间比较无显著差异( P>0.05)。 结论 成功建立了生物遥测方法, 可以准确监测清醒状态下普通棉耳狨猴的心电生理指标。
经验交流
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  不同种群比格犬单核细胞、T淋巴细胞检测

  刘宏, 王冰, 黄凯, 项路娟, 孙红梅, 尹燕博

  实验动物与比较医学. 2015, 35(6): 495-500. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2015.06.013

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  目的 检测3个种群健康成年比格犬外周血单核细胞及T淋巴细胞免疫表型分布,建立 相应的正常参考范围。方法 选择三个种群健康成年比格犬: Charles River(大体型)、Covance(中体型)、自繁(小体型)各30只,血样用三色特异性T淋巴细胞亚群及单色单核细胞荧光抗体进行 荧光标记,流式细胞仪检测CD14、CD3、CD4、CD8标记的样品。 结果 (1)外周血白细胞中单核细胞占比大体型比格犬明显高于其他两组( P<0.05); (2)CD4⁺淋巴细胞在T淋巴细胞中占比大体型比格犬明显高于其他两组( P<0.05); CD8+淋巴细胞在T淋巴细胞中的占比中体型比格犬明显高于其他两组( P<0.05); CD4⁺/CD8⁺小体型明显高于其他两组( P<0.05)。 结论 大体型比格犬自身免疫能力比较强,小体型比格犬具有数据比较稳定、体型小、容易操作等优点。建立了不同种群比 格犬的淋巴细胞免疫表型及单核细胞的参考范围。
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  实验动物从业人员培训考核评价系统的开发

  余琛琳, 孙晓希, 蔡丽萍, 汤球, 李莉

  实验动物与比较医学. 2015, 35(6): 498-503. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2015.06.014

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  目的 开发一款适用于实验动物从业人员培训考核评价的管理软件。方法 本系统利用ASP.NET4.0技术,采用VB.NET编码语言和SQLServer数据库,同时将Dreamweaver8.0和Visual Studio2010两种软件结合实现界面和编码,按照实验动物从业人员培训考核的要求,研究开发实 验动物从业人员培训考核评价软件。 结果 本系统设置了用户类别管理、用户信息管理、考核项目指标和权重参数管理、考核指标项目分数录入管理、考核成绩统计分析管理、联机管理6大模块,界面简洁友好,操作简易灵活。 结论 本系统适用于实验动物从业人员培训的评价和管理。
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  江苏省突发实验动物生物安全事件应急预案的编制

  陆建玲, 单斌, 孙兴莲, 孟庆如

  实验动物与比较医学. 2015, 35(6): 510-514. https://doi.org/10.3969/j.issn.1674-5817.2015.06.016

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  为快速有效应对突发实验动物生物安全事件,最大限度地减轻对公众健康、实验动物生 产和使用等造成损害,江苏省制定了突发实验动物生物安全事件应急预案。本文分析了突发实验 动物生物安全事件应急预案编制的必要性和指导思想,介绍了江苏省突发实验动物生物安全事件 应急预案的编制依据和主要内容。
总目次
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  《实验动物与比较医学》第35卷第1~6期总目次

  实验动物与比较医学. 2015, 35(6): 515-520.

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