大鼠肝卵圆细胞增殖模型建立及其纯化鉴定

›› 2004, Vol. 24 ›› Issue (1): 7-10.

大鼠肝卵圆细胞增殖模型建立及其纯化鉴定

1.上海第二医科大学附属瑞金医院感染病科，上海 200025；2.苏州大学附属第一医院感染病科，苏州 215006

收稿日期:2003-11-11 出版日期:2004-01-25 发布日期:2013-03-19

Establishment of Hepatic Oval Cell Proliferation Model and Purification of Hepatic Oval Cell

1.Department of Infection Disease，Ruijin Hospital,Shanghai Second Medical University, Shanghai 200025，China 2.First AffiLated Hospital，Suzhou University，SuZhou 215006，China

Received:2003-11-11 Online:2004-01-25 Published:2013-03-19

摘要/Abstract

摘要： 为建立大鼠卵圆细胞增殖模型，分离纯化卵圆细胞并对其特性进行研究，SD大鼠喂饲2-乙酰氨基芴（2-acetyailamifluorene，2-AAF），剂量分别为5、10、15、20mg/kg，连续给药6d，于第7天行三分之二部分肝切除，术后继续给药1周，每隔3 d取肝组织行常规组织学观察，作细胞增殖试验及免疫组化染色。通过免疫磁珠标记C-kit阳性细胞以纯化卵圆细胞（Magnetic activated cell sorting，MACS），用免疫细胞化学及RT-PCR对纯化细胞进行鉴定。结果：10、15、20mg/kg三种剂量2-AAF均可成功建立卵圆细胞增殖模型，卵圆细胞增殖于第8天较明显，至第11天达高峰，第14天有所减少。卵圆细胞胞核Brdu染色阳性，其除表达卵圆细胞特异性抗原OV6外，尚表达肝细胞标记白蛋白及胆管细胞标记CK19。胚胎期肝细胞抗原AFP、连接蛋白43在卵圆细胞中亦有高表达，同时还表达造血干细胞标记C-kit。以MACS纯化的C-kit阳性卵圆细胞，90%以上为OV6阳性，并有AFP、白蛋白、CK19mRNA转录。结论：2-AAF剂量为10～20mg/kg时可获得满意的大鼠卵圆细胞增殖模型，增生的卵圆细胞为具有双向分化潜能的肝干细胞/前体细胞，利用C-kit标记通过MACS可纯化这种肝干细胞/前体细胞。

关键词: 卵圆细胞, 肝前体细胞, 干细胞, 免疫组化

Abstract: To establish a rat model for hepatic oval cells proliferation and to analyze the characterization of oval cell,SD rats （about 150 g） were given 2-acetylaminofluorene （2-AAF）6 days before partial hepatectomy and 7 days after it. Liver tissue specimens were obtained every 2?3 days after partial hepatectomy and were investigated by HE staining and immunohistochemical staining for Brdu，OV6，cytokeratin-19，albumin，AFP, connexin-43 and C-kit. Oval cells were enriched by magnetic activated cell sorting （MACS） using C-kit antibody.RT-PCR was per-formed on sorted cells for the albumin，AFP and CK19 messenger RNA expression. Results：Ob-vious oval cell proliferation was seen in the liver in 10 mg/kg，15 mg/kg,20 mg/kg groups and o-val cell Brdu incorporation test is positive. Oval cells expressed the specific marker OV6，hepatic cell marker albumin, biliary cell marker CK19，fetal liver cell marker AFP and connexin-43 as well as hematopoietic stem cell receptor C-kit. More than 90% sorted oval cells were OV6 positive and all expressed the albumin,AFP and CK19 gene. Conclusions：Rat model for hepatic oval cell proliferation can be established with 2-AAF/partial hepatectomy at dosage of 10?20 mg/kg body weight. And such oval cells were hepatic stem/progenitor cells which expressed OV6/ CKl9/albumin/AFP/connexin43/C-kit. Oval cell population can be highly enriched with MACS using C-kit.

Key words: Oval cell, Hepatice progenitor cell, Stem cell, Immunohistochemistry

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